TRAIL在HepG2細胞表達及細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的：
　　把攜帶TRAIL基因的慢病毒載體構(gòu)建在HepG2細胞中表達，檢測TRAIL對HepG2的蛋白表達及增殖，觀察TRAIL-HepG2細胞與化療藥物聯(lián)用效果，并探討其可能凋亡機制
　　方法：
　　1、肝癌細胞株HepG2細胞培養(yǎng)。
　　2、構(gòu)建TRAIL重組慢病毒表達載體pCDH-CMV-TRAIL-EF1-GFP-T2A-Puro。
　　3、慢病毒感染肝癌細胞HepG2的 TRAIL蛋白表達

2、>　　3、化療藥物干預TRAIL-HepG2細胞。
　　4、MTT檢測細胞抑制率。
　　5、流式細胞術(shù)檢測細胞周期。
　　結(jié)果：
　　測序證實成功構(gòu)建攜帶TRAIL基因慢病毒載體，當MOI=40時,重組慢病毒體在HepG2細胞的外轉(zhuǎn)染效率高表達。經(jīng)Western blotting方法檢測表達的TRAIL蛋白。MTT檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TRAIL-HepG2藥物組細胞對細胞增殖活力的影響明顯低于HepG2和TRAIL-He

3、pG2組（P<0.05），流式細胞學檢對HepG2細胞周期影響，得出凋亡比例中實驗組明顯高于對照組，且p值<0.05，有統(tǒng)計學意義意義。
　　結(jié)論：
　　首先成功構(gòu)建了帶有TRAIL基因的慢病毒載體，并在HepG2的穩(wěn)定高表達。通過在實驗組及對照組中應用濃度為0.1μg/mL化療藥物5-FU，兩組的凋亡比例具有明顯的差別，統(tǒng)計學有意義（P<0.05）。說明該藥物與TRAIL介導的HepG2細胞協(xié)同作用能加速凋亡過程，并能明顯