雞干擾素α和γ在家蠶中的表達及其抗病毒活性檢測.pdf

1、隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，雞類疾病的防治越來越引起人們的重視。干擾素是一類多功能的細胞因子，在抗病毒、腫瘤和寄生蟲方面都有良好的使用效果，對各種養(yǎng)雞業(yè)常見的疾病，如新城疫、禽流感等都有良好的治療作用。因此，開發(fā)高活性的雞干擾素制品用于雞類疾病的防治具有良好的應用前景。
　　本研究選取GenBank數(shù)據(jù)庫中的ChIFN-α（GenBank:NM_205427.1）和ChIFN-γ(GenBank:NM_205149.1)基因序列，按家蠶密碼

2、子偏好性對其進行優(yōu)化。利用OptimumGeneTM方法，將ChIFN-α基因和ChIFN-γ基因的CAI值分別提高到0.88和0.89，調整ChIFN-α基因和ChIFN-γ的GC含量分別為49.13％和42.79％。同時，替換掉序列中的稀有密碼子和能使mRNA產生發(fā)夾結構的密碼子，并去除原始序列中的常用限制性內切酶酶切位點，然后采取化學合成法合成用于表達的完整的ChIFN-α和ChIFN-γ序列。將合成的ChIFN-α和ChIFN-

3、γ序列插入桿狀病毒基因組形成重組病毒，利用桿狀病毒多基因表達技術在家蠶體內共表達ChIFN-α和ChIFN-γ。表達產物經Western blotting檢測，證明ChIFN-α和ChIFN-γ成功在家蠶內表達。利用CEF/VSV-GFP系統(tǒng)檢測表達產物的抗病毒活性，發(fā)現(xiàn)家蠶共表達的ChIFN-α和ChIFN-γ效價可達7.64×106U/mL。利用空斑篩選法篩選重組病毒，測得最高表達量的重組病毒共表達的ChIFN-α和ChIFN-γ的

4、效價可達1.78×107U/mL，將表達量提高了約2.3倍。同時，檢測了實驗室利用桿狀病毒單獨表達的ChIFN-α以及ChIFN-γ的抗病毒活性。ChIFN-α的抗病毒活性為3.66×106U/mL，ChIFN-γ的抗病毒1.73×106U/mL。對家蠶表達的ChIFN-α進行了初步純化，結果表明經酸變性純化后可初步去除掉蠶蛹中60kDa左右的雜蛋白，ChIFN-α主要存在于變性后收獲的上清中。
　　本研究利用家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)