未成熟鼠反復(fù)驚厥發(fā)作后海馬內(nèi)γ-氨基丁酸A受體亞單位α1和γ2變化及其神經(jīng)行為學(xué)影響.pdf

1、目的：探討未成熟大鼠反復(fù)驚厥(Recurrent seizures，RS)發(fā)作后GABAA受體亞單位α1和γ2表達(dá)及其遠(yuǎn)期腦損傷的影響，以了解該γ-氨基丁酸A受體（GABAA受體）亞單位在未成熟腦癲癇發(fā)作中的作用。
　　方法：第一部分：通過(guò)三氟乙醚誘導(dǎo)方法，建立新生期大鼠反復(fù)驚厥動(dòng)物模型，并觀察其神經(jīng)行為學(xué)改變；第二部分：隨機(jī)選取Waster大鼠72只，分為兩組：正常對(duì)照組（CONT組，36只）、反復(fù)驚厥組（RS組，36只）。新生

2、期反復(fù)驚厥動(dòng)物模型為每日反復(fù)吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作5次，每次間隔2h，連續(xù)5d；正常對(duì)照組同樣操作但不吸入三氟乙醚。分別于生后不同時(shí)間通過(guò)平面翻正、前肢懸掛、懸崖回避、負(fù)趨地性、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、平衡木實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)等評(píng)價(jià)其神經(jīng)行為情況；并分別于末次驚厥后1d及25d、60d取大腦海馬組織，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)12只，采用免疫印跡技術(shù)(Western blot)及熒光定量RT-PCR法測(cè)定海馬GABAA受體亞單位α1和γ2的表達(dá)。

3、　　結(jié)果：1、行為學(xué)結(jié)果：（1）懸崖回避：RS組大鼠從邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需時(shí)間較CONT組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)；（2）負(fù)趨地性：RS組大鼠倒轉(zhuǎn)180℃所需時(shí)間較CONT組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)。（3）曠場(chǎng)試驗(yàn)表明，中央格停留時(shí)間RS組較CONT明顯組延長(zhǎng)(P<0.05)；跨越格數(shù)RS組較CONT組顯著減少(P<0.01)。（4）平衡木試驗(yàn)表明，RS組大鼠平均評(píng)分明顯低于CONT組（P<0.05）。（5Morris水迷宮檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果：

4、①登臺(tái)潛伏期：經(jīng)過(guò)5天定位航行試驗(yàn)，兩組大鼠的逃避潛伏期呈逐漸縮短趨勢(shì)。試驗(yàn)第3d、4d，RS組尋找平臺(tái)時(shí)間明顯短于CONT組(P<0.05)；第5d時(shí)RS組尋找平臺(tái)時(shí)間顯著短于CONT組(P<0.01)。②搜尋策略：CONT組大鼠多采用直線和趨向式策略，而RS組大鼠則多以邊緣式和隨機(jī)式為主。③穿越平臺(tái)次數(shù)：RS組大鼠60s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)較CONT組明顯減少(P<0.05)。
　　2、Western blot檢測(cè)結(jié)果：隨著大鼠日齡

5、的增長(zhǎng)，海馬內(nèi)α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平逐漸增高。末次驚厥后1d（即10日齡），驚厥組大鼠GABAA受體α1亞單位蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05），GABAA受體γ2亞單位蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低（P<0.01）；末次驚厥后25d（即35日齡），驚厥組大鼠GABAA受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組均明顯降低（P<0.05）；末次驚厥后60d（即70日齡），驚厥組大鼠GABAA受體α1和γ2亞單位蛋白表達(dá)

6、水平較對(duì)照組均明顯降低（P<0.05）。
　　3、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：隨著大鼠日齡的增長(zhǎng)，海馬內(nèi)α1和γ2亞單位mRNA表達(dá)水平逐漸增高。末次驚厥后1d（即10日齡）：驚厥組大鼠GABAA受體α1亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）；末次驚厥25天（即35日齡）：驚厥組大鼠GABAA受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平較對(duì)照

7、組明顯降低(P<0.05)；末次驚厥60天（即70日齡）：驚厥組大鼠GABAA受體α1亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，γ2亞單位mRNA在海馬的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)。
　　結(jié)論：(1)化學(xué)致痙劑三氟乙醚可以誘導(dǎo)Waster大鼠反復(fù)驚厥，新生期大鼠反復(fù)驚厥發(fā)作會(huì)對(duì)大鼠產(chǎn)生一定程度的腦損害，致使大鼠生長(zhǎng)發(fā)育落后，神經(jīng)反射延遲，并產(chǎn)生成年期新環(huán)境適應(yīng)能力下降，以及遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)、記憶能力損害