簡(jiǎn)介：第一部分酒精對(duì)肝炎病毒感染率影響的調(diào)查研究1目的研究飲酒對(duì)肝炎病毒感染率影響，進(jìn)一步探討飲酒量大小與肝炎病毒感染率的關(guān)系。2方法采用整群隨機(jī)抽樣方法，對(duì)山東省棗莊礦物局一部分健康查體人員進(jìn)行調(diào)查。我們選取2003年8月查體男性職工作為樣本，進(jìn)行抽樣研究。具體方法為采用發(fā)放問卷式，要求被調(diào)查人員嚴(yán)格地如實(shí)地填寫問卷內(nèi)容，然后回收問卷。調(diào)查同時(shí)，收集棗莊各大醫(yī)院市立醫(yī)院、市中醫(yī)院及礦物局三大醫(yī)院共五所醫(yī)院及齊魯醫(yī)院被收入院且確診為酒精性肝病ALD的患者，收集相關(guān)資料，然后進(jìn)入綜合比較。3設(shè)計(jì)根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)確定查體人數(shù)為1431例，將飲酒者按飲酒量的大小分成三組，即輕度飲酒組、中度飲酒及重度飲酒組。再調(diào)查三組中肝炎病毒感染人數(shù)為多少，計(jì)算其構(gòu)成比。同時(shí)將酒精性肝病中肝炎病毒感染者亦篩選出來，同樣進(jìn)行構(gòu)成比比較，觀察四組有無不同。采用SPSS建立數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入，進(jìn)入卡方檢驗(yàn)。4結(jié)果1431例查體人群與215例酒精性肝病患者在吸煙對(duì)肝炎病毒感染方面無明顯差異。四組中肝炎病毒感染陽性率有明顯不同，其中，輕度飲酒的第一組與中度飲酒的第二組的肝炎病毒感染陽性率比較上無明顯差異P005，但與酒精性肝病組肝炎病毒感染陽性率比較有差異P5結(jié)論飲酒可影響肝炎病毒的感染陽性率，不同飲酒量可導(dǎo)致不同的肝炎病毒感染陽性率；有肝臟損害的肝炎病毒感染陽性率較單純嗜酒者更高。

簡(jiǎn)介：目的1確定2005～2006年江蘇省人群中流感病毒優(yōu)勢(shì)株，并研究從2000～2006年江蘇省分離的人流感病毒相對(duì)國(guó)內(nèi)國(guó)際流行株的變異情況；2了解當(dāng)前江蘇省人群中H1N1亞型、H3N2亞型和B型流感病毒的抗體水平，描述其在人群中的分布特征，并找出影響流感病毒感染的危險(xiǎn)因素。方法1RTPCR擴(kuò)增2000～2006年江蘇省分離的部分代表毒株的HA1區(qū)基因，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定，與GENEBANK中的代表株進(jìn)行序列分析及進(jìn)化分析；22006年7～10月份，在江蘇省徐州、無錫兩地區(qū)分別采集自然人群血清517份、493份，通過微量半加敏血凝抑制實(shí)驗(yàn)HEMAGGLUTINATIONINHIBITIONTEST，HAI檢測(cè)其體內(nèi)流感病毒抗體；3用SAS81分析軟件包STM模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)抗體陽性率的單因素分析采用X檢驗(yàn)，對(duì)抗體幾何滴度GMT的檢驗(yàn)采用方差分析。HA1區(qū)基因序列分析等采用DNASTAR50軟件。結(jié)果12005～2006年流感流行季節(jié)，流感樣病例數(shù)占門診總病例數(shù)的355％，流感樣病例疫情波動(dòng)相對(duì)平穩(wěn)，未出現(xiàn)較為明顯的冬春峰；21458例疑似流感樣患者中共分離出288株流感病毒，其中H1N1亞型213株，H3N2亞型14株，B型19株，待鑒定42株；3HA1基因核苷酸及其推導(dǎo)的氨基酸序列及基因進(jìn)化分析表明，2000～2006年分離的H1N1亞型流感病毒為ANEWCALEDONIA2099H1N1類似株，H3N2亞型為ACALIFNIA72004H3N2類似株，B型流行優(yōu)勢(shì)株在2005年已從YAMAGATA樣流感病毒轉(zhuǎn)為VICTIA樣毒株；4江蘇省人群血清抗體H1N1亞型抗體總陽性率為6446％，保護(hù)率為1703％，幾何平均滴度GMT為13511，H3N2亞型抗體總陽性率為3614％，保護(hù)率為816％，幾何平均滴度GMT為1797，B型抗體總陽性率為5772％，保護(hù)率為2416％，幾何平均滴度GMT為12405；5江蘇省H1N1亞型、H3N2亞型和B型抗體水平均存在地區(qū)、年齡差異，徐州地區(qū)人群H1N1亞型、H3N2亞型抗體水平高于無錫，無錫B型抗體水平高于徐州地區(qū)，25歲以下年齡組抗體水平較高。結(jié)論1江蘇省2005～2006年H1N1亞型流感病毒成為優(yōu)勢(shì)株；2江蘇省近年來H1N1亞型、B型流感病毒的流行強(qiáng)度大，人群對(duì)H1N1亞型、B型流感病毒抗體水平較高，如果不發(fā)生大的變異，H1N1亞型、B型流感流行的可能性不大；對(duì)H3N2亞型流感病毒的抵抗力較低，應(yīng)警惕H3N2亞型流感病毒進(jìn)一步發(fā)生變異以引起流行甚至爆發(fā)的可能。

簡(jiǎn)介：目的采用對(duì)照、隨機(jī)研究，臨床觀察心肌康方案對(duì)病毒性心肌炎患者急性期心電圖、心肌損傷標(biāo)記物及動(dòng)態(tài)心電圖的影響，評(píng)價(jià)心肌康方案治療病毒性心肌炎急性期療效，從而為形成病毒性心肌炎急性期系統(tǒng)、規(guī)范的診療方案提供臨床依據(jù)。方法本研究收集自2009年3月至2012年3月河南中醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院、黑龍江省中醫(yī)研究院、上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院住院及門診病人共157例，全部病例均符合1998年全國(guó)心肌病心肌炎專題小組提出的成人急性病毒性心肌炎診斷參考標(biāo)準(zhǔn)。通過多中心隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。對(duì)照組76例，試驗(yàn)組81例。兩組病例均有不同程度的心悸、胸悶等癥狀。對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療，輔酶Q10片10MG、3次日口服，維生素C片02G、3次日口服，療程30天；試驗(yàn)組根據(jù)中醫(yī)辨證結(jié)果給予相應(yīng)的中醫(yī)心肌康方案治療，療程30天；同時(shí)給予兩組基礎(chǔ)治療措施包括充分休息、減少活動(dòng)、易消化飲食、多進(jìn)富含維生素及蛋白質(zhì)的食物，靜脈應(yīng)用極化液10氯化鉀15ML及胰島素8U加入到10葡萄糖500ML、肌苷400MG，每日一次，療程14天。觀察患者心電圖包括常規(guī)及動(dòng)態(tài)心電圖、心肌酶學(xué)變化。結(jié)果1兩組心電圖療效分析，治療前兩組心電圖出現(xiàn)ST段改變的患者，試驗(yàn)組41例，對(duì)照組32例，治療后試驗(yàn)組有效率為8250，對(duì)照組5938，兩組心電圖ST段療效比較，試驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組P2兩組動(dòng)態(tài)心電圖療效分析，治療前動(dòng)態(tài)心電圖正常率，試驗(yàn)組為910，對(duì)照組為959，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，治療后試驗(yàn)組為5972，對(duì)照組為5156，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，與治療前組內(nèi)比較，兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P3通過對(duì)早搏次數(shù)的觀察，結(jié)果治療前與治療后數(shù)值對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，顯示未能減少早搏次數(shù)，多數(shù)認(rèn)為與樣本量少有關(guān)。4心肌損傷標(biāo)記物療效分析，兩組治療前后心肌損傷標(biāo)記物肌鈣蛋白I和肌酸激酶同工酶CKMB比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，在病毒性心肌炎急性期，因心肌細(xì)胞的損害，生化檢查可有心肌損傷標(biāo)記物的升高，其心肌標(biāo)記物的升高一般持續(xù)714天左右可自行恢復(fù)，這可能與病毒性心肌炎疾病本身特點(diǎn)有關(guān)，由于該研究觀察病程較短30天，多數(shù)患者心肌酶已恢復(fù)正常。5兩組綜合療效總有效率，試驗(yàn)組痊愈15例，顯效30例，有效28例，無效6例，總有效率9241；對(duì)照組痊愈9例，顯效15例，有效32例，無效13例，總有效率8116，兩組綜合總有效率及等級(jí)療效比較，試驗(yàn)組綜合療效優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P結(jié)論1臨床研究顯示心肌康方案可明顯改善成人急性病毒性心肌炎心電圖和動(dòng)態(tài)心電圖病理改變。2對(duì)過早搏動(dòng)的研究，由于樣本量較小，各指標(biāo)與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3心肌康方案對(duì)成人急性病毒性心肌炎心肌損傷標(biāo)志物的干預(yù)，由于觀察時(shí)間性及疾病本身特點(diǎn)，兩組分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有待進(jìn)一步研究。4心肌康方案對(duì)成人急性病毒性心肌炎試驗(yàn)組綜合療效優(yōu)于對(duì)照組。

簡(jiǎn)介：人類乙型肝炎病毒HEPATICBVIRUSHBV是一種嗜肝非細(xì)胞毒性DNA病毒。根據(jù)外膜蛋白上氨基酸序列的不同HBV至少可分為四種血清亞型AYW、ADR、AYR和ADW在我國(guó)主要以ADR亞型為主。HBV感染嚴(yán)重威脅著人類的健康目前全世界大約有35億人感染HBV尤其在亞洲和非洲其感染率很高。在我國(guó)HBV的感染率約為10％現(xiàn)有大約3000萬慢性乙型肝炎患者。由于每個(gè)人的體質(zhì)不同所以人類乙型肝炎病毒導(dǎo)致的肝病嚴(yán)重程度也不一樣。有些人在感染乙肝后能在沒有明顯臨床病癥的情況下從血液中清除病毒或者在感染急性肝炎的情況下痊愈而不留下長(zhǎng)期的臨床后遺癥；而有些患者就不能清除病毒并發(fā)展為慢性感染大多數(shù)慢性感染患者處于無癥狀狀態(tài)而沒有生命危險(xiǎn)1030％患者發(fā)展為肝硬化并可能進(jìn)展為肝癌。由于缺乏比較理想的HBV感染模型嚴(yán)重制約了對(duì)HBV發(fā)病機(jī)制和抗病毒治療的深入研究。研究能夠表達(dá)HBV基因或復(fù)制整個(gè)病毒基因組的一些動(dòng)物模型比如與肝DNA病毒屬感染相關(guān)的動(dòng)物模型以及轉(zhuǎn)基因小鼠模型能夠使我們對(duì)HBV感染有更好的認(rèn)識(shí)。此外在活體外通過對(duì)人和黑猩猩抗原特異T細(xì)胞的直接量化來分析免疫現(xiàn)象的能力也能夠增加我們對(duì)于HBV發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)。HBV轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)研究乙肝的發(fā)病機(jī)制起了極大的推動(dòng)作用國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼建立了一些比較理想的乙肝轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)室自1992開始相繼研發(fā)了多種品系的乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠其中整合雙拷貝的全長(zhǎng)HBV基因組DNAADR亞型的乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠C57TGNHBVADR20SMMU“3號(hào)”品系具有類似慢性無癥狀HBV攜帶者CHRONICASYMPTOMATICHBVCARRIER的多種生物學(xué)特性。這一品系的主要特點(diǎn)有HBV基因在小鼠基因組中整合并穩(wěn)定遺傳；血清HBSAG、HBEAG陽性；抗HBS和抗HBE均陰性；肝組織中有HBSAG、HBCAG、X蛋白表達(dá)；血清中存在HBVDNA肝組織中存在病毒樣顆粒。但與以往研究結(jié)果不同部分轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織出現(xiàn)了輕重不等的病理學(xué)改變。本課題利用我們實(shí)驗(yàn)室建立并優(yōu)選的乙肝全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠C57TGNHBVDR20SMMU“3號(hào)”品系的F14F20代小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象從蛋白質(zhì)、病理學(xué)和免疫學(xué)角度綜合分析該品系轉(zhuǎn)基因小鼠的免疫病理學(xué)特性使其成為可應(yīng)用于乙型肝炎病毒相關(guān)研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。通過130例SPF級(jí)乙型肝炎轉(zhuǎn)基因小鼠和10只同齡正常C57BL6小鼠肝組織進(jìn)行HBSAG表達(dá)、HE染色和浸銀染色分析光鏡觀察并按病理改變嚴(yán)重程度、月齡等分組分析肝臟病變、月齡、性別、HBSAG表達(dá)等因素之間的關(guān)系。結(jié)果顯示與對(duì)照小鼠相比轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織出現(xiàn)了類似人慢性乙型肝炎攜帶者的病理改變6077％79130的乙肝小鼠出現(xiàn)比較明顯的肝細(xì)胞變性壞死、單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維增生。不同月齡組的轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)各不相同且與月齡正相關(guān)。而肝組織的病理改變與性別、病毒蛋白的表達(dá)并無相關(guān)性。這些結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生了與人類慢性HBV無癥狀攜帶者相似的肝組織病理性損傷總體為輕度慢性肝炎。選取出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)的肝組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肝組織中浸潤(rùn)的單個(gè)核細(xì)胞大多為CD3、CD4T細(xì)胞。通過本課題的研究提示我們我們實(shí)驗(yàn)室建立的C57TGNHBVDR20SMMU“3號(hào)”品系乙肝全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟產(chǎn)生類似慢性無癥狀HBV攜帶者的病理學(xué)變化病理改變與病毒蛋白表達(dá)無相關(guān)性與小鼠月齡呈正相關(guān)性。CD3、CD4T細(xì)胞參與了肝臟損傷的過程。本研究證實(shí)該品系轉(zhuǎn)基因小鼠可作為人類慢性無癥狀HBV攜帶者的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型用來探討人類的發(fā)病機(jī)制及其防治研究。

簡(jiǎn)介：腎綜合征出血熱（HFRS）是一種由漢坦病毒引起的急性傳染病，臨床上以發(fā)熱、出血和急性腎功能損害為主要特征。我國(guó)是HFRS危害最嚴(yán)重的國(guó)家，年發(fā)病人數(shù)為5～10萬人，其流行范圍廣、發(fā)病人數(shù)多、病死率較高。臨床上尚缺乏特異有效的治療方法。國(guó)內(nèi)外近年來雖已研制出HFRS的滅活疫苗，但從部分人群試用的情況來看，該類疫苗還存在明顯不足，尤其是不能有效地刺激細(xì)胞免疫應(yīng)答。因此仍需針對(duì)滅活疫苗存在的不足，進(jìn)一步研究更為有效的HFRS新型疫苗。漢坦病毒是一種有囊膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，基因組分為L(zhǎng)、M、S三個(gè)節(jié)段，分別編碼病毒的RNA依賴的RNA聚合酶、包膜糖蛋白（G1和G2）以及核衣殼蛋白（NP）。以往研究表明，漢坦病毒的M基因編碼的包膜糖蛋白（GP）可刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，而對(duì)感染動(dòng)物和人體起到保護(hù)作用；但GP免疫原性較弱，刺激產(chǎn)生的抗體出現(xiàn)晚，滴度不高。NP是該病毒結(jié)構(gòu)蛋白中免疫原性最強(qiáng)的，其刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體出現(xiàn)早、滴度高、維持時(shí)間長(zhǎng)，并且還有誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用。由于漢坦病毒中和抗原表位主要存在于病毒GP上，目前HFRS基因工程疫苗的基礎(chǔ)研究主要集中于GP。該方面的研究雖已取得較大進(jìn)展，但由于GP相對(duì)較弱的免疫原性，故免疫效果仍不理想。國(guó)內(nèi)外研究表明，漢坦病毒GP和NP在誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答中可能均起重要作用，因此，如何發(fā)揮其不同結(jié)構(gòu)蛋白在誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答中的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)作用，是HFRS基因工程疫苗研究中亟待解決的問題。本室前期曾將漢灘病毒（HTNV）76118株的M基因分別與編碼NP氨基端AA1～247的S基因片段（S07，編碼NP主要抗原區(qū)段）拼接，利用桿狀病毒和腺病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行融合表達(dá)以及表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)分析。結(jié)果證實(shí)HTNV76118株G1S07和G2S07嵌合基因均能刺激機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。然而在研究中我們也發(fā)現(xiàn)了一些問題，如盡管免疫小鼠后各表達(dá)系統(tǒng)均能刺激機(jī)體產(chǎn)生體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答，且腺病毒表達(dá)系統(tǒng)的效果要優(yōu)于其他系統(tǒng)，但是整體的免疫水平還不十分理想，特別是刺激機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的水平不高。國(guó)內(nèi)外已證實(shí)漢坦病毒感染后以CTL為主的T細(xì)胞應(yīng)答對(duì)于機(jī)體保護(hù)有重要作用，因此利用漢坦病毒CTL表位結(jié)合結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)建疫苗可能是一種可行的方案。本研究在前期工作基礎(chǔ)上，利用基因重組技術(shù)，構(gòu)建了含有HTNVM基因（編碼糖蛋白G1、G2）和部分S基因（編碼NP主要抗原區(qū)段）以及S基因的多個(gè)CTL表位的多種重組腺病毒，在對(duì)這些重組腺病毒進(jìn)行系統(tǒng)鑒定的基礎(chǔ)上，觀察了其刺激小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。1、將HTNVG1S07和G2S07嵌合基因片段分別與合成的CTL表位串聯(lián)基因CTL1（表位間加間隔序列AAY）及CTL2（表位間不加間隔序列AAY）以不同組合方式克隆到腺病毒轉(zhuǎn)移載體PSHUTTLE中，CTL表位拼接于S073’端，通過酶切鑒定選取陽性克隆，分別命名為PG1S07CTL1、PG1S07CTL2、PG2S07CTL1、PG1S07CTL2。2、通過特異性的ICEUI和PISCEI酶切后將重組轉(zhuǎn)移載體與ADENOX載體病毒DNA相連，電轉(zhuǎn)化ECOLIJM109，并用PCR方法進(jìn)行了篩選和鑒定，獲得重組腺病毒的DNA，轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞得到重組腺病毒原種，分別命名為AG1S07CTL1、AG1S07CTL2、AG2S07CTL1、AG1S07CTL2。3、將各重組腺病毒經(jīng)CSCL密度梯度離心純化及測(cè)定滴度后分別感染HEK293和VEROE6細(xì)胞。IFA和ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，各重組腺病毒均可在細(xì)胞中表達(dá)相應(yīng)HTNV抗原，表明CTL表位的插入并沒有影響相應(yīng)抗原的表達(dá)及其與特異性單克隆抗體（MAB）的結(jié)合活性。WESTERNBLOT分析結(jié)果顯示，各重組腺病毒組在HEK293細(xì)胞中均可表達(dá)能與特異性MAB產(chǎn)生反應(yīng)、相對(duì)分子質(zhì)量（MR）分別約為97KDA和80KDA的融合蛋白，與預(yù)期融合蛋白大小相符，表明重組腺病毒在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的為完整的融合蛋白。4、以各重組腺病毒分別經(jīng)腹腔注射免疫BALBC小鼠，通過IFA、ELISA、微量細(xì)胞中和試驗(yàn)、T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、CTL殺傷試驗(yàn)、細(xì)胞因子檢測(cè)等方法觀察免疫效果。結(jié)果表明，各重組腺病毒免疫小鼠均可刺激機(jī)體產(chǎn)生低滴度的抗NP（1160∶～1320∶）和抗GP抗體（1∶20～1∶40），同時(shí)也可產(chǎn)生效價(jià)約1∶5～1∶40的低滴度中和抗體。各重組腺病毒均可誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)特異的細(xì)胞免疫應(yīng)答，其中AG2S07CTL1免疫組小鼠脾細(xì)胞對(duì)NP及GP的增殖指數(shù)明顯高于對(duì)照組；AG1S07CTL2、AG2S07CTL1、AG2S07CTL2組增殖指數(shù)也都略高于AG1S07和AG2S07組，表明加有CTL多表位的重組腺病毒能更有效地刺激小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答。CTL殺傷試驗(yàn)的結(jié)果表明，各重組腺病毒免疫組在不同的效靶比條件下均可誘導(dǎo)針對(duì)靶細(xì)胞的特異性殺傷效應(yīng)，并隨著效靶比的提高，殺傷效應(yīng)也相應(yīng)提高；其中含有CTL多表位的四種重組腺病毒免疫所誘導(dǎo)的CTL殺傷效應(yīng)明顯高于不含CTL表位的兩種重組腺病毒。對(duì)在CTL多表位間加入或不加入間隔序列AAY的各重組腺病毒的比較來看，在CTL多表位間加入間隔序列AAY的重組腺病毒免疫小鼠能產(chǎn)生更高的細(xì)胞免疫應(yīng)答，表明間隔序列AAY對(duì)于各CTL表位的分隔能提高重組腺病毒的免疫效果。對(duì)各重組腺病毒免疫小鼠血清中細(xì)胞因子檢測(cè)的結(jié)果顯示，各重組腺病毒均可刺激TH1類細(xì)胞因子（INFΓ、IL2、IL12）水平的提高，而TH2類細(xì)胞因子水平變化不明顯。說明重組腺病毒免疫小鼠后可以刺激機(jī)體TH1類細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)應(yīng)答，從而有助于提高小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答能力。

簡(jiǎn)介：福建醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)BCRABL基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562細(xì)胞生物學(xué)特性與姜黃素抗腫瘤作用影響及其相關(guān)機(jī)制研究姓名吳枝娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)藥理學(xué)（腫瘤藥理）指導(dǎo)教師許建華20090401、BER／ABL基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562細(xì)胞生物學(xué)特性及榴關(guān)基因液達(dá)的影響B(tài)ER／ABT墓囂怒專翁爿＆發(fā)生、發(fā)震、轉(zhuǎn)髑整窩褥關(guān)煞瘓基篷。BCR／ABL基霞長(zhǎng)囊拜缺席“，可能導(dǎo)致K562細(xì)胞各種生物學(xué)特讎及相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的變能。本部分，我們羹BCR／AB|基囂長(zhǎng)鬻漂默辯B／AK562鬈熬勢(shì)模型，與委鬻黯照蕤K562燕魏及空冀囂對(duì)照的EGFPK562細(xì)胞進(jìn)行比較，分析冀主要生物學(xué)特性及信號(hào)分予的變化。磷究方法；1≥鬟交簦染慧注襝溺熬魏壤墓篷辦變霓；2集薄綹爨法黧察ILNAI對(duì)集落形成能力的影響；3聯(lián)苯胺染色觀察細(xì)胞分化；4流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周麓變純；耋≥ELISA裝撿測(cè)蠹囊C酸激簿活縫；≤≤≥AOEB、HEOCHST33342染毽麓察纓胞凋亡7比悒法檢測(cè)CASPASE。3、CASPASE9活性；8WESTERNBLOTTING法觀察RNAI黠囊麓增疆灞亡檁關(guān)臻母勢(shì)子瓣影璃。絡(luò)果顯示；1BCR／ABLRNAI顯著抑制K562綱胞增殖，細(xì)胞倍增時(shí)間明恩延長(zhǎng)；2≥BCR／ABLRNAI攆裁絮臆集薄形成，纂落澎袋簿镅拳遮籍越鞴；3BER／ABT輪漱I誘導(dǎo)K562細(xì)胞廊成熟紅添分化，聯(lián)苯胺染色陽性辮達(dá)2483％；4BCR／ABL烈越使纘麓藺裁避滯在S鬻，密現(xiàn)灝亡的受二贊體蜂；≤5BCR／ABL裝鬻轟I愛懿氮酸激黧活性降低約4188％；6BCR／ABLRNAI誘鐐K562細(xì)胞凋亡，自發(fā)凋亡率達(dá)忿667％；≯≥BCR／ABTRNAI簸發(fā)線粒律CYTC釋艘，CASPASE。3及CASPASE。9活襤提嵩，敝線糙體途襁誘導(dǎo)綱胞凋亡；8BCR／ABLRNAI下調(diào)K562細(xì)胞SRC、PSRC、RAF1、PERKU2、PSTARL、PSTAR5、P_P38、CMYC、BCL2幫HSP90含量，上調(diào)羚3、PKC及BAX禽爨，對(duì)ERKV2、PAKT、NF憋、HSP70影螭不太。墨、慢瘸棗舟導(dǎo)BERLABL基因長(zhǎng)期沉默對(duì)K562纓腱裰鬣成癀的影嗡及棚關(guān)枧制研究幔瘸毒介譬戇RNA干擾，在律外能奧現(xiàn)BCR／ABL基巡熊長(zhǎng)期沉默，抑制K562細(xì)胞增楚，誘導(dǎo)箕向成熟氯系緇魔分化，蓰避細(xì)脆褥亡。本幫分我們關(guān)注的是B／AK562纓照在襟鼠體內(nèi)然孬繼續(xù)保持黠BCR／ABL基因靛RNA干擾以殿成癌麓力彝捆美信號(hào)分子懿燮純。研巍方法；1皮下注射K562、EGFPK562、B／AK562纓悠，建立裸鼴凳耪移植瘸模型；2觀察戚瘤情況，比較瓣瘤體積；3稱爨離體瘩塊質(zhì)量、計(jì)算摔癀率；瓣瘸組綴冰練甥片觀察熒光；7

簡(jiǎn)介：目的分析乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV前S缺失突變?cè)诼砸倚透窝纵p中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的檢出率分析前S1缺失突變病毒株體外復(fù)制力、HBSAG分泌、RNA水平、前S1抗原表達(dá)及其對(duì)表面抗原啟動(dòng)子Ⅱ（SURFACEANTIGENPROMOTERⅡ，SPⅡ）轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法研究對(duì)象為119例于2005年8月2008年5月在解放軍第三○二醫(yī)院診療的住院患者，包括38例慢性乙型肝炎（以下簡(jiǎn)稱慢乙肝）輕中度、40例慢乙肝重度和41例慢加急性肝衰竭患者。從患者血清中提取HBVDNA，PCR擴(kuò)增獲得HBV全長(zhǎng)基因組序列，統(tǒng)計(jì)前S缺失突變的發(fā)生率。挑選有代表性的前S1缺失突變株及其相應(yīng)對(duì)照的野生型HBV全長(zhǎng)序列克隆至PGEMTEASY載體中。用BSPQⅠSCAⅠ雙酶切10倍HBV基因組，72小時(shí)后檢測(cè)體外病毒復(fù)制力及HBSAG表達(dá)水平，同樣的方法轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，72小時(shí)后提取HBVRNA，用相對(duì)熒光定量法檢測(cè)RNA水平。構(gòu)建11倍PTRIEXHBVC表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，72小時(shí)后，酶聯(lián)免疫法測(cè)前S1抗原的表達(dá)。用PCR分別擴(kuò)增含有前S1缺失突變型和野生型的HBVSPⅡ啟動(dòng)子片段，構(gòu)建PGL3SPⅡ雙熒光素酶真核報(bào)告表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時(shí)后檢測(cè)相對(duì)熒光素酶活性，分析前S1區(qū)缺失突變對(duì)重疊的SPⅡ啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶活性表達(dá)的影響。結(jié)果①HBV基因組前S缺失突變檢出率在慢乙肝輕中度、慢乙肝重度和慢加急性肝衰竭三組中逐漸遞增，分別為53％、125％和244％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。②與未缺失野生株相比，前S1缺失突變病毒株的體外復(fù)制力和分泌的HBSAG水平分別降低了69％和237％前S1缺失株的35KB前基因組RNA、24KBMRNA和21KBMRNA水平分別降低了8767％、9140％和8594％。③與未缺失野生株相比，前S1區(qū)缺失導(dǎo)致前S1抗原表達(dá)消失。④與未缺失野生型相比，前S1缺失突變使重疊的SPⅡ啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性降低了36％。結(jié)論HBV前S缺失突變發(fā)生率隨乙肝病程進(jìn)展而逐漸升高，前S1缺失突變株病毒的體外復(fù)制力水平、HBSAG的分泌及RNA水平均不同程度降低，并導(dǎo)致前S1抗原表達(dá)消失同時(shí)前S1缺失突變導(dǎo)致重疊的SPⅡ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性降低。結(jié)果有助于闡明HBV前S1區(qū)缺失突變的臨床和病毒生物學(xué)意義。

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文人類乳頭瘤病毒早期蛋白E5和E7病機(jī)制和免疫學(xué)特性研究姓名程浩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹200061浙江大學(xué)博上學(xué)位論文解D53腫瘤抑制蛋白HPVL6的E6能激活端粒酶并因而延遲衰老細(xì)胞的死亡，且一旦細(xì)胞被轉(zhuǎn)化即能增加腫瘤形成的潛在危險(xiǎn)性；E7蛋白可與PRB、P107和P130結(jié)合和相互作用而誘導(dǎo)其不穩(wěn)定性；HPVL6E7蛋白與E6協(xié)同作用使原代的人角質(zhì)形成細(xì)胞永生化等。因此認(rèn)為由高危型HPV引起的角質(zhì)形成細(xì)胞永生化需要E6和E7的參與，并且E6和E7在誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程中起關(guān)鍵作用。牛乳頭瘤病毒BPVI的E5蛋白是病毒主要轉(zhuǎn)化蛋白。HPVS的E5二聚體可引發(fā)感染細(xì)胞一系列細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的改變、轉(zhuǎn)化人纖維母細(xì)胞、增強(qiáng)E7介導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化、以及影響細(xì)胞間接蛋白CONNEXINN43以參與腫瘤細(xì)胞逃避宿主的監(jiān)視和轉(zhuǎn)移等。在病毒免疫學(xué)中，以中和抗體為特征的體液免疫主要作用是預(yù)防新的HPV感染，對(duì)己存在的感染和由病毒感染誘發(fā)的腫瘤清除必須依賴以細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)CTL為特征的細(xì)胞免疫。體液免疫和細(xì)胞免疫在體內(nèi)由不同的主要組織相容復(fù)合體MHC調(diào)控。其中體液免疫由MHCII類分子調(diào)控，細(xì)胞免疫由I類分子調(diào)控。曾經(jīng)認(rèn)為外源性抗原只能通過MHCII抗原量遞通路傳遞。然而近來證實(shí)，外源性抗原在特定條件F可通過非經(jīng)典MHCI途徑被呈遞并有效激活細(xì)胞免疫如CTL反麻。HPVS作為外源性抗原能否通過某種非經(jīng)典的MHCI途徑被暈遞并有效激活細(xì)胞免疫如CTL反應(yīng)的研究已成為研究熱點(diǎn)。研究表明，病毒早期蛋白E7可以引發(fā)CTL為特征的細(xì)胞免疫，但事實(shí)上天然感染常無病毒學(xué)癥期，且還常常導(dǎo)致機(jī)體的免疫耐受而使感染遷延難愈。HPVS主要?dú)さ鞍譒1能在體外真核生物表達(dá)系統(tǒng)中形成無DNA的病毒樣顆粒VLPS。L1蛋白的羧基端部分序列可以被外源性蛋白取代而不影響其在體外真核細(xì)胞中的表達(dá)和形成VLPS的能力使L1可以作為載體攜帶某些基因片斷并一起表達(dá)形成和重組或嵌合性VLPS。VLPS另～重要特性是，其結(jié)構(gòu)和抗原性與真病毒顆粒十分相似。因此相信VLPS可能是理想的候選6

簡(jiǎn)介：腮腺炎病毒MUV同其他囊膜病毒相似在融合蛋白F中具有兩個(gè)七肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域HR有關(guān)其他囊膜病毒F蛋白的研究表明HR區(qū)在F蛋白介導(dǎo)的病毒侵染中起著至關(guān)重要的作用在結(jié)合蛋白或結(jié)合亞基的協(xié)助作用下兩段HR結(jié)構(gòu)域的構(gòu)像發(fā)生變化形成熱穩(wěn)定的富含Α螺旋的發(fā)夾異源三聚體結(jié)構(gòu)并由此得到一個(gè)共同的融合機(jī)制但目前并不清楚MUV是否有類似于其他囊膜病毒的侵染機(jī)制該研究構(gòu)建了HR區(qū)HR1、HR2和2HELIX的重組載體并在大腸桿菌中以融合蛋白的形式表達(dá)了HR1、HR2和2HE1IXGST融合的HR1、HR2和2HELIX單體蛋白都以可溶形式表達(dá)利用親和層析及凝膠過濾層析純化獲得了高純度的目的蛋白經(jīng)PULLDOWN實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)HR1和HR2之間存在相互作用HR1和HR2的混合物在凝膠過濾層析中以聚體形式存在HR1HR2和2HELIX的化學(xué)交聯(lián)實(shí)驗(yàn)表明等摩爾的HR1和HR2可形成異源三聚體其中2HELIX蛋白隨著交聯(lián)劑濃度的增加呈現(xiàn)明顯的單體和聚體的濃度梯度HR1HR2蛋白由于濃度較低雖未見清晰的單體和聚體的濃度梯度但仍可看到明顯的異源三聚體凝膠過濾層析也證實(shí)了這一結(jié)果兩者在同一位置出峰且在分子量為52KDA和144KDA的出峰位置之間顯示其以聚體形式存在質(zhì)譜分析結(jié)果顯示2HELIX蛋白分子量為117KDAHR1為71KDAHR2為47KDA2HELIX和HR1HR2三體分子量分別為351KDA和354KDA與凝膠過濾層析結(jié)果相對(duì)應(yīng)圓二色譜分析結(jié)果表明單獨(dú)的HR1以Α螺旋結(jié)構(gòu)存在而HR2則以無規(guī)卷曲存在當(dāng)兩者等摩爾混合后Α螺旋含量明顯增加2HELIX同樣具有典型的Α螺旋結(jié)構(gòu)2HELIX和HR1HR2三體相當(dāng)穩(wěn)定TM達(dá)到76℃而且這種結(jié)合是特異的高溫變性后的蛋白經(jīng)低溫長(zhǎng)時(shí)間放置后能夠大部分復(fù)性仍然呈現(xiàn)較高含量的Α螺旋結(jié)構(gòu)用晶體生長(zhǎng)條件篩選試劑盒CRYSTALSCREENⅠⅡHAMPTONRESEARCHRIVERSIDECAUSA對(duì)2HELIX蛋白晶體的生長(zhǎng)條件進(jìn)行初選經(jīng)過優(yōu)化最后在15PEG8000、10MLISO緩沖液長(zhǎng)出可以進(jìn)行衍射的晶體通過應(yīng)用程序AME以SV5F蛋白N1C1三聚體晶體結(jié)構(gòu)PDBCODE1SVF為模型利用分子置換的方法對(duì)2HELIX的晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析得到了與SV5、RSV和NDV核心結(jié)構(gòu)相似的六螺旋束顯示MUV可能具有與上述蛋白相似的融合侵染機(jī)制

簡(jiǎn)介：樹突狀細(xì)胞DENDRITICCELLSDCS是體內(nèi)最重要的抗原提呈細(xì)胞能夠啟動(dòng)初始T細(xì)胞活化、增殖、分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)在免疫系統(tǒng)中居于獨(dú)特的地位。成熟DCS能夠激發(fā)免疫應(yīng)答而不成熟DCS則涉及免疫耐受的誘導(dǎo)。利用DC的免疫調(diào)節(jié)作用誘導(dǎo)免疫耐受是當(dāng)前移植領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。研究表明髓系未成熟DC亞群IMMATUREDCSUBSETIMDC或靜息DCRESTINGDC由于表面黏附輔佐分子如B7、ICAM1、CD40等缺乏因此具有免疫耐受性可以誘導(dǎo)T細(xì)胞失能ANERGY、低反應(yīng)性及向TH2細(xì)胞極化并誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞REGULATYTCELLSTREG產(chǎn)生未成熟DC的這些效應(yīng)對(duì)器官移植時(shí)免疫穩(wěn)定態(tài)的維持具有重要的作用。因此研究調(diào)節(jié)DCS發(fā)育成熟的因素及其機(jī)制對(duì)于闡明自身免疫病、移植排斥反應(yīng)、抗腫瘤免疫等的機(jī)制和探索防治措施有著重要的意義。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制分子SUPRESSSOFCYTOKINESIGNALINGSOCS是1997年STARR、ENDO和NAKA所在的三個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)小組用不同的方法相繼發(fā)現(xiàn)的一類與細(xì)胞因子JAKSTAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。SOCS能抑制ILS、IFNΓ、GH等多種細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不僅對(duì)JAKSTAT信號(hào)途徑有負(fù)性調(diào)控作用而且還參與其它信號(hào)途徑的調(diào)節(jié)其功能涉及機(jī)體正常組織的分化和器官的發(fā)育因此為學(xué)術(shù)界廣泛關(guān)注。SOCS通過選擇性抑制IL12STAT4或IL4STAT6途徑的信號(hào)傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)對(duì)TH細(xì)胞的分化調(diào)控其平衡紊亂導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。SOCS1為該家族中含SH2結(jié)構(gòu)域的SOCS成員之一又稱JABJAKBINDINGPROTEIN或SSI1STATINDUCEDSTATINHIBIT1。正常生理?xiàng)l件下SOCS1蛋白分子表達(dá)量很少；在細(xì)胞受到某些細(xì)胞因子刺激時(shí)其表達(dá)量可迅速明顯地增加。研究表明當(dāng)機(jī)體受到刺激以后SOCS1的MRNA在胸腺細(xì)胞內(nèi)的豐度顯著增加；在肺、脾和睪丸等器官中等增加。在體外SOCS1可以抑制多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑在細(xì)胞中超表達(dá)時(shí)可以抑制IFNS、IL2、IL3、IL4、IL6、IL12、TNFΑ、LIF、OSM抑瘤素M等細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。SOCS1通過抑制由ILS、IFN以及LIF等所誘導(dǎo)的STAT活性以及TEC激酶和受體酪氨酸激酶RECEPTTYROSINEKINASERTK的活性調(diào)控細(xì)胞的分化與功能?？紤]到DC在抗原遞呈和免疫激活與耐受過程中的特殊作用尤其是體內(nèi)IMDC亞群的產(chǎn)生與細(xì)胞因子信號(hào)調(diào)控密切相關(guān)針對(duì)SOCS1負(fù)性調(diào)節(jié)IFNΓ、ILS等細(xì)胞因子信號(hào)的傳導(dǎo)可能對(duì)IMDC亞群產(chǎn)生具有重要的作用我們擬研究在DC分化、發(fā)育和抗原遞呈過程中SOCS1的表達(dá)及對(duì)其影響的因素探討SOCS1高表達(dá)對(duì)DC成熟、生物學(xué)特性和功能的影響LPS等炎癥因子刺激在其中的作用以及誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受的效果。目前對(duì)于SOCS1和DC之間相互關(guān)系的研究主要集中在干擾SOCS1表達(dá)方面而對(duì)于高表達(dá)SOCS1對(duì)DC的影響則鮮有報(bào)道。近期研究顯示用RNA干擾技術(shù)沉默DC的SOCS1基因表達(dá)能促使DC成熟而增強(qiáng)其免疫原性。且SAKURAI49等研究發(fā)現(xiàn)在巨噬細(xì)胞中高表達(dá)SOCS1能夠明顯抑制腺病毒本身所誘導(dǎo)的初始免疫反應(yīng)。因此在理論上用細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)上調(diào)DC的SOCS1基因表達(dá)能抑制DC成熟而增強(qiáng)其耐受原性。鑒于此我們構(gòu)建了高表達(dá)SOCS1的腺病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來源的DCBMDC檢測(cè)BMDCS的表型、吞噬能力、細(xì)胞因子分泌以及刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力以及對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路的影響以驗(yàn)證SOCS1的高表達(dá)是否能夠抑制DC成熟并增強(qiáng)其耐受原性。第一部分SOCS1腺病毒載體的構(gòu)建及其修飾的小鼠BMDC的制備腺病毒載體因其具有基因組結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、宿主細(xì)胞范圍廣、滴度高、感染效率高、無插入突變危險(xiǎn)等優(yōu)勢(shì)因此我們選擇了ADEASYTMADENOVIRALVECTSYSTEM體系構(gòu)建SOCS1載體。首先取經(jīng)過LPS刺激4小時(shí)后的小鼠脾臟抽提其MRNA然后根據(jù)報(bào)道及GENEBANK發(fā)布的基因和蛋白序列設(shè)計(jì)帶酶切位點(diǎn)的特異性引物RNA逆轉(zhuǎn)錄PCRRTPCR擴(kuò)增獲得小鼠SOCS1全長(zhǎng)基因序列雙酶切后連接到ADEASYTMADENOVIRALVECTSYSTEM體系中的PSHUTTLECMV中然后與PADEASY1同源重組在293A細(xì)胞中包裝出帶有SOCS1目的基因的腺病毒PADESYSOCS1。通過PCR、酶切、測(cè)序鑒定及WESTERNBLOT檢測(cè)結(jié)果顯示攜帶小鼠SOCS1基因的腺病毒載體可高表達(dá)SOCS1蛋白說明帶有目的基因SOCS1的腺病毒構(gòu)建成功。經(jīng)過病毒的擴(kuò)增及滴度檢測(cè)我們構(gòu)建的小鼠PADEASYSOCS1腺病毒獲得了較高的滴度。采用GMCSF和IL4共同刺激小鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)小鼠BMDC。此法培養(yǎng)的DC在57天時(shí)大部分為未成熟DC小集落經(jīng)LPS、CPG或POLYIC刺激2436小時(shí)后DC表面可伸出大量很長(zhǎng)的突起；經(jīng)過流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMDC的純度可以達(dá)到80％以上符合實(shí)驗(yàn)的要求。實(shí)驗(yàn)分為三組第一組正常BMDC組DCONLY第二組空病毒PADEASYTMVNG轉(zhuǎn)染小鼠BMDC形成空病毒對(duì)照組DCPADEASYVNG第三組將PADEASYTMSOCS1轉(zhuǎn)染BMDC形成SOCS1高表達(dá)組DCPADCASYSOCS1。普通顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)高表達(dá)SOCS1的BMDCS所形成的集落明顯的小且突起少而鈍；熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)大約80％BMDCS發(fā)出綠色熒光；同時(shí)RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)上述BMDCS的SOCS1基因和蛋白的表達(dá)情況。與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組SOCS1蛋白的表達(dá)明顯增多。但由于病毒載體的影響與BMDCS相比空病毒對(duì)照組也有少量的SOCS1蛋白的表達(dá)。結(jié)果證實(shí)構(gòu)建的PADEASYSOCS1腺病毒能有效介導(dǎo)SOCS1基因在小鼠BMDCS中表達(dá)且空病毒可以誘導(dǎo)BMDCS微量的表達(dá)SOCS1。第二部分高表達(dá)SOCS1對(duì)BMDC生物學(xué)特性和功能的影響在本部分BMDCS被分為6組施以不同的刺激條件。A組培養(yǎng)過程中不加任何刺激的空白對(duì)照組DCONLYB組培養(yǎng)第5天加入PADEASYTMVNG空病毒對(duì)照組DCPADEASYTMVNGC組培養(yǎng)第5天加入PADEASYTMSOCS1實(shí)驗(yàn)組DCPADEASYTMSOCS1D組培養(yǎng)過程中不加任何刺激的空白對(duì)照組檢測(cè)前24小時(shí)再加入LPS刺激LPSDCE組培養(yǎng)第5天加入PADEASYTMVNG空病毒對(duì)照組檢測(cè)前24小時(shí)再加入LPS刺激LPSDCPADEASYTMVNG組F組培養(yǎng)第5天加入PADEASYTMSOCS1檢測(cè)前24小時(shí)再加入LPS刺激LPSDCPADEASYTMSOCS1組。經(jīng)過FACS、ELISA等實(shí)驗(yàn)手段檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)高表達(dá)SOCS1能夠明顯抑制BMDCS表面分子CD40、CD80、CD86和MHCII分子的表達(dá)；BMDCS攝取抗原能力維持在高水平而刺激異記憶T細(xì)胞增殖能力不足；同時(shí)伴隨著IL12P40、IL6、IFNΓ、及TNFΑ等細(xì)胞因子分泌水平的降低?？詹《窘M則恰恰相反在一定程度上刺激了BMDCS的成熟。但高表達(dá)SOCS1能夠明顯抑制空病毒所誘導(dǎo)的BMDCS的成熟作用。此外NFΚB在TLR誘導(dǎo)的DC成熟過程中起十分重要作用主要參與了細(xì)胞因子的分泌調(diào)節(jié)。SOCS1、P13K、PKCS等信號(hào)分子通過NFΚB、P38MAPK和JNK的激活而調(diào)控DC的成熟和細(xì)胞因子的分泌。因此我們選擇其中兩個(gè)重要的相關(guān)信號(hào)分子即NFΚB和JNK初步探索高表達(dá)SOCS1對(duì)BMDCS信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高表達(dá)SOCS1的BMDCS中P65表達(dá)量明顯降低JNK的表達(dá)量有所升高；而LPS刺激后高表達(dá)SOCS1的BMDCS中P65表達(dá)量略微降低JNK的表達(dá)量明顯降低。因此我們推測(cè)高表達(dá)SOCS1的BMDCS在信號(hào)調(diào)節(jié)的過程中主要是P65發(fā)揮了調(diào)控作用；經(jīng)LPS刺激后主要由JNK發(fā)揮了調(diào)控作用從而抑制了DC的成熟和細(xì)胞因子的分泌。以上結(jié)果表明SOCS1在DC中的高表達(dá)能夠明顯抑制DC表型和功能的成熟增強(qiáng)其耐受原性并通過NFΚB和JNK信號(hào)途徑發(fā)揮調(diào)控作用為進(jìn)一步在器官移植領(lǐng)域中如何利用免疫負(fù)向調(diào)控分子維持免疫穩(wěn)定態(tài)提供了新的依據(jù)和方法。

簡(jiǎn)介：目的為了解A組輪狀病毒ROTAVIRUSRV在中國(guó)的流行和演變情況為中國(guó)應(yīng)用和開發(fā)RV疫苗提供必需的背景資料我們?cè)谔K州和馬鞍山兩地進(jìn)行了嬰幼兒腹瀉的臨床流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和RV的血清與分子流行病學(xué)研究評(píng)價(jià)RV腹瀉的疾病負(fù)擔(dān)情況并初步探討嬰幼兒輪狀病毒腹瀉的危險(xiǎn)因素研究方法1選擇蘇州兒童醫(yī)院簡(jiǎn)稱蘇醫(yī)和馬鞍山鋼鐵公司醫(yī)院簡(jiǎn)稱馬醫(yī)為監(jiān)測(cè)點(diǎn)從2001年9月到2003年1月以到兩所醫(yī)院就診的5歲以下腹瀉患兒為研究對(duì)象進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查并收集糞便標(biāo)本2采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOBSBENTASSAYELISA檢測(cè)A組輪狀病毒抗原采用巢式RTPCR法確定A組RV的血清型3采用病例對(duì)照研究方法分別設(shè)立醫(yī)院對(duì)照和社區(qū)對(duì)照對(duì)RV腹瀉的影響因素進(jìn)行分析4所有資料用FOXPRO雙機(jī)錄入采用SAS80進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析研究結(jié)果1兩所醫(yī)院小于5歲的RV腹瀉患兒中以13歲為主感染的高峰均在秋冬季蘇醫(yī)RV的感染率農(nóng)村高于城市2研究期間兩醫(yī)院RV毒株的G血清型均以G3型為主其次為G1及少量的G2、G4、G9蘇醫(yī)兩年的RV感染高峰以G3型為主而馬醫(yī)2001年的RV感染高峰以G1型為主2002年則以G3型為主兩醫(yī)院RV毒株的的P基因型均以P4為主其次為P8未檢出其它型別組合型別多為P4與G1、G3的組合其次為P8與G1、G3的組合3RV腹瀉的臨床表現(xiàn)以水性腹瀉和發(fā)熱為主腹瀉患兒的住院天數(shù)與是否感染RV無關(guān)臨床表現(xiàn)與RV血清型無直接聯(lián)系RV腹瀉患兒的臨床癥狀綜合評(píng)分VESIKARISCALE為995、824均高于非RV感染的腹瀉患兒顯示前者的臨床癥狀普遍較重研究期間所監(jiān)測(cè)的兩個(gè)醫(yī)院中均未出現(xiàn)腹瀉患兒的死亡4在蘇醫(yī)和馬醫(yī)的研究對(duì)象中門診腹瀉患兒分別有4407％和2167％受到RV感染住院腹瀉患兒中分別有559％和2913％受到RV感染住院患兒所花費(fèi)的平均醫(yī)療費(fèi)用分別占當(dāng)?shù)丶彝テ骄率杖?2以上和135在郊區(qū)和農(nóng)村的生活背景下孩子的母親年紀(jì)輕、孩子由老人看護(hù)可能會(huì)增加RV感染的機(jī)會(huì)值為118和341在對(duì)母乳喂養(yǎng)因素的研究中提示母乳喂養(yǎng)16個(gè)月可能減少RV感染015而持續(xù)12個(gè)月以上則可能增加感染RV的機(jī)會(huì)328另外經(jīng)常將幼兒帶到公共場(chǎng)所可能會(huì)增加RV感染的機(jī)會(huì)結(jié)論輪狀病毒感染是兩地3歲以下兒童腹瀉的主要病因病毒型別隨不同地區(qū)、不同時(shí)間有所變異僅靠改善衛(wèi)生環(huán)境和母乳喂養(yǎng)等措施尚不能有效的控制RV感染因此加強(qiáng)RV監(jiān)測(cè)和研制有針對(duì)性的輪狀病毒疫苗對(duì)預(yù)防嬰幼兒腹瀉以及減輕RV疾病負(fù)擔(dān)有重要作用

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多杯狀病毒分子流行病學(xué)及病原與宿主互作機(jī)制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的在進(jìn)行海洋生物活性物質(zhì)分離篩選的過程中我們發(fā)現(xiàn)柄海鞘STYELACLAVAHEDMAN中的一個(gè)具有很高藥用價(jià)值的活性物質(zhì)海鞘醇這是一個(gè)既具有還原性有具有較強(qiáng)氧化性的甾醇類有機(jī)化合物實(shí)驗(yàn)表明它具有極高的對(duì)抗乙型肝炎病毒的體外活性對(duì)于常規(guī)制劑新型的給藥體系緩控釋及靶向制劑的優(yōu)點(diǎn)很多以生物降解型高分子為載體的微球制劑是以人為本的科技發(fā)展方向而聚乳酸及其共聚物更是近年發(fā)展起來的一類完全生物降解的無毒的藥用載體因此我們進(jìn)行了海鞘醇PLGA微球的研制使其成為具有肝靶向的長(zhǎng)效的靜脈給藥制劑方法采用乳化溶劑揮發(fā)法制備載海鞘醇的PLGA微球并對(duì)制備過程的影響因素進(jìn)行了單因素分析通過掃描電鏡照相來考察微球的形態(tài)學(xué)建立了海鞘醇的HPLC含量測(cè)定方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察通過DSC及IR光譜的方法對(duì)海鞘醇在PLGA微球內(nèi)的分散形式進(jìn)行了推斷對(duì)影響微球載藥量與包封率的因素進(jìn)行考察對(duì)微球的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步考察設(shè)計(jì)海鞘醇PLGA微球體外釋放實(shí)驗(yàn)通過對(duì)微球釋放過程中海鞘醇的含量測(cè)定對(duì)微球體外釋放過程進(jìn)行考察并對(duì)釋放結(jié)果進(jìn)行模型擬合通過HBVDNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HEPG的2215細(xì)胞系進(jìn)行了海鞘醇PLGA微球?qū)BSAG、HBEAG的抑制實(shí)驗(yàn)研究通過小鼠尾靜脈注射海鞘醇PLGA微球后對(duì)不同時(shí)間各臟器及血漿中海鞘醇濃度的測(cè)定進(jìn)行微球體內(nèi)分布的考察以確定其靶向性通過大鼠腹腔注射海鞘醇玉米油溶液及尾靜脈注射海鞘醇PLGA微球后對(duì)不同時(shí)間血漿中海鞘醇濃度的測(cè)定進(jìn)行微球藥動(dòng)學(xué)的初步考察并通過3P87軟件對(duì)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行求算結(jié)論綜上所述海鞘醇PLGA微球在體外對(duì)HBSAG、HBEAG有很強(qiáng)的抑制作用粒徑范圍在12ΜM的海鞘醇PLGA微球一次注射在體內(nèi)緩慢釋放至少可以達(dá)到2周血藥濃度保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的范圍內(nèi)符合注射用肝靶向緩釋給藥的要求

簡(jiǎn)介：分類號(hào)一，論文編號(hào)密級(jí)彳鷹犬博士學(xué)位論文乙型肝炎病毒X蛋白相關(guān)原發(fā)性肝癌發(fā)生中的表觀遺傳學(xué)機(jī)制研究STUDYONTHEEPIGENETICMECHANISMOFHEPATITISBVIRUSXPROTEININHEPATOCELLULARCARCINOMA20092012答辯日期2Q12笙Q主目Q2目獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名瑯兮氐日期沙12年歲月}日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索?？梢圆捎糜坝?、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名善拿I虱日期弘11年}月1日導(dǎo)師簽名形≠卜日期2糾乙年廠月／日

簡(jiǎn)介：研究目的了解慢性B淋巴細(xì)胞增殖性疾病BCLPD不同亞型患者甲、乙及丙型肝炎病毒感染情況，對(duì)比侵襲性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤BNHL，探討B(tài)CLPD不同亞型與肝炎病毒感染的相關(guān)性。研究方法回顧性分析該院自1994年01月至2014年01月間，733例初診BCLPD及同期132例侵襲性BNHL患者的臨床資料，比較肝炎病毒感染的差異。統(tǒng)計(jì)分析甲、乙及丙型肝炎病毒感染在各BCLPD亞型中的感染情況及相關(guān)性。結(jié)果733例BCLPD患者中，抗甲型肝炎病毒抗體HAVAB、抗丙型肝炎病毒抗體HCVAB的陽性率分別為11％和19％，與同期132例侵襲性BNHL相較，未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。乙型肝炎病毒表面抗原HBSAG陽性患者占79％，明顯低于同期侵襲性BNHL組79VS165％，P0001。在BCLPD患者中，HBSAG、HBEAG及抗HBCAB同時(shí)陽性者（“大三陽”）占11％，與同期侵襲性BNHL60％相較明顯降低。而HBSAG、抗HBEAB及抗HBCAB同時(shí)陽性（“小三陽”）患者的比例在BCLPD組與侵襲性BNHL組問未見明顯差異。在733例BCLPD患者中，CLL279例381％，WM119例162％，F(xiàn)L74例101％，BLPDU66例90％，SMZL48例65％，HCL33例45％，NMZL27例37％，MALT15例20％及BPLL6例08％，疑似脾邊緣區(qū)淋巴瘤SMZL40例55％，疑似套細(xì)胞淋巴瘤MCL26例36％?？笻AVAB及抗HCVAB陽性率在不同亞型BCLPD組患者中無顯著差異。但HBSAG在脾邊緣區(qū)淋巴瘤SMZL患者中的陽性率為188％，明顯高于其他BCLPD患者P0004及其他邊緣區(qū)淋巴瘤MZL患者P0005。乙肝“大三陽”在不同亞型BCLPD間無顯著差異，而乙肝“小三陽”在SMZL組占166％，明顯高于其他BCLPD組166％VS47％，P0000。在BCLPD患者中，已感染乙型肝炎病毒HBV的患者共計(jì)284例，占387％。在已感染HBV的SMZL患者中，HBSAG的陽性率為346％，高于其他BCLPD亞型患者346％VS19％，P006，但兩組間差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在已感染HBV的患者中，乙肝“大三陽”在不同BCLPD亞型之間無顯著差異，乙肝“小三陽”在SMZL組明顯高于其他BCLPD組308％VS121％，P0009。結(jié)論甲型和丙型肝炎病毒感染率在BCLPD與侵襲性BNHL及各類BCLPD間無顯著差異。乙型肝炎病毒在SMZL中感染率明顯高于其他BCLPD亞型，提示HBV在我國(guó)SMZL發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。