年齡和視覺經(jīng)驗對大鼠視皮層γ-氨基丁酸A受體α-,1-亞單位表達(dá)的影響.pdf

1、目的：(1)觀察從出生到生后90天(P90)的大鼠視皮層中γ-氨基丁酸A受體功能亞單位GABAARα1的表達(dá)隨發(fā)育的變化；(2)觀察關(guān)鍵期內(nèi)單眼形覺剝奪大鼠視皮層中GABAARα1的表達(dá)變化；(3)觀察暗飼養(yǎng)對關(guān)鍵期內(nèi)和成年大鼠視皮層中GABAARα1受體表達(dá)的影響。從分子水平上研究年齡和視覺經(jīng)驗與視覺系統(tǒng)可塑性的關(guān)系。 方法：(1)45只健康新生Wistar大鼠，雌雄不限，隨機(jī)分成9組，每組5只，正常飼養(yǎng)，分別于出生后0、7、

2、14、21、28、35、45、60、90天處死。(2)健康WistarP14大鼠15只，隨機(jī)分成3組，每組5只，在P14行單眼縫合術(shù)制備單眼形覺剝奪模型，分別飼養(yǎng)至P21、P28、P45取材。(3)①將剛出生的5只健康Wistar大鼠連同母鼠一起投入暗箱內(nèi)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)天數(shù)為21天，幼鼠自出生至取材未接受過視覺刺激，21天灌注取材。②生后80天正常光線環(huán)境下成長的健康Wistar大鼠5只投于暗箱內(nèi)飼養(yǎng)10天后灌注取材。實驗大鼠麻醉、灌注、固

3、定、開顱、冠狀切取后部腦組織，置于4％多聚甲醛中4℃固定24～48h后，按常規(guī)石蠟程序包埋。行5μm冠狀連續(xù)切片后，進(jìn)行常規(guī)HE和免疫組織化學(xué)方法染色。顯微鏡下觀察GABAARα1在視皮層的表達(dá)情況。Olympus顯微攝像系統(tǒng)采集圖片，圖像分析軟件進(jìn)行累計光密度(IOD)值測定。對IOD值進(jìn)行分析和比較，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，用SPSS16.0軟件包處理，發(fā)育不同時限的光密度值采用方差分析，單眼形覺剝奪組、視覺剝奪組與

4、正常組間采用成組設(shè)計的t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：(1)比較發(fā)育不同時限大鼠視皮層中GABAARα1的IOD值，可以看出GABAARα1的表達(dá)隨年齡呈發(fā)育性變化，在出生時的視皮層中即已存在，但含量很少，睜眼前上升緩慢，睜眼后迅速上升，到P21有明顯升高，至P35達(dá)峰值。關(guān)鍵期前的P0、P7、P14組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；P35、P45、P60、P90組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；除此之外的組間兩兩比較差異均

5、有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)GABAARα1蛋白表達(dá)產(chǎn)物在單眼形覺剝奪組減少，密度減低，數(shù)量減少。三個時段剝奪組均較對照組IOD值明顯下降(P<0.05)。(3)①生后即進(jìn)行暗飼養(yǎng)到P21的視覺剝奪組大鼠GABAARα1的表達(dá)較正常發(fā)育組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-9.54，P<0.05)。②GABAARα1在成年暗飼養(yǎng)大鼠視皮層中表達(dá)較正常成年大鼠視皮層中無顯著差異(t=-0，41，P>0.05)。 結(jié)論：(1)

6、Wistar大鼠視皮層中GABAARα1表達(dá)量的發(fā)育性變化與視覺發(fā)育可塑性關(guān)鍵期的起始和終止在時間上具有一定的同步性。(2)單眼形覺剝奪大鼠視皮層中GABAARα1亞單位的表達(dá)在P21、P28、P45明顯低于正常發(fā)育組；而視覺剝奪能增加關(guān)鍵期大鼠視皮層中GABAARα1亞單位的表達(dá)。提示GABAARα1亞單位可能是關(guān)鍵期大鼠視皮層的視覺經(jīng)驗依賴性可塑性變化的一個重要分子基礎(chǔ)。(3)本研究沒有觀察到成年大鼠視皮層中GABAARα1亞單位表