SD118-2對人HepG2細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期影響及其作用機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　 肝細(xì)胞癌(HCC)，是全球癌癥死亡的主要腫瘤之一，也是肝硬化患者的主要死因。HCC的發(fā)病率近年來不斷增加，每年有50萬～100萬新增患者[1]。HCC的早期診斷及有效治療對延長肝細(xì)胞癌患者生存時(shí)間起到重要的作用。肝移植及肝臟外科切除術(shù)是目前最常用的治療方法，但是由于肝源的缺少及術(shù)后高復(fù)發(fā)率致使這些治療方法在臨床上沒有取得顯著療效，也增加了患者的痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)?；熓悄壳皩τ诓贿m應(yīng)外科手術(shù)病人的輔助治療方法之一，

2、然而化療的臨床治療效果不是很顯著。例如，阿柔比星是臨床治療肝癌的標(biāo)準(zhǔn)藥物，對身體具有很大的副作用，在延長生存時(shí)間方面也沒有顯著的療效[2]。近半個(gè)世紀(jì)以來，人們一直致力于自天然植物中提取藥物用于臨床癌癥的治療，并證實(shí)其臨床效果較顯著。
　　 化合物SD118粗提自中國南海深海處藻類等沉積物中，其經(jīng)過提純后分為15種成分，成分Ⅰ(青黃霉素X)即為SD118－2。研究證實(shí)SD118－2對人MCF－7、HepG2、NCI－H460、H

3、eLa等細(xì)胞的活性具有抑制作用，其中對人HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒性更顯著[3]。
　　 研究目的：
　　 觀察化合物SD118－2對人HepG2細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。研究化合物SD118－2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 取對數(shù)生長期人HepG2細(xì)胞，分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組給予7μg/mLSD118-2作用于人HepG2細(xì)胞，對照組給予0.7％DMSO處理?；衔颯D11

4、8-2的IC50是7μg/mL。
　　 1、采用MTT法檢測SD118-2對正常人肝臟細(xì)胞、人HepG2細(xì)胞增殖影響：7μg/mL化合物SD118-2分別作用于人正常肝臟細(xì)胞、人HepG2細(xì)胞48h后通過酶標(biāo)儀570nm波長測每孔的吸光度值。
　　 細(xì)胞增殖率=(實(shí)驗(yàn)組吸光度均值)/(對照組吸光度均值)×100％。
　　 2、采用DAPI熒光染色法觀察化合物SD118-2處理后細(xì)胞形態(tài)的變化：7μg/mLSD11

5、8-2分別作用于人HepG2細(xì)胞12h、24h、48h后DAPI染色，通過熒光顯微鏡激發(fā)觀察人HepG2細(xì)胞不同時(shí)間段形態(tài)變化。
　　 3、檢測細(xì)胞凋亡率：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細(xì)胞12h、24h、48h，通過流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)法檢測化合物SD118-2誘導(dǎo)人HepG2細(xì)胞凋亡率。
　　 4、檢測細(xì)胞周期阻滯：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細(xì)胞12h

6、、24h、48h，通過流式細(xì)胞儀檢測化合物SD118-2引起人HepG2細(xì)胞周期阻滯。
　　 5、采用JC-1染色法檢測細(xì)胞線粒體膜電位(△Ψm)水平：7μg/mLSD118-2分別作用于人HepG2細(xì)胞12h、24h、48h，使用JC-1染色，通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化。
　　 6、WesternBlot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、PARP、C-PARP表達(dá)變化：7μg/mLSD118-2分別作用

7、于人HepG2細(xì)胞12h、24h、48h，收集細(xì)胞、提取蛋白，通過WesternBlot檢測化合物作用于人HepG2細(xì)胞后凋亡相關(guān)蛋白的變化。
　　 研究結(jié)果：
　　 化合物SD118-2呈時(shí)間依賴性改變?nèi)薍epG2細(xì)胞形態(tài)、抑制細(xì)胞的生長、降低細(xì)胞線粒體膜電位、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞G2期阻滯；抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)呈時(shí)間依賴性減少，促凋亡蛋白Bax、C-PARP表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加；化合物SD118-2對正常肝細(xì)胞增殖