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文檔簡介
1、叢枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌在自然界中分布非常廣泛,據統計數據顯示:地球上80%的維管植物都可與其形成互惠共生的關系。它們是土壤微生物群落中重要的組成部分,并且在農業(yè)中扮演著重要的角色。由于AM真菌本身具有專性共生的特性,純培養(yǎng)技術到現在還無進展,雙重培養(yǎng)技術,是近幾十年時間人們用來探索AM真菌理化性質、形態(tài)結構、生物及非生物脅迫應答、根際生物之間的相互作用和分類系統進化等方面的一種理想模式,這種模式
2、甚至為后期方便與分子生物學技術相結合,為系統的研究AM真菌打下堅實的基礎。在前人的研究基礎上,本文探索了離體條件下AM真菌孢子最佳消毒方法和培養(yǎng)基質以及影響AM真菌孢子萌發(fā)、菌絲生長的相關因子。研究了無菌條件下利用發(fā)根農桿菌誘導胡蘿卜產生毛狀根與AM真菌建立雙重培養(yǎng)體系。論文取得的主要結果如下:
以發(fā)根農桿菌A4感染受傷的胡蘿卜外植體并得到轉化根的最佳誘導條件為,共培養(yǎng)基:VC+AS(乙酰丁香酮)的水瓊脂培養(yǎng)基,OD600值為
3、0.5~0.6時的菌液濃度可保證較高的發(fā)根率,加菌量為20μL,共培養(yǎng)時間2~3天,選擇培養(yǎng)基加羧卡青霉素的量為500mg/L,除菌時間4天。
AM真菌孢子萌發(fā)及菌絲生長的最佳培養(yǎng)基為水瓊脂。在3種處理中,處理3的消毒效果最好,即用無菌過濾膜加注1%氯胺T+200mg/L鏈霉素+100mg/L慶大霉素+1%Tween20處理15min,無菌蒸餾水漂洗6~10,孢子的萌發(fā)率達到了80.67%。
通過在培養(yǎng)Glomus
4、intraradices孢子的水瓊脂培養(yǎng)基中加入不同濃度的葡萄糖和不同濃度的根浸出液處理進行試驗。結果表明,當葡萄糖濃度為5g/L時菌絲長度超過了對照組并且達到最長,這說明微量的葡萄糖可以促進菌絲生長分支。當根浸出液濃度為50mL/L時,孢子的萌發(fā)率和菌絲長度效果最佳,濃度為100~200mL/L的根浸出液也能明顯的促進菌絲生長。
在以上實驗的基礎上,我們又添加了四種不同的氮源(NaNO3,NH4Cl,NH4NO3,尿素),來
5、探索葡萄糖、根浸出液分別和四中不同氮源共同作用對AM真菌孢子萌發(fā)的影響,結果顯示:在葡萄糖加入到不同氮源的培養(yǎng)基中,孢子萌發(fā)和菌絲的生長都不顯著,培養(yǎng)20天后,萌發(fā)率最大的葡萄糖+尿素培養(yǎng)基中也只達到57.33%,菌絲中除了葡萄糖+NH4NO3其余并沒有明顯差異,在根浸出液加入到不同氮氮源培養(yǎng)基中,孢子萌發(fā)都有顯著的增加,萌發(fā)率在根浸出液+尿素的培養(yǎng)基中高達80.33%,其余的也都在61%左右,根浸出液+NH4NO3培養(yǎng)基中菌絲長度達到
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