馬尾藻巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞降膽固醇作用及機(jī)理研究.pdf

1、本文對湛江馬尾藻中提取的巖藻聚糖進(jìn)行研究，利用體外化學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)綜合評價(jià)六種不同馬尾藻中的巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性，并對活性最佳的馬尾藻巖藻聚糖粗多糖進(jìn)行分離純化及測定其理化性質(zhì)，探討不同級分巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞的降膽固醇作用及作用機(jī)理，已期為馬尾藻降膽固醇的作用研究提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容如下:
　　(1)通過比較粗多糖對膽固醇膠束溶解度的抑制率、膽酸鹽結(jié)合率以及HepG2細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平的影響，綜合評價(jià)分別來自六

2、種馬尾藻（張氏、亨氏、圍氏、半葉、硇洲及全緣馬尾藻）的巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性，發(fā)現(xiàn)多糖含量、硫酸基含量、巖藻糖含量分別為33.37％、13.63％、7.91％的張氏馬尾藻巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性最佳。
　　(2)通過DEAE-52層析柱對張氏馬尾藻巖藻聚糖粗多糖進(jìn)行分級純化，獲得三個(gè)不同的巖藻聚糖級分ZF1、ZF2、ZF3，其多糖含量分別為58.29％、60.84％、54.26％;巖藻糖含量分別為4.94％、17.81％、2

3、6.01％;硫酸基含量分別為3.29％、19.39％、18.89％。采用糖腈乙酸酯衍生法處理巖藻聚糖后經(jīng)GC-MS測定單糖組成，三級分均含有Fuc（巖藻糖）、Xyl（木糖）、Glc（葡萄糖）、Man（甘露糖）、Rha（鼠李糖）和Gal（半乳糖），但百分含量各不相同。
　　(3)通過比較三種不同級分張氏馬尾藻巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞降膽固醇作用實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，ZF1、ZF2、ZF3三個(gè)級分的中高濃度（200μg/mL、800μg/mL）可

4、降低細(xì)胞內(nèi)TC水平(p＜0.05)，且作用24 h時(shí)效果優(yōu)于48 h，并且明確顯示ZF2級分作用效果最佳。從濃度和時(shí)間效應(yīng)上考察ZF2降膽固醇活性發(fā)現(xiàn)，ZF2的降膽固醇活性具有一定的濃度和時(shí)間依賴性。中高濃度ZF2(200μg/mL、800μg/mL)可以降低HepG2細(xì)胞內(nèi)TC含量、促進(jìn)TBA排出、增加ApoA1分泌、減少ApoB分泌(p＜0.05)，而低濃度ZF2(50μg/mL)效果則相反;ZF2(800μg/mL)分別作用Hep

5、G2細(xì)胞0、12、24、36、48 h后，在24 h可以最大程度降低HepG2細(xì)胞內(nèi)TC水平、促進(jìn)TBA排出、增加ApoA1分泌、減少ApoB分泌(p＜0.05)，24 h后作用程度逐漸減小，直至恢復(fù)至正常水平。
　　(4)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測定巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞中SREBP-2、LDLR、HMGCR、LXR-α、ABCA1、CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響，結(jié)果表明，50、200、800μg/mL ZF2作用Hep

6、G2細(xì)胞24 h后，各基因mRNA的表達(dá)量均有上升趨勢，但只有濃度為800μg/mL時(shí)，各基因mRNA的表達(dá)量均具有顯著性(p＜0.01);在0、12、24、36、48 h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，800μg/mL濃度的ZF2作用細(xì)胞24 h可以最大程度地促進(jìn)LDLR、HMGCR、LXR-α、ABCA1 mRNA的表達(dá)(p＜0.05)，48 h可最大程度地促進(jìn)CYP7A1 mRNA的表達(dá)(p＜0.05)。推測張氏馬尾藻巖藻聚糖降膽固醇的機(jī)理可能是: