鱷膠原蛋白肽的制備及其功能的研究.pdf

1、鱷魚(yú)皮含有大量的膠原蛋白，通過(guò)現(xiàn)代酶學(xué)的生物技術(shù)適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ幚砗?，能獲得優(yōu)質(zhì)的膠原蛋白肽，同時(shí)獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
　　 本論文主要利用酶工程技術(shù)，以加工廢棄物鱷魚(yú)皮為原料，通過(guò)選擇合適的蛋白酶和控制酶解過(guò)程，研究開(kāi)發(fā)鱷魚(yú)皮膠原蛋白肽制品。綜合運(yùn)用酸法和堿法提取鱷魚(yú)皮中膠原蛋白，測(cè)定鱷魚(yú)皮中膠原蛋白氨基酸組成并進(jìn)行組織切片觀察。紫外波長(zhǎng)掃描膠原蛋白最大在220nm處有最大吸收值，紅外光譜掃描(FTIR)分析表明提取的膠

2、原蛋白保持了良好的螺旋結(jié)構(gòu)，SDS-PAGE顯示了鱷魚(yú)皮膠原蛋白包含β、α1和α2鏈。
　　 以鱷魚(yú)皮為原料，以抗氧化指標(biāo)DPPH清除率和總還原力為檢測(cè)方法，采用單因素試驗(yàn)優(yōu)化水解條件，得到制備抗氧化膠原肽的最佳水解條件:采用堿性蛋白酶作為水解用酶，在水解時(shí)間為3h，水解溫度為40℃，酶量為3％，pH11.0的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)。水解液經(jīng)Sephadex G-25分離得到CP1，抗氧化能力較原液有很大提高，對(duì)DPPH的半清除率為

3、0.25mg/mL，分子量范圍為1.2KD左右，濃度為5mg/mL時(shí)具有良好的體外保護(hù)DNA氧損傷作用，與0.3％的透明質(zhì)酸以及與CP1相同濃度的鯊魚(yú)皮膠原蛋白肽相比，體外保濕效果良好。在0-200μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒作用，對(duì)細(xì)胞內(nèi)黑色素含量有抑制作用。通過(guò)分別測(cè)定在體外和小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)CP1對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用以及CP1對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)ROS含量降低、GSH含量升高的變化，推測(cè)C

4、P1通過(guò)抑制活性氧產(chǎn)生和抑制酪氨酸酶活性來(lái)降低黑色素的含量。具有高保濕，抗氧化、降低黑色素含量的CP1在化妝品開(kāi)發(fā)方面有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值。
　　 以鱷魚(yú)皮為原料，以對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的抑制率為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)優(yōu)化水解條件，得到制備降壓膠原肽的最佳水解條件:采用復(fù)合蛋白酶作為水解用酶，在水解時(shí)間為4h，水解溫度為50℃，酶量為1％，pH7.4的條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，制備具有強(qiáng)抑制ACE活性的鱷魚(yú)皮膠原蛋白多肽水解物。水解