鵝干擾素基因的克隆及原核表達(dá).pdf

1、干擾素能干擾病毒的合成與復(fù)制，是機(jī)體抗病毒感染的第一道防御系統(tǒng)。干擾素在哺乳動(dòng)物中已進(jìn)行了深入的研究，禽類干擾素的研究也已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，尤其在雞和鴨干擾素的研究領(lǐng)域，但鵝干擾素的研究在國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。　　本實(shí)驗(yàn)參考GenBank發(fā)表的鴨α干擾素(DuIFN-α)及鴨γ干擾素(DuIFN-γ)全序列，應(yīng)用Oligo4.1及PrimerPremier5軟件在其完整的閱讀框架外設(shè)計(jì)上、下游引物及反轉(zhuǎn)錄引物，采用RT-PCR方法擴(kuò)

2、增得到一段大約600bp的IFN-αDNA片段；一段大約500bp的IFN-γDNA片段。將兩個(gè)片段分別克隆至pMD18-T載體，進(jìn)行序列測(cè)定和分析，結(jié)果表明：克隆的鵝α干擾素(GoIFN-α)基因開放閱讀框包括576bp，編碼蛋白為191個(gè)氨基酸，N末端的30個(gè)疏水性氨基酸是信號(hào)肽，成熟的多肽由161個(gè)氨基酸組成，同GenBank上公布的鴨α干擾素(DuIFN-α)基因在核苷酸水平上的同源性為96.70％，氨基酸序列的同源性為93.7

3、2％。鵝γ干擾素(GoIFN-γ)基因的開放閱讀框包括495bp，編碼含有164個(gè)氨基酸的多肽，其中N末端的19個(gè)氨基酸殘基可能為信號(hào)肽序列，成熟多肽為145個(gè)氨基酸。將克隆的GoIFN-γ的基因序列與GenBank上已公布的鴨γ干擾素(DuIFN-γ)基因序列相比較，核苷酸序列同源性為94.95％，氨基酸序列的同源性為93.29％。GoIFN-α與GoIFN-γ相比，核苷酸水平的同源性僅為31.26％，氨基酸水平的同源性為6.22％。