乙型肝炎病毒X蛋白拮抗α干擾素抗病毒活性機(jī)理的初步研究.pdf

1、目的：探討乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)對(duì)α干擾素(IFN-α)誘導(dǎo)的抗病毒蛋白的影響及相關(guān)作用機(jī)理。
　　方法：將未處理的肝胚瘤細(xì)胞株 HepG2細(xì)胞作為空白組;將轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒pcDNA3.1(-)的HepG2細(xì)胞作為空載體組;將轉(zhuǎn)染HBx蛋白表達(dá)質(zhì)粒FL1-145HBx的HepG2細(xì)胞作為轉(zhuǎn)染組;預(yù)處理組是將細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒FL1-145HBx6小時(shí)后,再以細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶途徑(ERK途徑)抑制劑(PD98059,以DMEM培養(yǎng)

2、液配制成40μmol/L)處理細(xì)胞12小時(shí)。各組細(xì)胞以1,000IU/ml的IFN-α作用6小時(shí)后,用Western blot方法檢測(cè)各種相關(guān)蛋白的表達(dá);以RT-PCR法分析IFN-α抗病毒蛋白MxA、STAT1的mRNA水平。
　　以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV全基因組,能夠分泌完整HBV病毒顆粒子的肝胚瘤細(xì)胞株HepG2.2.15細(xì)胞作為細(xì)胞模型,進(jìn)行質(zhì)粒 pcDNA3.1-Flag-MxA轉(zhuǎn)染,并應(yīng)用1,000IU/ml的IFN-α處理,

3、Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MxA蛋白的表達(dá),ELISA方法檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞分泌的HBV HBsAg和HBeAg量。
　　結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)染HBx重組質(zhì)粒的HepG2細(xì)胞能夠表達(dá)HBx蛋白;轉(zhuǎn)染組細(xì)胞經(jīng)IFN-α誘導(dǎo)處理后,STAT1蛋白磷酸化水平(p-STAT1)、STAT1蛋白表達(dá)總量(t-STAT1)以及STAT1 mRNA水平與空載體組和未轉(zhuǎn)染組相比顯著減少(P<0.05),而經(jīng)ERK抑制劑PD9805

4、9預(yù)處理的轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中MxA、STAT1的mRNA水平接近于空載體組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞水平。HepG2.2.15細(xì)胞被轉(zhuǎn)染并表達(dá)抗病毒蛋白MxA后,其上清液中HBsAg和HBeAg的分泌量明顯低于IFN-α單獨(dú)處理組(P<0.05)。
　　結(jié)論：(1)HBx蛋白影響IFN-α誘導(dǎo)的JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分子的激活,抑制抗病毒蛋白MxA的表達(dá);(2)ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶途徑)的活化可能參與這一抑制過程;(3)在體