17-DMAG對肝癌HepG2細(xì)胞的作用研究.pdf

1、研究背景：肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類的生命健康。我國肝癌的發(fā)病患者占全球總數(shù)的55％，每年約有11萬人死于肝癌。傳統(tǒng)的外科手術(shù)及化療或放療等方法都有其局限性，需要我們尋找治療肝癌的新方法。研究表明熱休克蛋白90(Heat shockprotein90)是細(xì)胞內(nèi)重要的分子伴侶之一，參與細(xì)胞內(nèi)多種蛋白的折疊、裝配及運(yùn)轉(zhuǎn)，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著重要作用，已成為治療腫瘤的新靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過研究HSP90抑制劑17-DMAG對肝癌

2、細(xì)胞的作用，為肝癌的治療尋找新途徑。
　　 目的：研究HSP90新型抑制劑17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格爾德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin，17-DMAG)對肝癌細(xì)胞株HepG2增殖及凋亡的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 方法：以不同濃度的17-DMAG及5mg/L的DDP作用于對數(shù)生長期的肝癌HepG2細(xì)胞，應(yīng)用MTT比色法檢測其

3、吸光度(OD)值，計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，計(jì)算出17-DMAG對肝癌細(xì)胞株HepG2的半數(shù)有效抑制濃度(IC50)，在光學(xué)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測經(jīng)17-DMAG及DDP作用后HepG2細(xì)胞的凋亡率的變化。
　　 結(jié)果：MTT法顯示17-DMAG能抑制肝癌HepG2細(xì)胞的生長增殖，100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L、1000nmol/L的17-DMAG及

4、5mg/L的DDP作用于HepG2細(xì)胞24小時細(xì)胞增殖抑制率(％)分別為：15.22±1.66、23.46±1.40、37.20±2.36，48.24±1.76，14.53±1.65；48小時細(xì)胞增殖抑制率(％)分別為：23.43±1.55、34.76±1.67、56.49±3.84、60.24±3.15、28.38±2.55；72小時細(xì)胞增殖抑制率(％)分別為30.23±2.12、44.24±1.94、62.58±4.18、71.27

5、±2.82、35.49±2.31。隨著藥物濃度增大，作用時間的延長，細(xì)胞增殖能力逐漸下降，呈時間-劑量依賴性，不同藥物組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，250nM的17-DMAG低濃度水平較DDP組對HepG2細(xì)胞的抑制率明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。光學(xué)顯微鏡觀察17-DMAG作用48h后HepG2細(xì)胞密度減低，細(xì)胞體積變小，隨著藥物濃度增大，貼壁細(xì)胞數(shù)目明顯減少。Annexin-FITC/PI雙染法檢測結(jié)果顯示，400n

6、mol/L17-DMAG干預(yù)48小時后細(xì)胞早期凋亡率(％)為22.42±1.83，5mg/L順鉑干預(yù)48小時后細(xì)胞早期凋亡率(％)為6.50±1.20，正常對照組48小時后細(xì)胞早期凋亡率(％)為0.58±0.49，表明17-DMAG能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，且17-DMAG組凋亡率明顯高于5mg/L順鉑組及未干預(yù)組，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：熱休克蛋白90抑制劑17-DMAG呈時間.劑量依賴性抑制肝癌He