簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者線粒體DNA突變的研究姓名孫明申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師張林娜20060521山東大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者線粒體DNA突變的研究研究生孫明導(dǎo)師張林娜教授中文摘要目的近年來，入們在線粒體呼吸鏈缺乏而引起的疾病，特別是CPEO的患者的肌肉組織和其他多種組織中發(fā)現(xiàn)有大片段的線粒體DNA缺失。許多研究表明這些缺失是這類疾病的重要病因。本實驗將檢測11例慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者骨骼肌細(xì)胞的線粒體DNA的缺失情況。方法從11例慢性進行性眼外肌麻痹和KEARNSSAYRE綜合征患者的骨骼肌活檢標(biāo)本中，提取總體DNA。根據(jù)限制性內(nèi)切酶PVULI使用說明，取1PGDNA，加入2個單位的酶，37℃下，在終體積為20|IL的反應(yīng)體系中消化1小時酶切位點在2654，使DNA線性化。將DNA片段加入濃度為08％的瓊脂糖凝膠中，與HINDⅢDIGESTMARKER同時電泳，至MARKER移至膠的中部停止電泳，使DNA片段按大小分離。將瓊脂糖凝膠在02MHCI中浸泡8MIN使DNA脫嘌呤，然后浸入變性液中浸泡2X15RAIN使DNA變性，再浸入中和液中浸泡215MIN使之中和。使用20XSSC轉(zhuǎn)移液，采用毛細(xì)轉(zhuǎn)移法將凝膠上的DNA轉(zhuǎn)移至正電荷尼龍膜上。使用線粒體／胞質(zhì)病毒DNA純化試劑盒從正常人全血中提取全長線粒體DNA作為探針，使用地高辛高效標(biāo)記與檢測試劑盒進行地高辛一DUTP標(biāo)記，并與正電荷尼龍膜進行預(yù)雜交，雜交、雜交后沖洗及顯色反應(yīng)。結(jié)果正常對照的標(biāo)本只出現(xiàn)一條165KB的雜交帶。11例CPEO及KSS患者在165KB處也均有一條雜交帶。有7例患者除一條正常大小雜交帶外，還有一條異常的缺失型線粒體DNA雜交帶。出現(xiàn)缺失型線粒體DNA的患者占總數(shù)的64％。劑量分析表明缺失型線粒體DNA占總線粒體DNA的50～75％。缺失片斷大小在45～55KB之間。

簡介：點擊查看更多糖尿病大鼠不同時期主動脈護骨素的表達及相關(guān)因素分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分包裹骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的殼聚糖Β甘油磷酸鈉水凝膠的制作及相關(guān)研究目的研究溫敏型殼聚糖Β甘油磷酸鈉CHITOSANΒGLYCEROLPHOSPHATECGP水凝膠的制作以及作為細(xì)胞載體對其中的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMESTEMCELLSBMSCS粘附、生長、和增殖的影響。方法將殼聚糖CHITOSANCS與Β甘油磷酸鈉ΒGLYCEROLPHOSPHATEGP按照31的比例混合后放置于37℃溫度條件下可形成固態(tài)水凝膠。將體外培養(yǎng)、擴增的兔BMSCS與CGP溶液混合、固化形成水凝膠后制作冰凍切片行蘇木素伊紅HE染色觀察其粘附和生長情況通過CCK8法和死活細(xì)胞熒光染色法檢測BMSCS在CGP水凝膠中的生長、增殖情況。結(jié)果BMSCSCGP混合溶液置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)L0MINS可固化形成水凝膠。BMSCS與CGP溶液混合培養(yǎng)14天后細(xì)胞增值數(shù)量多其形態(tài)為長梭形伸展良好。冰凍切片HE染色顯示CGP水凝膠呈現(xiàn)均質(zhì)紅染有孔隙樣結(jié)構(gòu)BMSCS分布較均勻形態(tài)大部分為圓形胞核藍染呈圓形或橢圓形。CCK8法測定實驗組光吸收值與對照組比較除第2天有顯著性差異P005。死活細(xì)胞熒光染色顯示培養(yǎng)14天后實驗組中BMSCS絕大多數(shù)被染成綠色極少量死細(xì)胞被染成紅色。細(xì)胞形態(tài)為多邊形伸展良好。活細(xì)胞比率和活細(xì)胞密度與對照組比較均無顯著性差異P005。結(jié)論CGP溫敏型水凝膠在接近于人體內(nèi)體溫的條件下可長期保持水凝膠狀態(tài)CGP溫敏型水凝膠對BMSCS無細(xì)胞毒性且適合細(xì)胞粘附和生長為進一步試驗奠定了基礎(chǔ)。第二部分新型磷酸鈣骨水泥材料的制作及其細(xì)胞毒性、機械性能、孔隙結(jié)構(gòu)的相關(guān)研究目的探討新型大孔隙磷酸鈣骨水泥CALCIUMPHOSPHATECEMENTCPC材料支架的細(xì)胞毒性和對細(xì)胞粘附、生長和增殖的影響。方法新型CPC在固相的混合過程中首先將細(xì)化后的磷酸四鈣TETRACALCIUMPHOSPHATETTCP和磷酸氫鈣DICALCIUMPHOSPHATEANHYDROUSDCPA粉末按11摩爾比的比例配制成CPC固體粉末再將質(zhì)量比為50％的水溶性甘露醇晶體加入到CPC固體粉末中用來制造大孔隙。應(yīng)用磷酸鹽緩沖液為固化液。將CPC固體粉末與固化液按照2G1ML的比例在研缽中混合均勻得到糊狀混合物即CPC面團。通過CCK8法檢測細(xì)胞在新型CPC材料浸提液中的生長增殖情況通過電子掃描電鏡測試材料孔徑應(yīng)用力學(xué)三點彎曲實驗測試新型CPC的生物力學(xué)性能。結(jié)果通過掃描電鏡觀察和測量新型CPC材料的孔徑值達到26743±11801ΜM而傳統(tǒng)CPC材料的孔徑值只有666±258ΜM兩者比較具有顯著性差異P005。新型CPC材料細(xì)胞毒性評級為1級即該材料對BMSCS無明顯毒性。結(jié)論新型CPC材料具有強大的生物力學(xué)性能、大孔隙、高孔隙率和良好的生物相容性有望成為理想的骨組織工程支架。第三部分新型磷酸鈣骨水泥混合材料包含包裹骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的殼聚糖水凝膠和甘露醇晶體中細(xì)胞活性和成骨分化的相關(guān)研究目的研究溫敏型CGP水凝膠對包裹其中的BMSCS在CPC自凝固化過程中的保護作用以及BMSCS在新型CPC混合材料包含包裹骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的殼聚糖水凝膠和甘露醇晶體中的粘附、增殖和成骨分化情況。方法將體外培養(yǎng)、擴增的兔BMSCS與CGP溶液混合置于培養(yǎng)板底層放置37℃條件下固化形成水凝膠將CPC面團置于培養(yǎng)板中水凝膠層的上方放置37℃條件下固化。通過CCK8法和死活細(xì)胞熒光染色法檢測包裹于CGP水凝膠中的BMSCS通過CPC自凝固化過程后的細(xì)胞生存及增殖活性通過組織化學(xué)方法檢測堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASEALP活性茜素紅染色檢測鈣化結(jié)節(jié)的表達RTPCR檢測ALP和降鈣素CALCITONINCTMRNA的表達。通過電子掃描電鏡觀察BMSCS在新型CPC材料中的生長及粘附情況。結(jié)果包裹于CGP水凝膠中的BMSCS在CPC材料中培養(yǎng)14天后的死活細(xì)胞熒光染色顯示活細(xì)胞比率為7877±266％同單純BMSCS細(xì)胞懸液組8207±430％和CGP水凝膠組8003±308％比較無顯著性差異P005活細(xì)胞密度為8254±417％同單純BMSCS細(xì)胞懸液組8637±481％和CGP水凝膠組8363±520％比較亦無顯著性差異P005。包裹于CGP水凝膠中的BMSCS在CPC材料中使用成骨培養(yǎng)基培養(yǎng)7天和14天后ALP、茜素紅染色均為陽性同對照組無差異P005RTPCR結(jié)果亦顯示ALP和CT的MRNA基因表達明顯增強。BMSCS在新型CPC復(fù)合支架材料上培養(yǎng)5天掃描電子顯微鏡顯示BMSCS向CPC材料的孔隙深部長入并且緊緊地附著在類似納米羥基磷灰石骨礦物質(zhì)材料上。結(jié)論溫敏型CGP水凝膠對包裹其中的BMSCS在CPC自凝固化過程中可起到保護作用新型CPC復(fù)合支架材料無細(xì)胞毒性其三維孔隙結(jié)構(gòu)及材料特性適合BMSCS粘附、生長、增殖和成骨分化。第四部分兔橈骨缺損模型制作及新型磷酸鈣骨水泥材料對骨折缺損模型的治療效果目的研究兔橈骨缺損模型的制作以及觀察新型CPC材料對兔橈骨缺損模型的修復(fù)治療效果。方法選用12只成年健康的新西蘭大白兔沿其雙側(cè)前臂橈側(cè)暴露橈骨中段截取約1CM骨干制造骨缺損模型。其中6只為試驗組植入新型CPC另6只為對照組植入傳統(tǒng)CPC。分別于手術(shù)當(dāng)天、術(shù)后第4周、8周和第12周行雙上肢X線片檢查于術(shù)后第12周行雙上肢MRI檢查、組織切片HE染色觀察和生物力學(xué)測定。結(jié)果新型CPC材料植入兔橈骨缺損處后未出現(xiàn)炎性、排斥等不良反應(yīng)。術(shù)后第4周、8周和12周X線片檢查顯示試驗組骨折缺損修復(fù)情況明顯優(yōu)于對照組。實驗組術(shù)后12周螺旋CT三維重建可見橈骨缺損區(qū)域與周圍正常骨質(zhì)整合完整骨組織爬行替代理想骨折缺損間隙模糊消失。對照組橈骨缺損區(qū)域植入的傳統(tǒng)CPC材料降解吸收骨折缺損依舊存在與周圍正常骨質(zhì)無明顯連接整合。術(shù)后第12周通過組織形態(tài)學(xué)觀察實驗組成骨及塑形等方面明顯優(yōu)于對照組。兔橈骨三點彎曲試驗結(jié)果顯示術(shù)后第12周實驗組的最大負(fù)荷FMAX、抗彎曲強度FLEXURALSTRENGTH和載荷位移FD與對照組比較均具有統(tǒng)計學(xué)差異P005結(jié)論新型CPC材料具有良好的生物相容性、降解性和細(xì)胞活性對兔橈骨缺損模型的修復(fù)具有良好的治療效果對于作為理想的骨組織工程支架具有光明的前景。

簡介：目的本實驗通過建立大鼠脛骨洞形骨缺損的動物模型，觀察NGFBIOOSS骨粉混合物是否具有促進成骨的作用。方法48只雄性SD大鼠，平均體重220250G，采用完全隨機法分成3組，每組16只。在左側(cè)脛骨結(jié)節(jié)下1CM處制備約3MM長深達髓腔的骨塊缺損模型，實驗組骨缺損植入NGFBIOOSS骨粉混合物，對照組骨缺損植入生理鹽水BIOOSS骨粉，空白組為單純脛骨骨缺損，未做任何處理。每組分別于術(shù)后4周和8周各處死動物8只。通過大體解剖標(biāo)本、X線片、組織形態(tài)學(xué)及BMP2免疫組組織化學(xué)染色等方法，觀察各組各時期新骨生成的情況。結(jié)果1術(shù)后4周大體解剖觀察實驗組骨缺損愈合較早，新骨的形成明顯比對照組和空白組快；組織學(xué)觀察結(jié)果實驗組新生骨小梁、成骨細(xì)胞、新生血管均多于對照組和空白組；BMP2免疫組化染色結(jié)果染色陽性主要表達在骨膜下和骨小梁周圍，陽性細(xì)胞主要是一些成骨細(xì)胞和未成熟的骨細(xì)胞。實驗組陽性細(xì)胞的平均光密度值明顯高于對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001，空白組陽性細(xì)胞的平均光密度值最低，與其他組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。2術(shù)后8周大體解剖觀察各組骨缺損基本愈合，其中實驗組生成的新骨與周圍骨組織一致；X線片觀察結(jié)果實驗組和對照組骨缺損區(qū)影像的密度接近周圍骨組織，輪廓與原骨缺損區(qū)一致，空白組骨缺損區(qū)影像密度稍低，有骨缺損切跡；組織學(xué)觀察結(jié)果各組的骨缺損區(qū)均為新生骨充填，空白組骨缺損區(qū)中央的骨質(zhì)成熟度最低。結(jié)論NGFBIOOSS骨粉混合物能明顯促進大鼠脛骨洞形骨缺損早期新骨的形成及骨量的增加，促進骨質(zhì)的成熟，縮短愈合時間。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文長期重復(fù)應(yīng)用A型肉毒毒素治療面肌痙攣的療效及對面神經(jīng)CMAP的影響姓名韓旺申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師羅蔚鋒20070401長期重復(fù)應(yīng)用A型肉毒毒素治療面肌痙攣的療效及對面神經(jīng)CMAP的影響中文摘要周、2周、1月、3月、6月時的CMAP潛伏期及波幅的變化，以明確A型肉毒毒素對面神經(jīng)的阻滯作用及隨時間恢復(fù)的情況。3．長期未治組及長期重復(fù)治療組治療6個月后CMAP潛伏期、波幅自身患健側(cè)、組間患側(cè)比較，以了解長期重復(fù)注射A型肉毒毒素對面神經(jīng)CMAP的影響。結(jié)果1．早期組、長期未治組的CMAP潛伏期、波幅分自身比較及組間患側(cè)比較均無顯著性差異．2．7例早期組HFS患者A型肉毒毒素注射后其面神經(jīng)CMAP潛伏期較治療前明顯延長、波幅顯著降低。兩者均隨時間緩慢恢復(fù)，CMAP潛伏期大約注射后3個月恢復(fù)至正常水平，波幅則需6個月。3．長期重復(fù)治療組患側(cè)C姒P潛伏期與自身健側(cè)、長期未治組患側(cè)比均無明顯差異，長期重復(fù)治療組患側(cè)CMAP波幅與自身健側(cè)、長期未治組患側(cè)比均有顯著性差異。結(jié)論1．未發(fā)現(xiàn)HFS對面神經(jīng)CMAP有影響，既使長期患病亦如此。2．A型肉毒毒素注射后對面神經(jīng)的阻滯作用明顯，表現(xiàn)為CMAP潛伏期的延長及波幅的顯著降低。兩者均隨時間緩慢恢復(fù)其中潛伏期于注射后3個月恢復(fù)至正常水平，而波幅則需6個月或更長。3．長期重復(fù)注射A型肉毒毒素后面神經(jīng)CMAP潛伏期仍能如期恢復(fù)正常，而波幅的恢復(fù)更加緩慢持久．關(guān)鍵詞面脅痊攣；A型肉毒毒素；復(fù)合肌肉動作電位Ⅱ作者韓旺指導(dǎo)老師羅蔚鋒

簡介：目的探索PTHRP、NOTCH雙信號通路對骨骺干細(xì)胞增殖的調(diào)控規(guī)律及二者之間的相互作用。方法體內(nèi)實驗取24H內(nèi)新生大鼠股骨體外器官培養(yǎng)，分別用PTHRP信號通路激活劑PTHRP134和PTHRP受體競爭抑制物PTHRP734，NOTCH信號通路激活劑JAGGED1FC和抑制劑DAPT處理，空白對照加PBS緩沖液，培養(yǎng)72H后收集標(biāo)本行HE染色比較骨骺干細(xì)胞層在骨骺全長中比值和BRDU染色檢測細(xì)胞增殖情況，并用免疫組化染色方法檢測當(dāng)PTHRP信號通路被干預(yù)時NOTCH信號通路配體JAGGED1、受體NICD蛋白的表達情況，及當(dāng)NOTCH信號通路被干預(yù)時PTHRP蛋白的表達情況。體外實驗采用機械分離和酶消化法分離培養(yǎng)骨骺干細(xì)胞，與PTHRP134、PTHRP734共培養(yǎng)后，用WESTERN印跡檢測JAGGED1、NICD蛋白的表達，同時進一步通過構(gòu)建PTHRP、NICD過表達和RNAI慢病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的骨骺干細(xì)胞，在用WESTERN印跡檢測相應(yīng)基因轉(zhuǎn)染成功的前提下，檢測當(dāng)PTHRP信號通路被干預(yù)時JAGGED1、NICD蛋白的表達情況，及當(dāng)NOTCH信號通路被干預(yù)時PTHRP蛋白的表達情況。結(jié)果在體外器官培養(yǎng)24H內(nèi)新生大鼠股骨實驗中，與對照組相比，PTHRP134、JAGGED1FC處理組靜止區(qū)骨骺干細(xì)胞層長度在骨骺全長中比值明顯增高，BRDU陽性細(xì)胞率也增高P＜001，促細(xì)胞增殖作用明顯；而PTHRP734、DAPT處理組靜止區(qū)骨骺干細(xì)胞層長度在骨骺全長中比值明顯降低，BRDU陽性細(xì)胞率也降低P＜005，抑制骨骺干細(xì)胞增殖。在體內(nèi)外實驗中均發(fā)現(xiàn)當(dāng)PTHRP信號通路被激活時，JAGGED1、NICD蛋白的表達增高，當(dāng)PTHRP信號通路被抑制時，JAGGED1、NICD蛋白的表達則降低；而當(dāng)NOTCH信號通路被激活時，PTHRP蛋白的表達降低，當(dāng)NOTCH信號通路被抑制時，PTHRP蛋白的表達增高。結(jié)論從細(xì)胞水平、器官水平分別證實PTHRP、NOTCH信號通路均可促進骨骺干細(xì)胞增殖，PTHRP信號通路對NOTCH信號通路存在正調(diào)控，NOTCH信號通路對PTHRP信號通路存在負(fù)調(diào)控，二者構(gòu)成一個負(fù)反饋環(huán)從而對大鼠骨骺干細(xì)胞的增殖發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

簡介：目的本課題利用中空多孔金屬支架為骨組織再生工程構(gòu)架，觀察體外骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BONENARROWMOSONCHYMALSTEMCELLS，BMSC在支架內(nèi)、外的分化生長情況以及成骨的可能性，并探討體外應(yīng)用骨誘導(dǎo)因子骨形態(tài)發(fā)生蛋白2RECOMBINEDHUMANBONOMPHOGEICPROTEIN2，RHBMP2提高成骨活性，促進金屬假體與骨質(zhì)相對一體化結(jié)合的可行性，為研制中空多孔人工關(guān)節(jié)假體或其他骨組織再生骨植入物提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)希望實驗結(jié)果能夠為生物固定的人工關(guān)節(jié)設(shè)計方法的改進提供一些理論及實驗依據(jù)。方法自行設(shè)計中空金屬試件，采用中空金屬試件A組、中空金屬試件假體脫鈣骨基質(zhì)DETALCIFIEDBONEMATRIXDBMB組、中空金屬試件DBM成骨誘導(dǎo)液C組、中空金屬假體DBMRHBMP2培養(yǎng)液D組，金屬試件均為HA涂層，于BMSC混懸液中加10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，在2、4周觀察點取材，通過倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、成骨細(xì)胞表型檢測等方法對中空金屬試件表面、脫鈣骨基質(zhì)BMSC生長以及成骨分化進行觀察、鑒定。使用SPSS150軟件包進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組問同一時間各指標(biāo)比較采用組問方差分析。結(jié)果實驗發(fā)現(xiàn)倒置相差顯微鏡、掃描電鏡等方法顯示中空金屬試件表面及試件內(nèi)三維細(xì)胞支架上BMSC細(xì)胞黏附正常，經(jīng)成骨誘導(dǎo)后轉(zhuǎn)為成骨細(xì)胞，并形成工程化組織。在實驗設(shè)計的兩種骨誘導(dǎo)方式中，成骨細(xì)胞的表達以成骨誘導(dǎo)液為明顯，在統(tǒng)計學(xué)意義上其他對照組有明顯差異。結(jié)論一、體外BMSC經(jīng)誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化，并可在中空金屬試件的空間結(jié)構(gòu)中形成組織塊。二、中空金屬假體的設(shè)計思路是可行的，在體外可以觀察到BMSC在金屬腔壁與腔內(nèi)細(xì)胞支架之間緊密結(jié)合，并且在無細(xì)胞支架的情況下，1MM孔洞可以形成細(xì)胞間的直接連接。因此中空結(jié)構(gòu)的假體是一個值得探索的方向，希望對生物復(fù)合型假體的改進具有一定的指導(dǎo)意義。

簡介：目的觀察化瘀止痛膠囊配合敷臍止痛散綜合治療子宮腺肌病的臨床療效并探討其作用機理。方法臨床選取65例子宮腺肌病患者其中治療組35例經(jīng)前及經(jīng)期外用敷臍止痛散經(jīng)期服用化瘀止痛膠囊對照組30例經(jīng)前及經(jīng)期外用花季神闕貼經(jīng)期服用散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊。觀察兩組患者痛經(jīng)、月經(jīng)及臨床癥狀的改善子宮體積大小、血清CA125、PGE2、腫瘤壞死因子ΑTNFΑ的變化。結(jié)果治療后治療組患者總療效、中醫(yī)證候療效、月經(jīng)不調(diào)療效、中醫(yī)單項癥狀積分與對照組組間比較均有顯著性差異P005治療組優(yōu)于對照組。治療后兩組患者痛經(jīng)積分及血清PGE2含量下降較療前均有顯著性差異P005組間比較無差異P005。治療組子宮體積、血清CA125、腫瘤壞死因子Α含量較療前降低有顯著性或非常顯著性差異P005治療后組間比較有顯著性差異或者非常顯著性差異P結(jié)論化瘀止痛膠囊配合敷臍止痛散綜合治療子宮腺肌病療效較好既可緩解痛經(jīng)癥狀又可調(diào)理月經(jīng)的紊亂其改善月經(jīng)方面的作用與對照組比較尤為顯著其治療作用可能是通過抑制異位內(nèi)膜的侵襲力抑制子宮內(nèi)膜及肌層內(nèi)新生血管的生長從而減少內(nèi)膜的增生種植、縮小異位病灶進而縮小子宮體積減少月經(jīng)量有關(guān)。

簡介：目的觀察不同濃度的醫(yī)用臭氧與玻璃酸鈉膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療老年人單側(cè)膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床治療效果。方法2009年8月至2010年6月在武漢市協(xié)和醫(yī)院及湖北省中山醫(yī)院門診選擇符合標(biāo)準(zhǔn)的單側(cè)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者共114例，隨機分為四組隨機分為四組即A、B、C、D組。A組臭氧治療組26例臭氧濃度為40UGML；B組臭氧治療組28例臭氧濃度為30UGML；C組臭氧治療組28例臭氧濃度為20UGML，均抽取20ML臭氧注入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，每周兩次為一個療程。D組32例采用關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射玻璃酸鈉（25ML25MG）注射液，每周一次，5次為一個療程。采用VAS評分、JOA療效評分、WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分以及BBS評分量表來評定兩組用藥前，后1周、1月、3月、6月的改變情況及副作用，并做統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果治療前T0四組患者VASJOA療效，WOMAC關(guān)節(jié)炎指數(shù)及BBS平衡量表評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P005）。治療后四組各時間段VAS評分、JOA療效評分、WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)及BBS平衡量表評分均好于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P結(jié)論不同濃度的醫(yī)用臭氧及玻璃酸鈉組均能減輕患者疼痛，改善膝關(guān)節(jié)功能提高生活質(zhì)量，對預(yù)防跌倒有一定的效果。濃度為30UGML臭氧三個月前臨床效果及副作用評價好于其它臭氧治療組及玻璃酸鈉組，六個月時膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射玻璃酸鈉療效好于臭氧治療組，但醫(yī)用臭氧組起效快，效果明顯，且安全性好，是值得推廣的治療膝骨性關(guān)節(jié)炎一種好方法。

簡介：環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠骨轉(zhuǎn)換及其分子機制影響的研究我們近幾年在臨床上開展的腎活檢、皮膚活檢和肌肉活檢都證明，糖尿病人體內(nèi)存在廣泛的多器官免疫損傷。多年來，糖尿病的防治都是以高血糖為中心的治療策略，因此糖尿病的慢性并發(fā)癥的發(fā)病機理和臨床處理都處于思想茫然和束手無策的尷尬境地。為弄清糖尿病發(fā)病機制，更好地從疾病的源頭預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥，作者開展了糖尿病多器官的病理免疫學(xué)的研究并嘗試用環(huán)孢素A進行干預(yù)。本實驗是整個研究的一部分。第一部分環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病DM大鼠骨轉(zhuǎn)換影響的研究目的1型DMT1DM是因胰島素絕對缺乏引起的以高血糖為特征的一組綜合征。其慢性并發(fā)癥包括長時間的慢性骨丟失。既往關(guān)于T1DM骨丟失的機制研究表明骨形成減低，而關(guān)于骨吸收變化研究結(jié)果不一，多數(shù)研究提示，骨吸收減低或無變化，但關(guān)于晚期糖基化終末產(chǎn)物AGES作用的研究表明，AGES主要是刺激骨吸收，故DM骨丟失的機制有待進一步研究。CSACSA是一種免疫抑制劑，可用于器官移植后的抗排斥反應(yīng)和許多免疫性疾病，包括T1DM早期。隨著DM腎病腎移植患者增加，CSA的使用逐漸增多。因此，我們以鏈脲佐菌素STZ誘導(dǎo)的DM大鼠為模型，觀察其骨量和骨轉(zhuǎn)換的變化情況以及胰島素、CSA干預(yù)的影響，同時CSA對于正常大鼠骨量和骨轉(zhuǎn)換的影響。方法62只雄性SD大鼠，隨機分為正常對照組CON、正常低劑量CSA干預(yù)組NL、正常高劑量CSA干預(yù)組NH、單純DM組DM，DM低劑量CSA治療組DML，DM高劑量CSA治療組DMH，胰島素治療組INS。以靜脈注射STZ的方法制造DM大鼠模型，各低、高劑量CSA干預(yù)組按1MGKGD、8MGKGD皮下注射CSA，INS組按6UKGD給予中效胰島素皮下注射，成模8周后處死。留取血尿標(biāo)本分別檢測胰島素、鈣、磷、堿性磷酸酶、骨鈣素和24小時尿鈣。留取左側(cè)脛骨近端23，行骨形態(tài)計量學(xué)分析。分離右側(cè)股骨和椎骨L15，行骨密度測量和骨生物力學(xué)試驗。結(jié)果各組大鼠血鈣、磷、堿性磷酸酶水平無顯著差異。STZ誘導(dǎo)的DM大鼠24小時尿量和尿鈣顯著增加，血清骨鈣素水平減低，股骨和腰椎骨密度較正常對照組顯著減低，骨計量形態(tài)學(xué)參數(shù)顯示骨小梁骨量顯著減低，動力學(xué)參數(shù)表明DM大鼠類骨質(zhì)表面、骨表面激活頻率、組織水平的骨形成速率顯著減低，力學(xué)測試示骨力學(xué)性能減低。胰島素干預(yù)可使DM大鼠血糖水平下降，24小時尿量和尿鈣水平減低，血清骨鈣素水平增加，股骨和腰椎骨密度增加，骨力學(xué)性能改善，骨計量形態(tài)學(xué)參數(shù)顯示骨小梁骨量增加，但均未達正常對照組水平。動力學(xué)參數(shù)表明胰島素干預(yù)可使DM大鼠類骨質(zhì)表面、骨表面激活頻率、組織水平的骨形成速率增加，可達到正常對照組水平。低劑量CSA干預(yù)正常大鼠結(jié)果骨密度，骨計量學(xué)指標(biāo)、骨生物力學(xué)指標(biāo)均與正常對照組無顯著差異。高劑量CSA干預(yù)正常大鼠，不影響大鼠血糖，骨密度、骨形態(tài)學(xué)參數(shù)、骨力學(xué)指標(biāo)較正常對照組下降，同時血清骨鈣素水平、，骨動力學(xué)參數(shù)中的類骨質(zhì)表面、標(biāo)記表面、組織水平的骨形成速率較正常對照組增加。低劑量CSA干預(yù)DM大鼠，骨密度，骨計量學(xué)指標(biāo)、骨生物力學(xué)指標(biāo)均與DM組無顯著差異。高劑量干預(yù)DM大鼠，亦不影響大鼠血糖，可使DM大鼠骨密度和表示骨小梁骨量的形態(tài)學(xué)參數(shù)和骨力學(xué)性能均進一步減低，同時可使DM大鼠降低的血清骨鈣素水平增加，骨動力學(xué)參數(shù)也顯示可使DM大鼠降低的骨形成速率增加。結(jié)論STZ誘導(dǎo)的DM大鼠骨形成速度減低造成骨量減少，骨力學(xué)性能下降。胰島素治療可通過刺激骨形成，增加DM大鼠骨量，改善骨力學(xué)性能。低劑量CSA不影響正常大鼠和DM大鼠骨量、骨力學(xué)性能和骨轉(zhuǎn)換狀況。高劑量CSA干預(yù)正常大鼠可能誘發(fā)高轉(zhuǎn)換型骨量丟失和骨力學(xué)性能減低。高劑量CSA干預(yù)8周可使DM大鼠骨丟失進一步加重，并使DM大鼠低轉(zhuǎn)換型骨丟失向高轉(zhuǎn)換型骨丟失轉(zhuǎn)變。第二部分環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠骨轉(zhuǎn)換分子機制影響的研究目的T1DM的一個重要的慢性并發(fā)癥就是慢性的骨丟失。TLDM導(dǎo)致骨丟失的作用機制主要是骨形成速度減慢，關(guān)于骨吸收的變化情況有待進一步明確。本研究擬通過檢測STZ誘導(dǎo)的DM大鼠和胰島素、CSA干預(yù)后的大鼠骨組織中標(biāo)志破骨活性的核因子ΚB受體激活物配基RANKL護骨素OPGMRNA水平和標(biāo)志成骨細(xì)胞分化晚期的骨鈣素OCMRNA水平，以及調(diào)控成骨細(xì)胞分化成熟的轉(zhuǎn)錄因子核結(jié)合因子1CBFAL、OSXMRNA的表達水平，分析DM大鼠骨丟失的分子機制和胰島素、CSA干預(yù)對其的影響。在增齡和廢用性骨質(zhì)疏松時，骨組織中脂肪組織形成增加而成骨細(xì)胞生成或成熟減少導(dǎo)致骨丟失。既往有研究顯示，STZ誘導(dǎo)的DM小鼠外周組織脂肪含量減少，但骨髓中脂肪增加伴骨量減少。因而本研究擬通過計數(shù)大鼠骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量，同時檢測骨組織中標(biāo)志脂肪細(xì)胞的過氧化物酶增殖激活物受體Γ2PPARΓ2MKNA表達水平，證實骨量減少是否與DM狀態(tài)下這種脂肪轉(zhuǎn)移機制有關(guān)，并分析胰島素和CSA干預(yù)分別對其有何影響。方法實驗動物和分組同上。分離右側(cè)脛骨近端13去除骨骺，提取骨組織總RNA，用實時熒光定量RTPCR的方法檢測大鼠骨組織中RANKL，OPG，OC，CBFAL，OSX和PPARΓ2MRNA的表達水平，分離左側(cè)股骨近端12，制做脫鈣骨切片，計數(shù)骨髓中脂肪細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果STZ誘導(dǎo)的DM大鼠骨組織中標(biāo)志骨吸收的RANKLOPGMRNA水平和標(biāo)志成骨細(xì)胞分化成熟晚期的OC以及調(diào)控成骨的轉(zhuǎn)錄因子OSX、CBFALMRNA水平顯著減低，而標(biāo)志脂肪細(xì)胞的PPARMRNA水平顯著增加，骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)增加伴皮下、肝臟脂肪減少。胰島素干預(yù)可使DM大鼠骨組織中OC、OSX、CBFALMRNA水平增加，而不影響骨組織中RANKLOPGMRNA水平，同時可使DM大鼠骨組織中標(biāo)志脂肪細(xì)胞的PPARMRNA水平下降，骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)減少。CSA干預(yù)結(jié)果顯示，低劑量不影響正常大鼠和DM大鼠骨組織中所研究的各因子MRNA水平和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)。高劑量8周可使正常大鼠和DM大鼠骨組織中RANKLOPGMRNA水平和OC、OSXMRNA水平均增加，但骨組織中CBFALMRNA水平無顯著變化，也不影響正常和DM大鼠骨組織中標(biāo)志脂肪細(xì)胞的PPARMRNA水平和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)。結(jié)論所研究的DM大鼠骨組織中骨吸收和骨形成的各標(biāo)志因子MRNA水平均下降，考慮為低轉(zhuǎn)換型骨量丟失。同時，骨組織中標(biāo)志脂肪細(xì)胞的PPARMRNA水平和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)增加，而DM大鼠皮下、肝臟脂肪減少，提示這種脂肪轉(zhuǎn)移機制可能也存在于DM大鼠骨丟失過程中。胰島素干預(yù)可使DM大鼠骨組織中標(biāo)志成骨活性的各因子MRNA水平增加，而對標(biāo)志骨吸收的RANKLOPGMRNA水平無影響，提示胰島素主要通過刺激骨形成而非抑制骨吸收增加DM大鼠骨量。同時胰島素組骨組織中PPARMRNA和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)減少，提示胰島素可能抑制骨髓多能間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化，促進其向成骨細(xì)胞分化，發(fā)揮促成骨作用。低劑量CSA不影響正常和DM大鼠骨轉(zhuǎn)換各因子和PPARΓ2MRNA和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)。高劑量CSA可同時增加骨組織標(biāo)志骨吸收和骨形成的各因子MRNA水平，但不影響骨組織中PPARMRNA和骨髓脂肪細(xì)胞計數(shù)，提示高劑量可能誘發(fā)正常和DM大鼠高轉(zhuǎn)換型骨量減少。

簡介：第一部分、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCS的成骨及成軟骨分化研究目的建立并完善入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定方法，探討其體外成骨及成軟骨分化能力。方法1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS的培養(yǎng)自愿者知情同意，按標(biāo)準(zhǔn)骨髓穿刺程序，從髂后上棘處抽取骨髓510ML，肝素抗凝，加于FICOLL淋巴細(xì)胞分離液上，離心，以1X106個細(xì)胞接種于含基礎(chǔ)培養(yǎng)基LO％FBS低糖DMEM，100UML青霉素，100UML鏈霉素）的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。培養(yǎng)72H后首次換液，以后每隔3D換液。2骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS的鑒定取培養(yǎng)至3代P3的細(xì)胞，抗體標(biāo)記后，流式細(xì)胞儀檢測BMSCS表面抗原的表型CD44、CD73、CD90；3BMSCS的成骨分化誘導(dǎo)及鑒定取培養(yǎng)至第3代細(xì)胞，以3X105孔接種于6孔板中。實驗分為4組對照組、成骨誘導(dǎo)123周組。對照組用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，成骨誘導(dǎo)組用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含體積分?jǐn)?shù)10?S低糖DMEM培養(yǎng)基，01ΜMOLL地塞米松50MGL抗壞血酸，10MMOLLΒ磷酸甘油鈉，100UML青霉素，100UML鏈霉素）分別培養(yǎng)123周。進行堿性磷酸酶活性測定、GIMO、茜素紅、VONKOSSA染色鑒定，并RTPCR檢測成骨細(xì)胞特異基因I型膠原、堿性磷酸酶ALP、骨鈣素OCN、骨唾液酸蛋白BSA、骨橋蛋白OPN及骨連接蛋白（ONN）基因的表達。4BMSCS的成軟骨分化誘導(dǎo)與鑒定取培養(yǎng)至第3代細(xì)胞，以3X105孔接種于6孔板中。實驗分為4組對照組、成軟骨誘導(dǎo)123周組。對照組用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，成軟骨誘導(dǎo)組用成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基1MMOLL丙酮酸鈉01MMOLL抗壞血酸，01UMOLL地塞米松，1ITS，10NGLTGFΒ1）分別培養(yǎng)123周。進行阿爾新藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化鑒定，并RTPCR檢測成軟骨細(xì)胞特異性基因COLLAGEⅡ、COLLAGEX、COMP及AGGRECAN的表達。結(jié)果1相差顯微鏡觀察原代BMSCS培養(yǎng)72H后換液，即可觀察到貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)短小，呈長梭形、紡錘形。培養(yǎng)至7D，細(xì)胞明顯增多、變長、變大，長梭形、紡錘形形態(tài)更加明顯。14D時，細(xì)胞基本鋪滿皿底，細(xì)胞排列呈螺旋狀或漩渦狀。傳代培養(yǎng)中，細(xì)胞基本保持長梭形的形態(tài)。2流式細(xì)胞儀FCM檢測發(fā)現(xiàn)BMSCS陽性表達間充質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志CD44、CD73、CD90，陽性率均90以上。造血干細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD45表達陰性。3BMSCS成骨誘導(dǎo)鑒定成骨誘導(dǎo)后，GOMI、茜素紅、VONKOSSA染色均為陽性，BMSCS中ALP少量表達，成骨誘導(dǎo)3D、6D、2W、3W、4W時ALP活性顯著增強，并隨著誘導(dǎo)時間的增長，ALP活性亦隨之增加。RTPCR顯示誘導(dǎo)的BMSCS有COLLAGENI、ALP、OCN、BSP、OPN、ONN基因的表達。4BMSCS成軟骨誘導(dǎo)鑒定成軟骨誘導(dǎo)后，阿爾新藍染色陽性，BMSCS誘導(dǎo)四周后的微球免疫組化顯示有Ⅱ型膠原的表達。RTPCR顯示誘導(dǎo)的BMSCS有成軟骨細(xì)胞特異性基因COLLAGEⅡ、COLLAGEX、COMP及AGGRECAN的表達。結(jié)論1建立了一整套穩(wěn)定、成熟的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、擴增方案，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞陽性率高，傳代不喪失遺傳穩(wěn)定性，為以后的BMSCS臨床應(yīng)用提供了可靠的參考依據(jù)。2BMSCS具有很好的成骨及成軟骨分化特性，可用于自體移植，無免疫排斥反應(yīng)，可成為組織工程較為理想的種子細(xì)胞。第二部分、CIN在骨代謝過程中的表達及其生物學(xué)機制研究CIN是心臟中發(fā)現(xiàn)的一種Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶，可將心鈉素前體PROATRIALNATRIURETICPEPTIDE，PROANP轉(zhuǎn)化成有活性的ANP，從而調(diào)節(jié)血壓和心臟功能。最近有研究報道，CIN在發(fā)育著的骨組織中也有表達，骨代謝是骨形成（成骨細(xì)胞）和骨吸收破骨細(xì)胞）不斷重復(fù)進行的過程，骨質(zhì)疏松癥是骨代謝疾病中最常見的形式，骨質(zhì)疏松癥的形成主要是因為骨吸收超過了骨形成，進而引起骨量的減少。那么研究骨質(zhì)疏松癥患者血清中可溶性CIN及骨代謝過程中CIN的表達，有助于進一步了解CIN的結(jié)構(gòu)和功能以及參與骨代謝過程的生理病理意義。目的體外模擬體內(nèi)骨形成的過程，探討CIN在骨形成過程中的表達情況，檢測骨質(zhì)疏松病人血清中可溶性CIN水平，探討CIN的表達與骨質(zhì)疏松的關(guān)系及其臨床意義，進而探討CIN在骨代謝過程成骨發(fā)生及破骨吸收）中的表達及其生物學(xué)作用。方法1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS的培養(yǎng)及成骨及成軟骨分化，及分化過程中MRNA的提取。2利用反轉(zhuǎn)錄PCRRTPCR技術(shù)對BMSCS成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞CINMRNA的表達進行分析；3實時定量PCRQRTPCR檢測BMSCS、成骨誘導(dǎo)123周）、成軟骨誘導(dǎo)123周）CINMRNA的表達；4采集正常人、單純骨折病人、骨量減少及骨質(zhì)疏松癥病人的外周血于2小時內(nèi)3，000G離心10MIN，取上層血清，分裝保存。5應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA檢測125例正常人、102例單純骨折病人、53例骨量減少病人、101例骨質(zhì)疏松癥病人血清標(biāo)本的可溶性CIN。結(jié)果1CINMRNA在BMSCS、成骨細(xì)胞及成軟骨細(xì)胞中均有表達。2隨著BMSCS成骨及成軟骨誘導(dǎo)時間的逐漸增加，CINMRNA的表達量也呈逐漸增加的趨勢。3骨量減少與骨質(zhì)疏松癥病人血清中的CIN水平明顯低于正常對照組與單純骨折組（510±228478±183PGMLVS695±248PGML706±345PGML，P＜O001），而骨量減少與骨質(zhì)疏松癥病人組相比、正常對照組與單純骨折組相比均無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005；4在骨質(zhì)疏松癥病人組，無論男性與女性患者血清CIN水平均顯著低于正常男性與女性男性組894±257VS643±198PGML，P＜005女性組595±172VS438±155PGMLP＜O001；5在骨量減少與骨質(zhì)疏松癥組，我們發(fā)現(xiàn)血清CIN值與病人骨密度值存在線性相關(guān)關(guān)系P003）。6多元線性回歸分析結(jié)果提示病人病史高血壓病，P＜005）是一個相關(guān)因素。另外，性別也是血清CIN水平的獨立相關(guān)因素P＜0001。結(jié)論1CIN在BMSCS、成骨細(xì)胞及成軟骨細(xì)胞中均有表達，且在骨及軟骨形成的過程中CIN的表達是上調(diào)的。2與正常人比較，骨質(zhì)疏松癥病人血清中的可溶性CIN蛋白表達水平顯著降低。3在骨量減少與骨質(zhì)疏松癥病人中，血清中的CIN水平與骨密度呈線性相關(guān)。且血清中CIN水平隨疾病嚴(yán)重程度而進行性下降趨勢。提示，血清中可溶性CIN水平可能為骨質(zhì)疏松癥的診斷及評估病情提供新的依據(jù)。

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簡介：背景和目的誘發(fā)電位EVOKEDPOTENTIAL，EP是指對神經(jīng)系統(tǒng)的某一特定部位給予適宜刺激，在神經(jīng)系統(tǒng)相應(yīng)部位檢出的與刺激有鎖定關(guān)系的電位變化。誘發(fā)電位是檢測神經(jīng)通路結(jié)構(gòu)與功能完整性的電生理學(xué)檢查方法，它具有客觀性、敏感性和良好的重復(fù)性。運動誘發(fā)電位MOTEVOKEDPOTENTIAL，MEP是刺激皮層運動區(qū)或運動傳出通路，在刺激點下方的傳出徑路及效應(yīng)器一肌肉所記錄到的電反應(yīng)，能直接反映錐體系的功能狀態(tài)，用于評價運動神經(jīng)系統(tǒng)功能的完整性。丙泊酚是目前臨床上最常用的靜脈麻醉藥之一，具有起效快、維持時間短、蘇醒迅速而完全的特點。芬太尼是臨床上應(yīng)用最廣泛的阿片類鎮(zhèn)痛藥，常與丙泊酚聯(lián)合應(yīng)用于麻醉的誘導(dǎo)和維持。近年來，麻醉藥物對MEP的影響作用已逐漸成為新的研究領(lǐng)域，越來越受到臨床醫(yī)生的關(guān)注。文獻報道丙泊酚單次靜脈注射對骨骼肌的MEP有一過性的抑制作用，丙泊酚持續(xù)靜脈輸注對骨骼肌MEP可產(chǎn)生劑量依賴性的抑制作用，表現(xiàn)為MEP波幅下降，潛伏期延長或不變。本研究將進一步比較同等劑量的丙泊酚單獨或聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射對骨骼肌MEP的影響，旨在從藥理學(xué)的角度分析丙泊酚與芬太尼對骨骼肌MEP的影響作用，并探討其作用機制，為丙泊酚與芬太尼在臨床上的安全使用提供相關(guān)的理論依據(jù)。方法1病例選擇選擇ASAⅠ～Ⅱ級，心肺肝腎功能正常，無神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病，無中樞性作用藥物服藥史的普通外科擇期手術(shù)患者11例，術(shù)前不予麻醉前用藥。2研究設(shè)備1英國MAGSTIM200磁刺激器。2英國SYNERGYMULTIMEDIAEMGEP肌電誘發(fā)電位儀OXFDINSTRUINENTSMEDJCALINC。3日本光電8301多功能監(jiān)測儀。4韓國ROYALDELTA77麻醉機。3研究方法1患者入室后取平臥位。開放左側(cè)大隱靜脈，實驗前輸注復(fù)方乳酸林格氏液500ML，約7～10MLKGH。2用日本光電8301多功能監(jiān)測儀監(jiān)測左上臂平均動脈壓MAP、Ⅱ?qū)?lián)心電圖ECGⅡ、心率HR和脈搏血氧飽和度SPO。實驗期間患者經(jīng)面罩吸入100％氧氣，必要時行人工通氣，維持SPO99％以上和呼末二氧化碳分壓PCO在35～38MMHG范圍。手術(shù)室內(nèi)溫度控制于26℃。3所有患者均取右手平置體側(cè)，前臂固定薄板上，拇指和其余四指分別外展固定。清潔皮膚后用心電圖電極貼帖在右拇短展肌表面，活動電極置于肌腹，參考電極置于遠側(cè)肌腱，極間阻抗棘突為磁刺激器MAGSTIM200，英國MAGSTIM公司刺激線圈的中點，將刺激線圈放在頸部，緊帖皮膚進行試驗刺激刺激強度取最大輸出強度的10％，沿脊柱正中線輕微地上下移動線圈，尋找能誘發(fā)出拇短展肌MEP最大波幅的刺激位置，作標(biāo)記為磁刺激作用位點。5實驗人員在自身示范并講解磁刺激作用過程，指導(dǎo)患者放松上肢及全身肌肉，避免緊張對肌電反應(yīng)產(chǎn)生干擾。記錄患者的MEP，待麻醉監(jiān)測、磁刺激器和MEP記錄儀工作條件穩(wěn)定后，逐級增大磁刺激的強度至磁刺激器的最大輸出強度20TESLA。收集6個最大刺激強度下的MEP，取均值為基礎(chǔ)值。6實驗一11例患者經(jīng)大隱靜脈勻速注射丙泊酚2MGKG，注射時間為30秒。從注藥開始計時記錄拇短展肌的MEP，每20秒發(fā)出一次磁刺激，至患者恢復(fù)清醒出現(xiàn)睜眼或肢體動作時結(jié)束本次觀察。7實驗二實驗一注藥結(jié)束后30分鐘，11例患者再次經(jīng)大隱靜脈依次勻速注射丙泊酚2MGKG和芬太尼5ΜGKG，注射時間為60秒每藥30秒。從注藥開始再次記錄患者的MEP，記錄周期為20秒，連續(xù)記錄18個MEP記錄時間為360秒后結(jié)束整個實驗。4監(jiān)測項目1MEPMEP的波幅值、MEF，的潛伏期。2呼吸循環(huán)系統(tǒng)MAP、HR、ECGⅡ和SPO。5統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS115統(tǒng)計軟件SPSSSOFTWARECOLISA對狹得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差X±S表示，組間比較用配對T檢驗，所有計量資料均作正態(tài)分布試驗、方差齊性試驗，P005。5兩實驗注藥后MEP波幅下降到最低值的時程無統(tǒng)計學(xué)差異P0887。2血壓與心率的變化1兩實驗注藥前MAP的基礎(chǔ)值間無統(tǒng)計學(xué)差異P0113。注藥后實驗二MAP的最后值比實驗一MAP的最后值低P0007。2實驗一注藥后患者恢復(fù)清醒時MAP的最后值比注藥前MAP的基礎(chǔ)值低P0030實驗二注藥后至實驗停止時MAP的最后值也比注藥前MAP的基礎(chǔ)值低P0001。3兩實驗注藥前HR的基礎(chǔ)值無統(tǒng)計學(xué)差異P0709，注藥后實驗二HR的最后值比實驗一的最后值低P0001。4實驗一注藥后至患者恢復(fù)清醒時HR的最后值與注藥前的基礎(chǔ)值相比，兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異P0715；實驗二注藥后至實驗結(jié)束時HR的最后值比注藥前的基礎(chǔ)值低P0005。結(jié)論1丙泊酚單次靜脈注射對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅有抑制作用。2丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼可增強丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅的抑制作用。3丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼未能影響丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅達到最大抑制的時程。4丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼未能影響丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP的潛伏期。

簡介：點擊查看更多骨代謝標(biāo)記物TRACP5b、CTX-Ⅰ、BALP在銀屑病關(guān)節(jié)炎骨質(zhì)破壞中的意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的對通過酶消化法獲取的兔尺骨皮質(zhì)骨細(xì)胞進行鑒定探討其體外生長、增殖能力及理想的作為種子細(xì)胞的代數(shù)檢測兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞在自制小牛脫蛋白松質(zhì)骨、凍干松質(zhì)骨XKCFDB系列同種骨及可吸收性明膠海綿三種支架上的生長情況對三種支架材料與兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞的生物相容性進行評價并用不同的細(xì)胞密度與三種支架材料復(fù)合培養(yǎng)探求合適的細(xì)胞接種密度。為骨組織工程的細(xì)胞來源、載體材料的選擇和進一步動物體內(nèi)試驗提供實驗依據(jù)。方法與結(jié)果第一章兔皮質(zhì)骨來源成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定的實驗研究從3月齡新西蘭大白兔雌雄不限獲取尺骨皮質(zhì)骨通過酶消化法獲取原代細(xì)胞適時傳代。每日倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及增殖特征MTT法檢測細(xì)胞生長和增殖情況繪制生長曲線檢測第2、3、6、7和8代細(xì)胞ALP行ALP染色、I型膠原免疫組織化學(xué)染色及骨鈣素免疫組化染色對細(xì)胞進行鑒定。結(jié)果分離培養(yǎng)出的原代細(xì)胞形態(tài)類似成纖維細(xì)胞具有良好的體外增殖能力細(xì)胞倍增時間約為7天各項染色檢測呈強陽性。細(xì)胞增殖速度第1～2天各代細(xì)胞無差別P＞005第3天開始第7、8代細(xì)胞落后于第2、3和6代細(xì)胞一直持續(xù)到第10天P＜005而第2、3代同第6代細(xì)胞及第7代同第8代細(xì)胞之間無顯著性差異P＞005。ALP檢測第2、3、6代成骨細(xì)胞高于第7、8代細(xì)胞P＜005。第二章兔皮質(zhì)骨來源成骨細(xì)胞與三種支架材料的復(fù)合培養(yǎng)將成骨細(xì)胞接種到三種支架材料上進行體外復(fù)合培養(yǎng)用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架材料上的生長、增殖情況并進行MTT、細(xì)胞上架率、ALP及骨鈣素檢測。結(jié)果倒置相差顯微鏡顯示三種支架為多孔網(wǎng)狀孔隙互相通連隨培養(yǎng)時間的延長細(xì)胞生長旺盛增殖迅速。掃描電鏡顯示復(fù)合培養(yǎng)3D時有較多的細(xì)胞粘附并鋪展在支架上培養(yǎng)6D時細(xì)胞完全伸展呈長梭形10D時細(xì)胞分泌較多的細(xì)胞外基質(zhì)重疊生長并連接成網(wǎng)狀尤以兩種骨性材料組明顯。MTT檢測顯示三種支架材料在實驗前期不影響成骨細(xì)胞的生長、增殖P＞005后期9D、12D能促進成骨細(xì)胞的增殖及分泌與對照組比較有顯著性差異P＜005而三種支架材料組之間無顯著性差異P＞005。細(xì)胞上架率當(dāng)細(xì)胞接種密度為1106ML時可吸收明膠海綿細(xì)胞上架率最高為4552±315％。ALP檢測細(xì)胞密度為1105ML時各組之間無顯著性差異P＞005細(xì)胞密度為1106ML時三種支架材料組高于對照組P＜005三種支架材料組之間無顯著性差異P＞005細(xì)胞密度為6106ML及1107ML時可吸收明膠海綿組＞小牛脫蛋白松質(zhì)骨組＞凍干松質(zhì)骨組＞對照組P＜005在12D時細(xì)胞密度為6106ML的各組支架材料ALP＞細(xì)胞密度為1107ML的各組支架材料ALP。骨鈣素檢測第14天小牛脫蛋白松質(zhì)骨組及凍干松質(zhì)骨組明顯高于對照組及可吸收明膠海綿組P＜005第21天及第28天小牛脫蛋白松質(zhì)骨組＞凍干松質(zhì)骨＞可吸收明膠海綿組＞對照組P＜005。結(jié)論1、兔尺骨皮質(zhì)骨體外可以培養(yǎng)出成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞具有增殖、分泌功能其中第2、3、6代細(xì)胞增殖和分泌功能強于第7、8代細(xì)胞。新西蘭大白兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞理想的作為種子細(xì)胞的代數(shù)為26代細(xì)胞。2、三種支架材料與兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞理想細(xì)胞接種密度為1106M1～6106ML隨細(xì)胞接種密度上升細(xì)胞上架率在下降當(dāng)細(xì)胞接種密度為1106ML時可吸收明膠海綿細(xì)胞上架率最高為4552±315％。3、在理想接種密度下ALP檢測可吸收明膠海綿＞小牛脫蛋白松質(zhì)骨＞凍干松質(zhì)骨＞對照組骨鈣素檢測小牛脫蛋白松質(zhì)骨＞凍干松質(zhì)骨＞可吸收明膠海綿＞對照組。4、本實驗制備的小牛脫蛋白松質(zhì)骨與兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞具有良好的生物相容性及骨誘導(dǎo)性且制備方便價格低廉是很好的骨替代材料把小牛脫蛋白松質(zhì)骨與兔皮質(zhì)骨成骨細(xì)胞復(fù)合構(gòu)建組織工程骨進行進一步試驗是可行的。