內(nèi)源性大麻素2-AG通過調(diào)控大麻素受體參與保留神經(jīng)損傷誘導的神經(jīng)病理痛.pdf

1、目的：通過選擇性阻斷大麻素受體CB1或CB2，觀察內(nèi)源性大麻素2-AG對保留神經(jīng)損傷誘導的神經(jīng)病理痛的抑制效應，以及是否能夠翻轉(zhuǎn)該抑制效應，從而明確具體哪個大麻素受體在2-AG發(fā)揮的鎮(zhèn)痛效應中起關(guān)鍵性作用。
　　方法：通過對大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷，構(gòu)建神經(jīng)病理痛動物模型----SNI模型(Spared nerve injury model。SNI model)，行為學實驗觀察：大鼠機械痛閾----50％爪縮閾值(50% Paw

2、withdrawal mechanical threshold,50%PWT)的改變情況；鞘內(nèi)單次注射內(nèi)源性大麻素2-AG，觀察其對大鼠機械痛敏的抑制效應；2-AG分別聯(lián)合應用大麻素受體1或大麻素受體2特異性阻斷劑(AM281或 AM630)，觀察這兩種受體阻斷劑對2-AG鎮(zhèn)痛效應的翻轉(zhuǎn)情況。通過細胞形態(tài)學實驗和蛋白印跡實驗，觀察上述干預措施后，大麻素受體亞型和星形膠質(zhì)細胞的共表達情況，以及星形膠質(zhì)細胞內(nèi)谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)的關(guān)鍵酶--

3、--谷氨酰胺合成酶(GS)的表達變化情況。
　　結(jié)果：行為學研究發(fā)現(xiàn)，大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷后(SNI模型)第四天，測定大鼠的50%PWT，發(fā)現(xiàn)其機械閾值顯著下降(1.57g)并出現(xiàn)明顯的機械痛敏；鞘內(nèi)給予2-AG后，明顯地抑制了大鼠的機械痛敏，大鼠的機械痛閾顯著上升(13.67g)，與SNI組比較具有統(tǒng)計學意義(F(1,71)=318.75,P<0.01)，同時觀察到2-AG的鎮(zhèn)痛效應可持續(xù)30min；CB1受體阻斷后，大鼠的

4、機械痛閾明顯下降，翻轉(zhuǎn)了2-AG對機械痛敏的抑制效應(F(1,71)=346.20,P<0.01)，持續(xù)觀察60min翻轉(zhuǎn)效應仍然存在；CB2受體阻斷后，僅在45~60min時翻轉(zhuǎn)了2-AG的抑制效應，與2-AG組相比差異統(tǒng)計學意義(F(1,71)=10.81,P=0.022<0.05)。細胞形態(tài)學研究結(jié)果顯示，在SNI模型組，腰段脊髓背角的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞均不同程度的被激活，其中星形膠質(zhì)細胞被激活的最為明顯，GFAP、

5、CB1受體的表達水平同空白對照組(Na?ve組)相比較表達明顯增強，并且GFAP和CB1受體共表達水平亦明顯上調(diào)(均P<0.05)；鞘內(nèi)注射2-AG后腰段脊髓背角的星形膠質(zhì)細胞的表達程度與SNI組比較受到一定的抑制，同時CB1受體的表達和GFAP/CB1受體的共表達水平也明顯下調(diào)(均P<0.05)；陽性細胞計數(shù)統(tǒng)計結(jié)果還顯示，CB1、CB2受體單獨阻斷組中，GFAP、CB1和GFAP/CB1陽性細胞數(shù)均顯著高于2-AG組(均P<0.05

6、)；CB2受體在各組織染色中均未出現(xiàn)明顯的陽性標記。蛋白印跡實驗發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)損傷(SNI組)后GS的蛋白表達水平與Naive組比較明顯提高(t=20.22,P<0.01)；2-AG組顯著抑制了SNI組GS的高表達(t=13.08,P<0.01)；CB1阻斷組GS蛋白的表達同2-AG組比較明顯上調(diào)(t=6.91,P<0.01)；CB2阻斷組GS蛋白的表達同2-AG組比較無明顯差異(t=2.81,P=0.186>0.05)。
　　結(jié)論：