犬細(xì)小病毒分離鑒定及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測方法的建立.pdf

1、犬細(xì)小病毒(Canine parvovirus，CPV)，是引起犬出血性腸炎和幼犬心肌炎的主要病原，具有高度的接觸傳染性，發(fā)病率和病死率分別為20％～100％和10％～50％，給全球的養(yǎng)犬業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 本研究主要由兩方面的內(nèi)容組成：
　　 1．探究犬細(xì)小病毒上海分離株的流行和變異情況通過對上海某寵物醫(yī)院疑似犬細(xì)小病毒病例的犬糞樣中進(jìn)行病毒分離，經(jīng)形態(tài)學(xué)、理化學(xué)和分子病毒學(xué)等鑒定：病毒能在CRFK細(xì)胞上生長

2、，并產(chǎn)生細(xì)胞腫脹、變圓、破碎、脫落等細(xì)胞病變；病毒粒子在電鏡下觀察呈立體對稱，直徑為20～24nm，無囊膜；能凝集豬紅細(xì)胞，不能凝集人、雞的紅細(xì)胞，并能被犬細(xì)小病毒陽性血清所抑制。動物實(shí)驗(yàn)表明，試驗(yàn)組犬均出現(xiàn)細(xì)小病毒感染癥狀。結(jié)果顯示該分離株為犬細(xì)小病毒。
　　 參考GenBank上細(xì)小病毒3個(gè)基因型的全基因設(shè)計(jì)6對擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR，分段擴(kuò)增出目標(biāo)片段，克隆于T載體上，測定序列并拼接，用MEGA軟件、NJ法構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果顯示

3、，該分離株犬細(xì)小病毒全基因?yàn)?758bp，與GenBank中各種基因型犬細(xì)小病毒的VP2基因核苷酸序列同源性比較發(fā)現(xiàn)，CPV-SH克隆與2a亞型犬細(xì)小病毒核苷酸同源性最高為99.7％，與2型、2b亞型、2c亞型的同源性分別為98.8％、99.5％、99.5％。最終確認(rèn)CPV-SH分離株屬于犬細(xì)小病毒2a亞型，與國內(nèi)北京分離株CPV/BJ082親緣關(guān)系最近，同源性為99.9％。
　　 2．研究建立一種LAMP方法來檢測犬細(xì)小病毒本