上海地區(qū)奶牛四種病毒性疾病血清學(xué)調(diào)查和牛α、γ干擾素的原核表達(dá).pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)高速發(fā)展，飼養(yǎng)規(guī)?；⒓s化程度不斷提高，牛傳染性疾病的防控形勢(shì)也越來(lái)越嚴(yán)峻?？谔阋?FMD)、牛病毒性腹瀉(BVD)、牛傳染性鼻氣管炎(IBR)、牛輪狀病毒(BRV)、牛冠狀病毒(BCV)等病毒性疾病在我國(guó)規(guī)?；翀?chǎng)廣泛流行并造成重大損失，這些疾病已經(jīng)嚴(yán)重危害到我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。上海作為我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)源地，奶牛養(yǎng)殖全部實(shí)現(xiàn)規(guī)?；?，重視并實(shí)現(xiàn)特定疫病的監(jiān)測(cè)和防控。針對(duì)目前奶牛病毒性疾病的流行情況，我們迫

2、切需要研制出高效經(jīng)濟(jì)的抗病毒和免疫增強(qiáng)性藥物。干擾素(Interferon，IFN)是動(dòng)物細(xì)胞在受到誘生刺激后產(chǎn)生的一組具有抗病毒、參與免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性的細(xì)胞因子，分為三類，即Ⅰ、Ⅱ型和Ⅲ型干擾素。Ⅰ型干擾素具有強(qiáng)大的抗病毒活性，Ⅱ型干擾素可以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫增強(qiáng)疾病抵抗力。目前人干擾素和豬干擾素已經(jīng)實(shí)現(xiàn)商品化生產(chǎn)并廣泛運(yùn)用于臨床實(shí)踐，然而由于生產(chǎn)工藝和成本等問(wèn)題，牛干擾素的研制還停留在實(shí)驗(yàn)室階段，并未在臨床上使用。本試驗(yàn)對(duì)上海地區(qū)多

3、個(gè)規(guī)模化牧場(chǎng)進(jìn)行了奶牛常見(jiàn)病毒性疾病的血清學(xué)調(diào)查，為疫病防控提供數(shù)據(jù)支持;同時(shí)采用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)獲得具有抗病毒活性的牛α、γ干擾素，為牛干擾素在奶牛臨床上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　1上海地區(qū)規(guī)?；翀?chǎng)四種奶牛病毒性疾病血清學(xué)調(diào)查對(duì)上海地區(qū)多個(gè)規(guī)?；翀?chǎng)荷斯坦奶牛的牛病毒性腹瀉(BVD)、牛傳染性鼻氣管炎(IBR)、牛冠狀病毒(BCV)和牛輪狀病毒(BRV)的血清學(xué)感染情況進(jìn)行調(diào)查。使用ELISA檢測(cè)方法對(duì)19個(gè)規(guī)?；翀?chǎng)的BVDV血

4、清抗原、IBRV血清抗體;9個(gè)規(guī)模化牧場(chǎng)的BCV、BRV血清抗體進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)BVDV、IBRV血清樣品920份，檢測(cè)BCV、BRV血清樣品200份，并結(jié)合這些牧場(chǎng)的飼養(yǎng)管理、繁殖、疾病等資料數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。檢測(cè)結(jié)果表明BVDV抗原陽(yáng)性率平均為3.70％，IBRV、BCV、BRV抗體陽(yáng)性率分別為46.74％、97.00％、97.50％。
　　2牛α、γ干擾素的原核表達(dá)為在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)具有抗病毒活性的重組牛干擾素α和γ，

5、將經(jīng)密碼子優(yōu)化后的牛干擾素α、γ成熟蛋白基因合成后克隆至表達(dá)載體pColdⅡ中，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)，獲得可溶性牛干擾素α和γ蛋白。對(duì)誘導(dǎo)條件采用單因素比較優(yōu)化以獲得最佳誘導(dǎo)條件，結(jié)果顯示在IPTG濃度為0.64mmol/L，誘導(dǎo)溫度為15℃，誘導(dǎo)時(shí)間為9h的條件下，可溶性牛α干擾素的表達(dá)量最高;在IPTG濃度為0.32 mmol/L，誘導(dǎo)溫度為15℃，誘導(dǎo)時(shí)間為12h的條件下，可溶性牛γ干擾素