重組鴨α-干擾素抗鴨乙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)感染研究.pdf

1、本研究對(duì)重組鴨α-干擾素(DuIFN-α)基因工程菌BL21(DE3)/pET32a<'+>-DuIFN-α表達(dá)條件、DuIFN-α抗鴨乙型肝炎病毒(DHBV)實(shí)驗(yàn)感染鴨效果進(jìn)行系統(tǒng)研究，結(jié)果如下： 1．重組鴨α-干擾素基因工程菌表達(dá)條件對(duì)影響 重組鴨α-干擾素 (DuIFN-α)基因工程菌 BL21(DE3)/pET32a<'+>-DuIFN-α表達(dá)的主要因素：IPTG濃度、誘導(dǎo)時(shí)期、收獲時(shí)間、培養(yǎng)誘導(dǎo)溫度、葡萄糖濃度

2、及培養(yǎng)基等進(jìn)行了優(yōu)化，得到基因工程菌BL21(DE3)/pET32a<'+>-DuIFN-α表達(dá) DuIFN-α的最佳條件為：以TB+5g/L 葡萄糖培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)至菌體OD<,600>=0.8-1.1時(shí)，加入IPTG至終濃度0.2mmol/L，30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)4-5h。在最佳表達(dá)條件下，DuIFN-α的相對(duì)含量為34.1％，總含量 (終菌體濃度×相對(duì)含量)達(dá)79.9。 2．DuIFN-α抗鴨乙型肝炎病毒(DHBV)實(shí)驗(yàn)

3、 感染鴨效果利用鎳金屬螯合介質(zhì)填料對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化和復(fù)性，獲得在鴨胚成纖維細(xì)胞上抗水皰性口炎病毒(VSV)效價(jià)為12800U/mg的重組DuIFN-α。重組鴨α-干擾素按500 U、1000 U、2000 U三個(gè)劑量分別對(duì)被 DHBV 感染7天的北京鴨進(jìn)行肌注治療，每隔1 d給藥1次，連續(xù)15 d，同時(shí)設(shè)立拉米夫定對(duì)照組和生理鹽水對(duì)照組，于用藥前、用藥后5 d、10 d、15d及停藥3 d采血用FQ-PCR檢測(cè)血清中 DHBV DNA

4、含量；同時(shí)采集肝、胰腺、腎、脾、心、肺、腦以及十二指腸等器官用于FQ-PCR 檢測(cè)組織中DHBV DNA含量。結(jié)果表明： 拉米夫定對(duì)照組于用藥后，血清DHBV DNA含量迅速下降，但停藥后病毒回升至用藥前水平。鴨α-干擾素各劑量組用藥后血清中DHBV DNA含量均下降，2000U組用藥第5d、10 d、15 d其血清病毒含量與用藥前水平差異顯著(P≤0.05)，1000U組用藥第10d、15 d血清病毒含量與用藥前水平差異均顯著

5、(P≤0.05)，500U 組各時(shí)間點(diǎn)與用藥前水平差異均不顯著，停藥后，1000U 組有持續(xù)抑制 DHBV 的作用，而2000U 和500U 組均反彈。即鴨α-干擾素能有效的降低血清中DHBV DNA含量，具有抑制體內(nèi) DHBV 復(fù)制的作用，其作用大小與劑量及用藥時(shí)間相關(guān)；2000U和1000U組抑制作用略弱于拉米夫定且相互差異不顯著，但停藥后，鴨α-干擾素1000U 組反彈幅度低于拉米夫定組和2000U組，具有持續(xù)效應(yīng)。 鴨α