PTHrP和Notch雙信號(hào)通路調(diào)控骨骺干細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、目的：探索PTHrP、Notch雙信號(hào)通路對(duì)骨骺干細(xì)胞增殖的調(diào)控規(guī)律及二者之間的相互作用。
　　 方法：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：取24h內(nèi)新生大鼠股骨體外器官培養(yǎng)，分別用PTHrP信號(hào)通路激活劑PTHrP(1~34)和PTHrP受體競(jìng)爭(zhēng)抑制物PTHrP(7~34)，Notch信號(hào)通路激活劑Jagged1/Fc和抑制劑DAPT處理，空白對(duì)照加PBS緩沖液，培養(yǎng)72h后收集標(biāo)本行HE染色比較骨骺干細(xì)胞層在骨骺全長(zhǎng)中比值和BrdU染色檢測(cè)細(xì)胞增殖情

2、況，并用免疫組化染色方法檢測(cè)當(dāng)PTHrP信號(hào)通路被干預(yù)時(shí)Notch信號(hào)通路配體Jagged1、受體NICD蛋白的表達(dá)情況，及當(dāng)Notch信號(hào)通路被干預(yù)時(shí)PTHrP蛋白的表達(dá)情況。體外實(shí)驗(yàn)：采用機(jī)械分離和酶消化法分離培養(yǎng)骨骺干細(xì)胞，與PTHrP(1~34)、PTHrP(7~34)共培養(yǎng)后，用Western印跡檢測(cè)Jagged1、NICD蛋白的表達(dá)，同時(shí)進(jìn)一步通過構(gòu)建PTHrP、NICD過表達(dá)和RNAi慢病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的骨骺干細(xì)胞，在用W

3、estern印跡檢測(cè)相應(yīng)基因轉(zhuǎn)染成功的前提下，檢測(cè)當(dāng)PTHrP信號(hào)通路被干預(yù)時(shí)Jagged1、NICD蛋白的表達(dá)情況，及當(dāng)Notch信號(hào)通路被干預(yù)時(shí)PTHrP蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：在體外器官培養(yǎng)24h內(nèi)新生大鼠股骨實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，PTHrP(1~34)、Jagged1/Fc處理組靜止區(qū)骨骺干細(xì)胞層長(zhǎng)度在骨骺全長(zhǎng)中比值明顯增高，BrdU陽(yáng)性細(xì)胞率也增高(P＜0.01)，促細(xì)胞增殖作用明顯；而PTHrP(7~34)、D

4、APT處理組靜止區(qū)骨骺干細(xì)胞層長(zhǎng)度在骨骺全長(zhǎng)中比值明顯降低，BrdU陽(yáng)性細(xì)胞率也降低(P＜0.05)，抑制骨骺干細(xì)胞增殖。在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)當(dāng)PTHrP信號(hào)通路被激活時(shí)，Jagged1、NICD蛋白的表達(dá)增高，當(dāng)PTHrP信號(hào)通路被抑制時(shí)，Jagged1、NICD蛋白的表達(dá)則降低；而當(dāng)Notch信號(hào)通路被激活時(shí)，PTHrP蛋白的表達(dá)降低，當(dāng)Notch信號(hào)通路被抑制時(shí)，PTHrP蛋白的表達(dá)增高。
　　 結(jié)論：從細(xì)胞水平、器官水平