環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)嗜水氣單胞菌方法的建立.pdf

1、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(簡(jiǎn)稱LAMP)是利用4個(gè)特殊設(shè)計(jì)的引物和具有鏈置換活性的DNA聚合酶，在恒溫條件下特異、高效、快速地?cái)U(kuò)增DNA的新技術(shù)。該技術(shù)在1h內(nèi)能擴(kuò)增出10<'9>靶序列拷貝，擴(kuò)增產(chǎn)物是一系列反向重復(fù)的靶序列構(gòu)成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)和多環(huán)花椰菜樣結(jié)構(gòu)的DNA片段的混合物，電泳后在凝膠上顯現(xiàn)出由不同大小的區(qū)帶組成的階梯式圖譜。LAMP技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速、準(zhǔn)確和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)在核酸的科學(xué)研究、疾病的診斷和轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)等領(lǐng)域得到了

2、日益廣泛的應(yīng)用。 本研究針對(duì)已報(bào)道的嗜水氣單胞菌(Ah)保守的氣溶素基因(Aer)設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性的引物，利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)來(lái)擴(kuò)增Ah基因組DNA，擴(kuò)增出一系列反向重復(fù)的靶序列構(gòu)成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)和多環(huán)花椰菜樣結(jié)構(gòu)的DNA片段的混合物，成功建立了LAMP檢測(cè)Ah的新方法。該方法特異性好、敏感性高而且節(jié)省時(shí)間。 本實(shí)驗(yàn)分別設(shè)計(jì)了LAMP和PCR的溫度梯度和濃度梯度實(shí)驗(yàn)，從而獲知LAMP檢測(cè)Ah的最適溫度是64℃，