口蹄疫病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測方法的建立.pdf

1、C l a s s i f i e d I n d e x ：U ．D ．C ：D i s s e r t a t i o nf o rt h eM a s t e r ’SD e g r e e i nS c i e n c eD E V E L O P M E N T O F T A Q M A NR E A L - —T I M E Q U A N T I T A T I V E R T - - P C RA S S A Y F

2、O R D E T E C T I O N O FF O O T ．A N D ．M O U T H D I S E A S E ⅥR U S( F M D V )C a n d i d a t e ：S u p e r v i s o r ：A c a d e m i c D e g r e e A p p l i e d f o r ：S p e e i a l i t y ：D a t e o f 0 r a lE x a m i

3、 n a t i o n ：U n i v e r s i t y ：2H u X i a o l i a n gP r o f ．L iC h u n ．y a nM a s t e r o f s c i e n c eM i c r o b i o l o g yM a y ．2 0 1 1N o r t h e a s t A g r i c u l m r a l U n i v e r s i t y～b¨一．1、

4、▲■【■r目錄目 錄中文摘要???????????????????????????????????．I英文摘要???????????????????????????????????I I Il 前言????????????????????????????????????????????????l1 ．1 研究目的與意義?????????????????????????????。11 ．2 文獻(xiàn)綜述????????????????????

5、????????????。21 ．2 ．1 口蹄疫的危害與歷史??????????????????????????．21 ．2 ．2 口蹄疫的病原?????????????????????????????31 ．2 ．3 口蹄疫的特征?????????????????????????????31 ．2 ．4 口蹄疫的分子生物學(xué)??????????????????????????31 ．2 ．5 口蹄疫診斷方法的研究進(jìn)展?????????

6、??????????????82 材料與方法????????????????????????????????．．1 52 ．1 組織、質(zhì)粒與菌種????????????????????????????1 52 ．2 常用生物學(xué)試劑?????????????????????????????。1 52 ．3 主要儀器????????????????????????????????．1 52 ．4 總R N A 的提取及反轉(zhuǎn)錄????????

7、?????一????????????1 52 ．5 口蹄疫病毒引物和探針的設(shè)計???????????????????????．1 62 ．6 豬內(nèi)參基因1 3 ．a(chǎn) e t i n 引物和探針的設(shè)計???????????????????。1 72 ．7 口蹄疫病毒2 B 基因的擴(kuò)增????????????．．．????????????1 72 ．8 豬B - a e t i n 基因的擴(kuò)增????????????????????????

8、???1 82 ．9P C R 產(chǎn)物純化??????????????????????????????l 82 ．1 0 目的基因D N A 產(chǎn)物的連接與轉(zhuǎn)化?????????????????????1 82 ．1 0 ．1 P C R 膠回收產(chǎn)物與p M D l 8 ．T 質(zhì)粒載體的連接??????????????．1 82 ．1 0 ．2D H 5 t x 感受態(tài)細(xì)胞的制備???????????????????????1 82 ．1

9、0 3 質(zhì)粒D N A 的轉(zhuǎn)化與陽性質(zhì)粒的篩選??????????????????。1 92 。l O ．4 質(zhì)粒的提取????????????????????????????．．1 92 ．1 0 ．5 質(zhì)粒D N A 的鑒定與測序???????????????????????2 02 ．1 1F M D V T a q M a n 熒光定量R T - P C R 檢測方法的建立??????????????2 02 ．1 1 ．1F

10、M D V T a q M a n 熒光定量R T - P C R 陽性模板反應(yīng)體系的優(yōu)化????????2 02 ．11 ．2F M D V T a q M a n 熒光定量P C R 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立???????2 02 ．1 1 ．3F M D V T a q M a n 熒光定量R T ．P C R 的特異性???????????- ???．2 02 ．11 ．4F M D V T a q M a n 實時熒光定量

11、R T ．P C R 的重復(fù)性?????????????2 12 ．11 ．5 F M D V T a q M a n 實時熒光定量R T ．P C R 的敏感性?????????????2 l2 ．1 1 ．6F M D V 樣品的檢測?????????????????????????。2 l2 ．1 2 豬1 3 - a c t i nT a q M a n 熒光定量R T - P C R 檢測方法的建立?????????????2