γ-氨基丁酸B型受體對糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠海馬腦源性神經(jīng)生長因子表達的影響.pdf

1、目的:糖尿病神經(jīng)痛(diabetic neuropathic pain，DNP)是糖尿病的常見并發(fā)癥之一，而在糖尿病患者中，神經(jīng)痛合并抑郁的發(fā)病率也逐漸增加，并嚴重影響糖尿病人的生活。糖尿病患者抑郁發(fā)病率可達到普通人群的1.6-2.0倍，其中2型糖尿病抑郁發(fā)病率更高達13％。糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁的形成機制是非常復雜的，目前已知中樞γ-氨基丁酸B型受體（GABAB受體）的表達變化在其形成中發(fā)揮重要作用，GABAB受體的激動劑和拮抗劑均被證

2、實具有抗抑郁作用，但其具體機制尚不清楚，探討其機制可為臨床治療提供更好的研究方向。
　　GABAB受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布，調(diào)控突觸傳遞，其中中樞GABAB受體與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)，包括抑郁、焦慮、藥物成癮、疼痛、癲癇等。巴氯芬作為GABAB受體的特異性激動劑，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且近年研究顯示其具有顯著的抗抑郁作用，GABAB受體抑制劑CGP55845也可產(chǎn)生抗抑郁作用。研究發(fā)現(xiàn):各種原因?qū)е碌哪X源性神經(jīng)生長因子(BDNF)

3、的減少易誘發(fā)抑郁，而大腦BDNF水平的升高可產(chǎn)生抗抑郁效果，這表明BDNF與抑郁形成密切相關(guān)。但是GABAB受體的表達變化是否通過影響B(tài)DNF的表達而參與抑郁的形成，目前尚不清楚。
　　本實驗通過腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)，結(jié)合強迫游泳實驗，制備糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠模型，模型制備成功后給予GABAB受體激動劑（巴氯芬）和拮抗劑(CGP55845)。通過觀察正常對照組（C組）、糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁模型(D1組)、巴氯芬組（D2

4、組）、CGP55845組(D3組)、CGP55845+巴氯芬組(D4組)的50％機械縮足閾值(PWT)，強迫游泳實驗不動時間(IMSFT)變化，采用免疫組織化學法和分子生物學方法比較各組大鼠海馬組織BDNF的表達變化，從而觀察GABAB受體對糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠海馬BDNF表達的影響，探討其在抗抑郁方面的作用及其機制。
　　方法:清潔級雄性SD大鼠30只，180～200g，3～4周，由河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供，隨機分為兩組

5、，正常對照組（C組）10只和糖尿病神經(jīng)痛模型組（D組）20只，分別腹腔注射生理鹽水或鏈脲佐霉素(STZ,60 mg/kg)。D組于腹腔注射后2周末測定空腹血糖濃度，空腹血糖濃度＞16.7mmol/L的大鼠為糖尿病模型制備成功，然后對糖尿病大鼠進行15min/次（1次/周）強迫游泳實驗以制備抑郁模型，其方法為:將大鼠單獨放入高40 cm、直徑20cm的圓柱形玻璃缸中，缸內(nèi)水深25 cm，水溫(25±2)℃，從大鼠入水后計時15min，為避

6、免相互影響，每只大鼠進行強迫游泳之前更換玻璃缸中的水。于腹腔注射后3周末利用Von Frey針測定大鼠機械縮足閾值，采用Dixon方法計算出50％縮足閾值(PawWithdraw Threshold，PWT)，PWT＜4g且空腹血糖濃度＞16.7mmol/L的大鼠為糖尿病神經(jīng)痛模型制備成功。C組和D組大鼠，通過強迫游泳實驗記錄其5min累計不動時間(immobility time of forced swimming test，IMFS

7、T:入水后計時5min，大鼠在水中停止掙扎，或顯示漂浮狀態(tài)，或僅做一些必要的輕微動作保持頭部浮在水面上的時間視為不動時間），每只大鼠進行強迫游泳之前更換玻璃缸中的水。與C組大鼠比較，D組大鼠IMFST顯著延長則預示DNP合并抑郁模型可能制備成功，為驗證模型制備成功，在行為學(PWT及IMFST)測定結(jié)束后，取C組和D組大鼠海馬組織，免疫組織化學法和分子生物學方法測定其BDNF的表達變化，將行為學與分子生物學變化相結(jié)合，確定模型大鼠制備的

8、行為學(PWT及IMFST)條件，為下一步成功制備DNP合并抑郁大鼠的實驗模型奠定基礎(chǔ)。
　　根據(jù)上一步實驗確定的糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠制備條件，成功制備模型大鼠80只（D組），正常對照組（C組）大鼠20只，均行鞘內(nèi)置管，觀察兩天未出現(xiàn)神經(jīng)癥狀(成功率100％)。根據(jù)鞘內(nèi)給藥(共20μl)不同將D組大鼠隨機分為四組(n=20): D1組:生理鹽水10μl+生理鹽水10μl; D2組:巴氯芬05μg十生理鹽水10μl; D3組:C

9、GP5584510μg十生理鹽水10μl; D4組:CGP5584510μg十巴氯芬0.5μg;而同周齡C組大鼠鞘內(nèi)給予生理鹽水10μl十生理鹽水10μl。五組大鼠2次鞘內(nèi)注藥間隔15min，連續(xù)4d，分別于第4d給藥完成后2h(T1)、給藥完成后2周（T2）測定PWT和IMFST，并在T1、T2時間點每組大鼠取10只海馬組織，采用免疫組織化學法和分子生物學方法測定BDNF表達變化。
　　結(jié)果:與C組相比，D組各時間點PWT明顯降

10、低(P＜0.05)，IMFST明顯延長(P＜0.05)，BDNF陽性細胞數(shù)減少(P＜0.05)，其mRNA及蛋白表達顯著下降(P＜0.05)。與D1組比較，D2、D3組大鼠各時間點IMFST明顯縮短(P＜0.05)、BDNF表達明顯增多(P＜0.05)，D2組大鼠各時間點PWT顯著升高(P＜0.05)，而D3組PWT無明顯變化(P＞0.05);D4組與D1組相比，各項指標無顯著變化(P＞0.05)。上述各組指標T1與T2時間點相比均無明