口蹄疫病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立與評(píng)價(jià).pdf

1、口蹄疫(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus，F(xiàn)MDV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動(dòng)物。由于FMDV是單股RNA病毒，有很高的變異能力，其抗原性的變異非常頻繁，故給口蹄疫的防制帶來了很大的困難。快速準(zhǔn)確地診斷FMD對(duì)于及時(shí)控制撲滅疫情極其重要，因此，F(xiàn)MDV快速檢測方法一直都是各國學(xué)者研究的熱點(diǎn)問題。

2、 目前，口蹄疫病毒的檢測方法很多，如病毒分離鑒定、血清學(xué)檢測、分子生物學(xué)檢測等。這些檢測方法雖然為口蹄疫的診斷提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持，但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟，一些新的分子生物學(xué)檢測技術(shù)還在應(yīng)運(yùn)而生，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(Loop-reediated isothermal amplification，LAMP)就是新型的口蹄疫病分子生物學(xué)檢測技術(shù)之一。 本試驗(yàn)從Genebank中獲得口蹄疫病毒亞洲Ⅰ型3D區(qū)的基因序列，應(yīng)

3、用MegAlign軟件分析其基因序列，根據(jù)LAMP引物設(shè)計(jì)原則，用PrimerExplorer在這些序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)內(nèi)、外和環(huán)三對(duì)引物，建立了快速檢測口蹄疫病毒的LAMP檢測方法，并進(jìn)行了敏感性和特異性的確定；與此同時(shí)還對(duì)口蹄疫病毒包含上述目標(biāo)序列的一段基因克隆后插入T載體，以便為所建立的LAMP檢測方法提供陽性物質(zhì)，并對(duì)此陽性物質(zhì)進(jìn)行了LAMP反應(yīng)條件和反應(yīng)體系的優(yōu)化。試驗(yàn)結(jié)果表明：本試驗(yàn)所建立的快速檢測口蹄疫病毒的LAMP檢測方法