γ-氨基丁酸A受體α1和γ2亞單位調(diào)質(zhì)對未成熟鼠反復(fù)驚厥發(fā)作的遠期作用.pdf

1、目的:探討γ-氨基丁酸A受體(GABA(A)受體)調(diào)質(zhì)(激動劑氯硝西泮(CZP)與拮抗劑氟馬西尼(FMZ))對未成熟鼠反復(fù)驚厥(Recurrent seizures,RS)發(fā)作后,海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位的表達變化及其遠期神經(jīng)行為學影響,以了解GABA(A)受體調(diào)質(zhì)在未成熟鼠驚厥腦損傷中的干預(yù)作用及其意義。
　　方法:出生5d(Postnatal day5,用P5表示,下同)的健康Waster大鼠160只,隨機分為

2、五組:正常對照組(CONT組,n=32)、驚厥組(RS組,n=32)、驚厥后生理鹽水干預(yù)組(NS干預(yù)組,n=32)、驚厥后氯硝西泮干預(yù)組(CZP干預(yù)組,n=32),驚厥后氟馬西尼干預(yù)組(FMZ干預(yù)組,n=32)。除CONT組外其余四組驚厥動物模型為每日反復(fù)吸入三氟乙醚誘導(dǎo)大鼠驚厥發(fā)作5次,每兩次間隔時間2h,連續(xù)5d;CONT組大鼠進行同樣的操作但不吸入三氟乙醚。CZP干預(yù)組和FMZ干預(yù)組大鼠于驚厥結(jié)束后1d起分別給予氯硝西泮6.0mg

3、/(kg·d)、氟馬西尼1.0mg/(kg·d)干預(yù),連續(xù)5d;NS干預(yù)組大鼠于驚厥結(jié)束后1d起給予等量生理鹽水灌胃干預(yù),連續(xù)5d。在不同的時間通過負趨地性、前肢懸掛、平面翻正、懸崖回避實驗、曠場實驗、平衡木實驗以及Morris水迷宮實驗等進行評價其神經(jīng)行為情況;并將各組大鼠分別于末次干預(yù)后當天(即P15)及20d(即P35)、55d(即P70)留取海馬組織,采用免疫印跡技術(shù)及熒光定量RT-PCR法分別測定大鼠海馬GABA(A)受體α1

4、和γ2亞單位的表達。
　　結(jié)果:1、神經(jīng)行為學檢測結(jié)果:(1)懸崖回避實驗:RS組及NS干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時間較CONT組均明顯延長(P<0.05);CZP干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時間較NS干預(yù)組均明顯延長(P<0.05);FMZ干預(yù)組大鼠從木板邊緣退回或轉(zhuǎn)身所需的時間較NS干預(yù)組無顯著性差異(P>0.05);(2)負趨地性實驗:RS組及NS干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時間較CONT組明顯延長(P<0.

5、05)。CZP干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時間較NS干預(yù)組均明顯延長(P<0.05);FMZ干預(yù)組大鼠倒轉(zhuǎn)180°所需時間較NS干預(yù)組明比較無顯著性差異(P>0.05);(3)曠場試驗表明,中央格停留時間CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組均明顯延長(P<0.05);中央格停留時間FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組無顯著性差異;跨越方格數(shù)CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組均顯著減少(P<0.01)?？缭椒礁駭?shù)FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組無顯著性差異(P>0.

6、05);(4)平衡木試驗提示,RS組及NS干預(yù)組大鼠平均評分均明顯低于CONT組(P<0.05),CZP干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組評分均明顯降低(P<0.05)。FMZ干預(yù)組大鼠較NS干預(yù)組評分無顯著性差異(P>0.05)。
　　2、學習記憶能力(Morris水迷宮檢測結(jié)果):(1)登臺潛伏期:經(jīng)過連續(xù)5天(P61-P65)定位航行試驗,五組鼠的逃避潛伏期均呈逐漸縮短的趨勢。試驗第3d和4d,RS組和NS干預(yù)組大鼠尋找平臺的時間明顯長

7、于CONT組(P<0.05);CZP干預(yù)組大鼠尋找平臺的時間明顯長于NS干預(yù)組(P<0.05);第5d時RS組和NS干預(yù)組大鼠尋找平臺的時間均顯著長于CONT組(P<0.01);CZP干預(yù)組大鼠尋找平臺時間顯著長于NS干預(yù)組(P<0.01);FMZ干預(yù)組大鼠尋找平臺時間與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05)。(2)搜尋策略:CONT組大鼠多采用直線和趨向式策略,而RS組、NS干預(yù)組、CZP干預(yù)組和FMZ干預(yù)組大鼠則多以邊緣式和隨

8、機式為主。(3)穿越平臺次數(shù):RS組和NS干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺次數(shù)較CONT組均明顯減少(P<0.05);CZP干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺次數(shù)較NS干預(yù)組均明顯減少(P<0.05)。FMZ干預(yù)組大鼠60s內(nèi)穿越平臺次數(shù)與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　3、Western blot檢測結(jié)果:隨著大鼠日齡的增長,五組大鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位的蛋白表達水平均逐漸升高。末次干預(yù)后當天(即P15

9、),CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05);CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比明顯減少(P<0.05);FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比均略有升高,但無顯著性差異(P>0.05);末次干預(yù)后20d(即P35), CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比較

10、均明顯減少(P<0.05);FMZ干預(yù)組GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05);末次干預(yù)后55d(即P70),CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比較均明顯減少(P<0.05)。FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位蛋白表達水平與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　4、RT-PCR檢測結(jié)果:隨著各組大鼠日齡的增

11、長,各組大鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA的表達水平逐漸升高。末次干預(yù)后當天(即P15):CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1亞單位mRNA在海馬地表達水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少(P<0.01);CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體γ2亞單位mRNA在海馬地表達水平與NS干預(yù)組相比無顯著性差異(P>0.05);FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達水平與NS干預(yù)組相比均略有升高,但無

12、顯著性差異(P>0.05);末次干預(yù)20天(即P35):CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少(P<0.05);FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達水平與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05);末次干預(yù)后55d(即P70),CZP干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達水平與NS干預(yù)組相比較明顯減少(P<0.05

13、)。FMZ干預(yù)組大鼠GABA(A)受體α1和γ2亞單位mRNA在海馬的表達水平與NS干預(yù)組相比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:(1)化學致痙劑三氟乙醚可以誘導(dǎo)Waster大鼠反復(fù)驚厥,新生期大鼠反復(fù)驚厥后給予GABA(A)受體激動劑CZP早期干預(yù),將會對大鼠產(chǎn)生一定程度的腦損害,使大鼠生長發(fā)育落后,神經(jīng)反射延遲,并產(chǎn)生成年期新環(huán)境適應(yīng)能力下降,以及遠期學習、記憶能力損害。
　　(2)未成熟大鼠反復(fù)驚厥后給予GAB

14、A(A)受體激動劑CZP早期干預(yù),短期內(nèi)即明顯影響海馬GABA(A)受體α1和γ2亞單位相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,且該影響將長期存在,并影響蛋白的表達,這可能對腦發(fā)育期神經(jīng)功能的發(fā)育產(chǎn)生長期的影響。
　　(3)未成熟大鼠反復(fù)驚厥發(fā)作后給予GABA(A)受體激動劑CZP早期干預(yù),將導(dǎo)致其遠期神經(jīng)行為學改變和認知損害,也改變了成年期鼠海馬內(nèi)GABA(A)受體亞單位α1和γ2亞單位的表達,這些亞單位表達的長期改變參與到了成年期大鼠記憶損傷和學習的