羊軟骨中膠原蛋白肽的提取及其抗氧化性研究.pdf

1、本課題研究?jī)?nèi)蒙古錫林郭勒草原蘇尼特羊軟骨中的膠原蛋白和膠原蛋白肽的分離、純化和提取以及膠原蛋白肽的分子量、氨基酸組成和抗氧化性。研究結(jié)果如下：
　　以羊軟骨為試驗(yàn)材料，經(jīng)脫脂、脫鈣、除雜蛋白等前處理過(guò)程后，采用乙酸-胃蛋白酶酶解的方法從羊軟骨中提取膠原蛋白,并進(jìn)一步分離純化。結(jié)果表明，最佳脫脂劑為氯仿：甲醇：水=1:2:0.8，其脫脂率為55.88%；最佳脫鈣試劑為0.5mol/LEDTA，其脫鈣率為29.16%。SDS-聚丙烯酰

2、胺凝膠電泳（SDS-PAGE）電泳結(jié)果顯示提取的膠原蛋白與sigma公司的II型標(biāo)準(zhǔn)品相一致。紫外光譜分析顯示提取膠原的最大吸收峰為230nm左右。采用羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定提取物中II型膠原蛋白含量為40.58%。
　　以提取的II型膠原蛋白為試驗(yàn)材料，研究三種不同蛋白酶對(duì)膠原蛋白肽提取率的影響；采用最佳蛋白酶水解，對(duì)酶解溫度、pH值、時(shí)間、酶添加量四個(gè)因素進(jìn)行分析；利用Design-Expert8.0.5.0軟件設(shè)計(jì)膠原蛋

3、白肽制備的響應(yīng)面試驗(yàn)方案，得到二次多項(xiàng)式回歸模型的最優(yōu)條件：溫度65℃，pH11.0，酶添加量1.13%，驗(yàn)證試驗(yàn)與預(yù)測(cè)值基本吻合。
　　采用SepHadex G-50層析的方法對(duì)提取物進(jìn)行分離純化。對(duì)提取的膠原蛋白多肽進(jìn)行氨基酸組成的分析。分析結(jié)果表明，提取物中膠原蛋白特有的甘氨酸和脯氨酸含量非常高，證實(shí)提取物為膠原多肽產(chǎn)物。對(duì)分離純化后出現(xiàn)的兩個(gè)蛋白峰進(jìn)行分子量測(cè)定。結(jié)果表明峰1的分子量范圍為887.4452-1705.884