內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在抑郁癥發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf

1、研究背景：內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)包括大麻素受體(CBreceptor)、內(nèi)源性大麻素(eCB)和與eCB合成、降解相關(guān)的酶類(lèi)。目前已被證實(shí)的內(nèi)源性大麻素主要有兩種：N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)和2-花生四烯酸甘油(2-AG)，它們均具有與天然大麻素四氫大麻酚(THC)極為相似的三維結(jié)構(gòu)。外源性和內(nèi)源性大麻素都是通過(guò)與大麻素受體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)作用。目前證實(shí)體內(nèi)存在兩種大麻素受體：CB1受體和CB2受體。大麻素受體是G蛋白耦聯(lián)受體，基因克隆

2、研究發(fā)現(xiàn)這兩種受體有44％的氨基酸序列同源。CB2受體主要分布于外周免疫細(xì)胞，如脾臟邊緣區(qū)、免疫細(xì)胞、扁桃體等，CB2功能主要與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。CB1受體主要分布于腦、脊髓和外周神經(jīng)系統(tǒng)中，腦內(nèi)CB1受體主要分布于基底神經(jīng)節(jié)(黑質(zhì)、蒼白球、外側(cè)紋狀體)、海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞層，小腦和大腦皮層。CB1受體的這種分布可能與大麻素對(duì)記憶、認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)控制的調(diào)節(jié)功能有關(guān)；此外，在延髓、中腦導(dǎo)水管周?chē)?、脊髓后角等疼痛傳?dǎo)徑路也有大量CB1受體分布。外

3、周神經(jīng)系統(tǒng)比中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)的CB1受體量少，它們分散地表達(dá)于諸如神經(jīng)末梢等處，介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。最近大量的研究數(shù)據(jù)提示，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的失調(diào)有可能是抑郁癥產(chǎn)生的原因。
　　 伏隔核也稱(chēng)伏核，是基底前腦的一個(gè)較大的核團(tuán)，位于基底核與邊緣系統(tǒng)交界處，隔區(qū)的外下方，尾殼核的內(nèi)下方，前方與嗅前核相連，后連接紋狀核。伏隔核于周邊核團(tuán)投射關(guān)系比較復(fù)雜，其纖維聯(lián)系與邊緣系統(tǒng)較為密切，主要接受前腦的傳入纖維，包括內(nèi)

4、側(cè)前額皮質(zhì)、杏仁核、海馬和下丘腦；也接受腦橋區(qū)的投射纖維，包括腹側(cè)被蓋區(qū)、背側(cè)中縫、腦橋網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)腹側(cè)為腹側(cè)蒼白球和嗅結(jié)節(jié)，是獎(jiǎng)賞環(huán)路中一個(gè)重要的組成部分。最近研究發(fā)現(xiàn)，伏核功能的異常可能與興趣缺失以及抑郁癥其他癥狀的產(chǎn)生相關(guān)。
　　 研究目的：應(yīng)用慢性非預(yù)期性應(yīng)激(CUS)的小鼠抑郁模型進(jìn)行研究，探討伏核區(qū)域內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號(hào)傳遞的改變是否是引起抑郁行為學(xué)改變的基礎(chǔ)。
　　 研究方法：
　　 (1)經(jīng)過(guò)6-8周

5、的慢性非預(yù)期性應(yīng)激(CUS)建立小鼠抑郁模型，同時(shí)觀察1周的次慢性非預(yù)期性應(yīng)激(sub-CUS)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響。
　　 (2)抑郁模型完成后，進(jìn)行與抑郁癥相關(guān)的動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，包括蔗糖水?dāng)z入實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、新環(huán)境抑制攝食實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。
　　 (3)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)完成后，處死動(dòng)物分離胸腺和腎上腺并稱(chēng)重，評(píng)估慢性非預(yù)期性應(yīng)激對(duì)免疫系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸功能的影響；取血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法進(jìn)行血清皮質(zhì)

6、酮含量測(cè)定；取腦并分離紋狀體，應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)腦組織內(nèi)AEA和2-AG含量進(jìn)行測(cè)定。
　　 (4)動(dòng)物處死后制備腦片(brain slice)，使用電生理設(shè)備記錄CB1受體介導(dǎo)的神經(jīng)突觸可塑性變化的電生理指標(biāo)，包括細(xì)胞內(nèi)記錄(DSE)，細(xì)胞外記錄長(zhǎng)時(shí)程抑制(LTD)和Ⅰ型代謝型谷氨酸受體(groupⅠ mGluR)激動(dòng)劑DHPG對(duì)場(chǎng)-興奮性突觸后電位(fEPSP)的抑制。
　　 (5)在腦片上應(yīng)用CB1受

7、體激動(dòng)劑WIN55，212-2，細(xì)胞外記錄CB1受體激動(dòng)劑對(duì)場(chǎng)-興奮性突觸后電位(fEPSP)的抑制作用，比較應(yīng)激組與非應(yīng)激組之間CB1受體功能是否發(fā)生改變。
　　 結(jié)果：
　　 (1)給予慢性非預(yù)期性應(yīng)激6周后，小鼠表現(xiàn)出抑郁樣行為學(xué)改變，包括攝入蔗糖水絕對(duì)量和相對(duì)量減少，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)性降低和中央停留時(shí)間縮短，新環(huán)境攝食潛伏期延長(zhǎng)，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)。而次慢性非預(yù)期性應(yīng)激(給予應(yīng)激1周)后的動(dòng)物沒(méi)有出現(xiàn)明顯的

8、行為學(xué)改變。
　　 (2)在腦片的伏核核心區(qū)(Nac core)記錄興奮性突觸后電流(EPSCs)，在單一使用去極化刺激條件下，無(wú)論是通過(guò)提高去極化程度(從-80mV到10或20mV)還是延長(zhǎng)去極化時(shí)間(1s，5s和10s)都無(wú)法成功誘導(dǎo)DSE。在細(xì)胞外液中加入Ⅰ型mGluR的激動(dòng)劑DHPG(5μM)后，從-80mV去極化到0mV持續(xù)5s可以成功誘導(dǎo)DSE。
　　 (3)使用以上方法在伏核核心區(qū)域誘導(dǎo)DSE，慢性非預(yù)期性

9、應(yīng)激與對(duì)照組相比誘導(dǎo)出DSE的幅度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而DSE的持續(xù)時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而次慢性非預(yù)期性應(yīng)激組誘導(dǎo)DSE無(wú)論在幅度還是持續(xù)時(shí)間上與對(duì)照組相比都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 (4)在伏核核心區(qū)域誘導(dǎo)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)介導(dǎo)的LTD，次慢性非預(yù)期性應(yīng)激組與對(duì)照組相比LTD幅度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而慢性非預(yù)期性應(yīng)激影響LTD的形成。
　　 (5)應(yīng)用抗抑郁藥氟西汀(Fluoxetine)治療對(duì)于慢性非預(yù)期性應(yīng)激造成的行為學(xué)異常

10、和內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號(hào)的傳遞受損都有改善作用。
　　 結(jié)論：研究結(jié)果表明，慢性非預(yù)期性應(yīng)激可以導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抑郁樣行為改變和伏核區(qū)域eCB/CB1受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受損，次慢性應(yīng)激則沒(méi)有以上作用；應(yīng)用抗抑郁藥物氟西汀可以逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激造成的改變。以上結(jié)果提示慢性非預(yù)期型應(yīng)激抑郁模型動(dòng)物伏核區(qū)域的內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能受損。
　　 意義：研究慢性應(yīng)激導(dǎo)致的內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)功能異?？梢约由钗覀儗?duì)抑郁癥發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，促進(jìn)抗