菝葜皂苷元致肝癌HepG2細(xì)胞凋亡作用機理的研究.pdf

1、菝葜皂苷元是一種具有抗腫瘤活性的甾體皂苷。為了研究它的抗腫瘤活性及其抗腫瘤機理,我們選用了肝癌HepG2細(xì)胞作為模型進行研究。首先,我們分析了菝葜皂苷元對HepG2細(xì)胞的抑制效果,然后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測了藥物處理后細(xì)胞周期比例,最后結(jié)合乳酸脫氫酶活力測定證明了藥物致細(xì)胞凋亡的特性。通過短時間MTT法,研究了藥物對細(xì)胞線粒體活力的影響,結(jié)合線粒體膜電位分析以確定細(xì)胞線粒體是否去功能化。然后,我們分析了藥物對細(xì)胞內(nèi)氧化還原壓力的影響,測定了

2、瞬時ROS爆發(fā),ROS和GSH水平在2小時后的水平變化,同時分析了鈣離子在藥物作用后濃度的瞬時變化。運用胞內(nèi)外鈣離子螯合劑分析了ROS產(chǎn)生與鈣離子的關(guān)系。最后,我們對細(xì)胞內(nèi)磷酸化Akt水平以及細(xì)胞色素c從線粒體釋放水平作了western blotting分析。 實驗結(jié)果證實,菝葜皂苷元對HepG2細(xì)胞具有很強的凋亡效果。在凋亡的早期過程中,首先依賴鈣離子的ROS在短時間內(nèi)爆發(fā),隨后,ROS的積累導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)氧化壓力的增加,伴隨而

3、來的是線粒體失活與膜電位的耗散。細(xì)胞色素c表達(dá)量顯著升高,并大量釋放進入胞質(zhì)中。磷酸化Akt(Thr-308)含量顯著減少,同時磷酸化Akt(Ser-473)含量也呈減少的趨勢,但是總Akt含量并未發(fā)生顯著變化。 本實驗充分證明菝葜皂苷元導(dǎo)致HepG2細(xì)胞凋亡是通過線粒體途徑完成的,在這一過程中ROS作為早期信號發(fā)揮著重要作用。同時對于正常肝細(xì)胞,菝葜皂苷元沒有明顯抑制效應(yīng)這一事實揭示了其作為具有低副作用的抗腫瘤藥物的潛在價值。