簡介：目的檢測濟南地區(qū)無償獻血者血漿中乙型肝炎病毒表面抗原HBSAG、抗丙型肝炎病毒HCV抗體、抗人類免疫缺陷病毒HIV抗體以及抗人皰疹病毒8型HHV8IGG抗體，分析我國濟南地區(qū)獻血人群中相關病毒的感染情況和流行病學特點；為濟南地區(qū)無償獻血人群的選擇和制定招募安全血源的策略提供理論依據(jù)。方法1血清學檢測11利用ELISA方法對2006年1月～2006年12月無償獻血者的血漿標本43904份進行HBSAG、抗HCV、抗HIV的檢測；抗HIV檢測呈陽性者送山東省疾病預防控制中心進行WESTERNBLOT確認。12利用ELISA方法對其中520份獻血者血漿進行抗HHV8IGG抗體的檢測，包被抗原為HHV8結構蛋白FK81合成多肽。2統(tǒng)計學處理2006年1月～2006年12月的獻血者基本資料和各項試驗檢測的結果應用SPSS100統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析。統(tǒng)計學方法采用X2檢驗。結果143904份獻血者血漿中HBSAG檢出率為204％89843904，抗HCV檢出率為078％34443904，抗HIV檢出率為00045％243904。520份獻血者血漿中抗HHV8檢出率為5962％31520。2統(tǒng)計學分析結果顯示，HBSAG、抗HCV檢出率在不同年齡組間的差異無統(tǒng)計學意義P＞005，在不同職業(yè)間的差異有統(tǒng)計學意義P＜005；男性獻血者中HBSAG的檢出率高于女性，差異有統(tǒng)計學意義JP005。結論濟南市無償獻血者中存在一定比率的HCV感染者及相對較高的HBV、HHV8感染者，同時尚存在個別HIV感染者。在以后的血液篩查工作中有必要進一步提高檢測方法的準確度以及加強招募前的篩查工作，以不斷提高輸血安全。

簡介：目的建立羊椎間盤退變模型；應用腺相關病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV介導人轉化生長因子ΒHUMANTRANSFMINGGROWTHFACTΒ，HTGFΒ和人血管內皮生長因子HUMANVULARENDOTHELIALGROWTHFACT，HVEGF基因體內轉染羊退變椎間盤，觀察AAVHTGFΒ和HVEGF的表達以及單基因轉染和雙基因聯(lián)合轉染對退變椎間盤的生物學作用。方法成年SPFSPECIFICPATHOGENFLEE，SPF級去勢山羊，通過11號刀片損傷椎間盤前外側纖維環(huán)的方法建立椎間盤退變模型，造模后4、8、12、24周分別進行影像學和組織學檢測，觀察造模椎間盤變化。將造模成功動物隨機分為A、B、C、D和E5組，各組分別于造模椎間盤內注射50ΜL試劑A組RAAV2HTGFΒ、B組RAAV2HVEGF、C組RAAV2HTGFΒRAAV2HVEGF、D組磷酸鹽緩沖液PBS、E組RAAV2EGFPENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP。轉染后2、4、8、12周時分別進行影像學、組織學和生物化學檢測。結果1影像學和組織學檢測結果表明造模動物椎間盤發(fā)生緩慢、可靠的退行性變。2基因轉染后椎間盤的變化①影像學檢測A組、C組動物椎問盤高度指數(shù)DISCHEIGHTINDEX，DHI均高于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計學意義；B組與D組無顯著性差異。②組織學檢測HE、SAFRANINE0染色后觀察到A組、C組動物椎間盤細胞數(shù)目減少量、結構紊亂程度、髓核纖維環(huán)界限模糊程度等均低于D組。B組與D組無顯著性差異。免疫組化染色后觀察到A組、C組動物椎間盤髓核中Ⅱ膠原含量下降程度、纖維環(huán)中Ⅰ膠原含量下降程度均低于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計學意義，B組與D組無顯著性差異；轉染兩周后，A組、B組和C組的RAAV2HTGFΒ、RAAV2HVEGF和RAAV2HTGFΒRAAV2HVEGF較D組顯著增多；E組動物轉染后12周仍可觀察到EGFP的表達。③生物化學檢測A組、C組動物椎間盤Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的含量下降程度均低于D組，C組更顯著，差別有統(tǒng)計學意義；B組與D組無顯著性差異。結論1本方法可以成功建立一種椎間盤退變動物模型；2RAAV2HTGFΒ和RAAV2HVEGF轉染退變的椎間盤后，可持續(xù)表達12周；3HTGFΒ轉染可在一定程度上逆轉椎間盤退變；4HVEGF可協(xié)同HTGFΒ逆轉椎間盤退變；5HTGFΒ和HVEGF共轉染具有協(xié)同效應。

簡介：目的構建骨形成蛋白7BMP7腺相關病毒載體質粒PAAVHBMP7IRESZSGREEN和SOX9腺相關病毒載體質粒PAAVHSOX9IRESTDTOMATO并進行腺相關病毒包裝體外共同轉染人椎間盤細胞評價其生物學效應。方法用分子克隆技術從質粒PUC57HBMP7獲得BMP7CDNA并克隆至AAV包裝質粒PAAVIRESZSGREEN上構建成PAAVHBMP7IRESZSGREEN的AAV重組質粒經酶切及測序鑒定后由深圳百恩維公司對PAAVHBMP7IRESZSGREEN進行包裝同法獲得SOX9過表達腺相關病毒PAAVHSOX9IRESTDTOMATO的包裝AAVBMP7與AAVSOX9聯(lián)合轉染人退變的椎間盤纖維環(huán)細胞WESTERNBLOTTING檢測BMP7與SOX9蛋白表達以及髓核細胞Ⅱ型膠原表達量的變化。結果經酶切鑒定及基因測序證實AAV包裝質粒PAAVHBMP7IRESZSGREEN與PAAVHSOX9IRESTDTOMATO構建完成熒光免疫組化顯示BMP7與SOX9蛋白表達百思維公司包裝出具有生物學功能的AAVBMP7AAVSOX9構建成功。WESTERNBLOTTING顯示BMP7與SOX9在纖維環(huán)細胞中表達AAVBMP7與AAVSOX9雙基因聯(lián)合轉染的纖維環(huán)細胞Ⅱ型膠原表達量明顯較AAVBMP7與AAVSOX9基因轉染的細胞Ⅱ型膠原表達量多。結論構建AAVBMP7和AAVSOX9可在體外表達BMP7在體外能夠協(xié)同SOX9促進退變纖維環(huán)細胞Ⅱ型膠原表達增加為BMP7與SOX9體內實驗與基因逆轉椎間盤的早期退變提供了理論依據(jù)。

簡介：目的了解遵義市兩城區(qū)（紅花崗區(qū)及匯川區(qū)）乙型肝炎病毒的感染情況及乙型肝炎后肝硬化的發(fā)病情況，分析乙型肝炎病毒感染者及乙型肝炎后肝硬化病人的性別及年齡差異，探討性別及年齡因素對乙型肝炎病毒感染及乙型肝炎后肝硬化發(fā)病的影響。方法收集2007年1月2009年12月在遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院病人（除外肝臟疾?。┑难獦樱捎妹嘎?lián)免疫吸附試驗（ELISA）進行乙肝病毒（HBV）血清學檢測，包括乙肝病毒表面抗原（HBSAG）、乙肝病毒表面抗體（HBSAB）、乙肝病毒E抗原（HBEAG）、乙肝病毒E抗體（HBEAB）、乙肝病毒核心抗體（HBCAB）；回顧性調查2007年1月2009年12月遵義市兩城區(qū)診斷為乙型肝炎后肝硬化的病人。被檢查人群按10歲一個年齡階段分為8個年齡組。結果被檢查人群中總的HBSAG陽性率為1263％，其中男性HBSAG陽性率為1762％，女性為823％，兩者之間有顯著差異（P001）；從10歲到60歲的各年齡組HBSAG的陽性率存在明顯的性別差異，男性HBSAG的陽性率明顯高于女性（P001），尤其是在2040歲年齡階段性別差異較明顯。遵義兩城區(qū)2007年1月2009年12月共有778例病人診斷為乙型肝炎后肝硬化，乙型肝炎后肝硬化總的發(fā)病率為837410萬人，其中男性發(fā)病率1194910萬人，女性發(fā)病率為458010萬人，男女發(fā)病率之比為2801。乙肝后肝硬化的發(fā)病率隨著年齡增加而增加，主要分布在4070歲，在20歲以上的各年齡組乙型肝炎后肝硬化的發(fā)病率存在明顯的性別差異，男性發(fā)病率明顯高于女性（P001），尤其在2050歲年齡階段性別差異較明顯。年齡、性別與乙肝病毒感染率及乙肝后肝硬化發(fā)病率存在相關性，經多因素LOGISTIC回歸分析，年齡、性別為乙肝病毒感染及乙肝后肝硬化發(fā)病的獨立危險因素。結論乙型肝炎病毒感染率、乙肝后肝硬化在年齡及性別分布存在顯著差異，女性的乙肝病毒感染率及乙型肝炎后肝硬化的發(fā)病率明顯低于男性。

簡介：背景人類腸道病毒HEV隸屬于小核糖核酸（RIBONUCLEICACIDRNA）病毒目（PICNAVIRALES）小RNA病毒科（PICNAVIRIDAE）腸道病毒屬（ENTEROVIRUS），基因組為單股正鏈RNA。病毒基因組的5非編碼區(qū)含有基因組RNA復制和翻譯所需的結構，3非編碼區(qū)具有與基因組復制有關的高度保守的二級機構及多聚腺苷酸POLYA尾。編碼區(qū)分為結構蛋白編碼區(qū)P1和非結構蛋白編碼區(qū)P2和P3。結構蛋白編碼區(qū)P1依次編碼VP4、VP2、VP3和VP1共4個衣殼結構蛋白。其中VP1蛋白位于病毒顆粒最外側，含有主要的抗原位點，是進行基因分型和分子流行病學研究最主要的靶基因。根據(jù)VP1序列核苷酸差異，HEV分為HEVA組（HEVA）、B組HEVB、C組HEVC和D組HEVD4個組。目前，HEVB包含59個血清型，為4個組中所含血清型最多的一組。HEVB病毒不僅血清型別眾多，而且流行范圍廣泛，可導致多種疾病的暴發(fā)流行，加之HEV基因組變異迅速，新的血清型不斷出現(xiàn)，因而HEVB血清型病毒成為當前研究關注的熱點之一。早在50多年前，人們就發(fā)現(xiàn)RNA病毒間復雜的基因變異。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，在全球多個脊髓灰質炎（以下簡稱脊灰）病毒PV減毒活疫苗免疫覆蓋率低的地區(qū)，多次出現(xiàn)由重組后的脊灰疫苗衍生株病毒循環(huán)CVDPVS導致的脊灰暴發(fā)，使消滅脊灰的免疫策略及疾病監(jiān)測變得更為復雜，也引起人們對HEV遺傳變異機制的研究產生了新的興趣，更加關注HEV基因組的易變性，為研究HEV的進化提供了新的視點。HEV基因組的進化方式包括核苷酸點突變和遺傳重組。P1編碼區(qū)的進化幾乎均由核苷酸替換所引起的點突變驅動的。P2和P3區(qū)編碼病毒復制所需的非結構蛋白和酶，這些多肽蛋白序列的相對保守，功能相對穩(wěn)定，而大多數(shù)點突變對于蛋白和酶的功能來說是不利的，基因重組成為其進化的主要手段。HEV的進化就是基因組的各個部分在以不同方式進化的同時，通過遺傳重組而產生出的被自然選擇的優(yōu)勢毒株的過程。由于3D編碼區(qū)位于基因組的3末端，故比較VP1和3D基因在系統(tǒng)發(fā)生上的差異，可作為篩選重組發(fā)生的指標。在過去20多年里，山東省從急性弛緩性麻痹AFP、無菌性腦膜炎AM2種疾病監(jiān)測病例分離到上千株HEV山東株，其中多數(shù)屬于HEVB，且有些HEVB血清型呈現(xiàn)為優(yōu)勢血清型。HEV感染已成為嚴重威脅廣大人群特別是兒童身體健康與生命安全的重大公共衛(wèi)生問題之一。因此，運用分子流行病學的方法，通過對HEVB優(yōu)勢血清型山東株基因序列的分析，探索HEVB在區(qū)域性引入和擴散過程中VP1進化遺傳學和居群動力學特征，分析不同血清型間重組在HEV進化中的發(fā)生頻率，對于HEV所致相關疾病的機制及其預防控制均具有重要的理論和實際意義。研究目的1構建并完善HEVB山東株優(yōu)勢血清型CVA9、CVB3、CVB5、ECHO6、ECHO7、ECHO11、ECHO14、ECHO19、ECHO25、ECHO30的VP1區(qū)和3D區(qū)基因數(shù)據(jù)庫，并對其進行基因特征研究。2探討HEVB山東株優(yōu)勢血清型基因重組的發(fā)生，闡明各主要血清型在山東省共循環(huán)過程中的基因重組規(guī)律及重組基因片段的轉移方向和頻率。3分析HEVB山東株優(yōu)勢血清型的基因序列起源、進化速度及流行史重構等進化起源特征。研究方法1毒株來源本研究所選毒株來自山東省1989～2010年AFP和AM2種疾病監(jiān)測病例。實驗前接種RD或HEP2細胞進行病毒增殖。2基因測序提取病毒RNA，RTPCR擴增VP1和3D區(qū)基因片段，經1％瓊脂糖凝膠電泳后對陽性產物進行序列測定。3型別鑒定將各血清型的VP1序列通過NCBI在線提供的BLAST程序與數(shù)據(jù)庫序列進行比對，確定HEV山東株的血清型別。4生物信息學分析使用MEGA40軟件，構建VP1區(qū)和3D區(qū)系統(tǒng)進化樹，分析HEV山東株優(yōu)勢血清型基因重組情況。通過BEAST162軟件分析HEVB山東株優(yōu)勢血清型的進化遺傳學特征，重構優(yōu)勢血清型毒株在山東省內的流行史。主要結果1HEVB山東株優(yōu)勢血清型的確定在前期研究中，已通過HEV分子生物學定型方法對部分山東株的血清型別進行鑒定。本研究在前期研究基礎上繼續(xù)對1989～2010年分離自山東省AFP和AM監(jiān)測病例的HEV山東株進行型別鑒定，共鑒別出非脊灰腸道病毒NPEV1010株，涵蓋58個HEV血清型別。其中，CVA9、CVB3、CVB5、ECHO6、ECHO7、ECHO11、ECHO14、ECHO19、ECHO25、ECHO30這10個血清型在山東省歷年HEV檢測中共分離到792株，占所有已定血清型分離株的784％7921010，為HEVB山東株優(yōu)勢血清型別。2HEVB山東株優(yōu)勢血清型基因重組分析本研究共選取458株HEVB山東株3D序列進行序列分析。通過構建3D區(qū)系統(tǒng)進化樹發(fā)現(xiàn)，山東省10個優(yōu)勢血清型毒株間在非結構蛋白編碼區(qū)內存在頻繁的基因重組現(xiàn)象，山東株在3D區(qū)系統(tǒng)進化樹中共劃分為13個主要的基因簇。13D區(qū)系統(tǒng)進化樹顯示，每個基因簇所包含血清型別不盡相同，同一血清型的山東株在3D區(qū)系統(tǒng)進化樹中分處不同的基因簇。每個基因簇的山東分離株歸屬于2～9個HEV血清型，第1、4、6、8、12、13基因簇為優(yōu)勢基因簇。23D編碼區(qū)不同基因簇的主要分離時間不完全相同。3D區(qū)系統(tǒng)進化樹基因簇的最長分離時間跨度為21年，各基因簇平均優(yōu)勢分離時間跨度約為15（148±46）年。3HEVB山東株優(yōu)勢血清型進化起源分析本研究所選10個HEVB山東優(yōu)勢血清型毒株的祖先約起源于1885～1913年之間，不同血清型VP1區(qū)核苷酸序列每年每個堿基位點的進化速度為1007103～9856103。其中，CVA9、ECHO6、ECHO7、ECHO25血清型山東株與來自中國其他省份和世界各地的分離株存在共同的進化祖先，而CVB3、ECHO11、ECHO14、ECHO19、ECHO30血清型山東株僅與中國其他省份的相應毒株有共同的祖先起源。主要結論1CVA9、CVB3、CVB5、ECHO6、ECHO7、ECHO11、ECHO14、ECHO19、ECHO25、ECHO30血清型為山東省HEVB優(yōu)勢血清型。在長達22年的AFP和AM疾病監(jiān)測中，本研究所選10個血清型毒株在山東省歷年分離數(shù)明顯高于其他HEV血清型別，并且在山東省局部地區(qū)曾多次引起AM等相關疾病的暴發(fā)流行，為山東省內共循環(huán)毒株的HEVB優(yōu)勢血清型。2基因重組是HEV非結構蛋白區(qū)重要的進化方式。HEVB山東株在3D進化樹中劃分為13個主要的基因簇，各基因簇中HEVB血清型種類和數(shù)量不同。同一血清型山東株位于多個基因簇，而不同基因簇的主要分離時間不完全相同。提示HEVB山東株非結構蛋白區(qū)基因片段轉移頻繁，存在活躍的基因重組。3HEVB山東株優(yōu)勢血清型VP1區(qū)核苷酸變異活躍，在山東省內存在多個傳播鏈的共同流行。重構VP1區(qū)流行史發(fā)現(xiàn)，HEVB山東株優(yōu)勢血清型的共同祖先起源于97年前，同一血清型的不同傳播鏈在不同的時期進化速度不一致，提示HEV山東株在人群中的進化不符合勻速增長模型和嚴格分子鐘進化方式。

簡介：乙型肝炎病毒HBV原型病毒PROTOTYPE或稱野毒株WILDTYPE包括多種在地域和種族分布上有所差異的毒株表現(xiàn)為HIBV不同的血清型和基因型HBV變異株是指基因型以外的改變其核苷酸和或氨基酸與同型的代表株或共有列比較有獨特的變化HBV較一般DNA病毒有更高的突變率HBV的各個基因區(qū)及多數(shù)調控元件中都可發(fā)生變異變異類型有點突變、缺失、重復、插入、重排等HBV變異株與其致病性的改變、免疫逃逸、持續(xù)感染、以及產生耐藥性等均相關研究不同HBV變異株基因組的結構與功能可深化對HBV致病機理的研究并能揭示HBV新的作用位點及抑制病毒的靶標提出新的研究起點HBV的包膜蛋白可誘生機體產生保護性抗體抗HBS對乙型肝炎的免疫預防、治療有重要意義HBVS基因變異可改變HBSAG的抗原性、免疫原性對乙型肝炎的診斷和預防有潛在的影響此外S基因變異可能同時造成與之完全重疊的P基因變異而影響病毒的復制繼而影響病毒的感染性和致病性PRES蛋白與HBV結合肝細胞膜及HBV的裝配和釋放有關PRES區(qū)某些缺失變異可改變病毒形態(tài)或導致病毒包膜蛋白分泌失調而與肝細胞病變有關為開展中國HBV株的結構與功能基因組學研究該論文重點研究了中國自然存在HBV包膜基因變異株基因組的結構與功能包括HBV基因組克隆及細胞轉染的研究復制功能不同的兩株HBV基因組結構分析與抗原表達的比較HBSAG129位GLN→LEU新異株129L功能基因組研究

簡介：近年來隨著5種肝炎病毒AE的發(fā)現(xiàn)有80﹪90﹪的病毒性肝炎病例得到了很好的解釋在剩下的10﹪20﹪的病例中病人雖然有典型的病毒性肝炎的癥狀卻檢測不到已知的五種肝炎病毒的血清學標志物而1989年HCV和1990年HEV的發(fā)現(xiàn)使我們堅信所有病毒性肝炎都應該是由相應的病原體引起的因此人們一直在努力尋找隱藏在這些原因不明的病毒性肝炎背后的病原體1999年6月DIASINRESEARCHCENTRE的PANIELLIPRIMI領導的研究小組研究人員在一個首寫名為SEN的HIV靜脈吸毒者患者血液中發(fā)現(xiàn)了一種新的DNA病毒將其稱作SEN病毒目前對SEN病毒的研究才剛剛起步對它的認識還很不全面對其致病性也未有系統(tǒng)深入的研究該研究的目的在于對SEN病毒中懷疑與不明原因輸血后肝炎有關的兩個亞型SENVD和SENVH的分子生物學特性以及它們在中國各類人群中的流行情況進行初步研究并希望從中得到確定SEN病毒致病性的有用信息

簡介：點擊查看更多天津地區(qū)麻疹病毒分子流行病學的初步研究.pdf精彩內容。

簡介：分子生物學研究表明流感病毒的血凝素HA基因與流行規(guī)模最密切只有HA蛋白分子上抗原決定簇區(qū)的氨基酸替換才能引起抗原性變異該研究對在河北省分離到的甲亞型HN流感病毒HA基因進行了核苷酸序列測定并結合抗原性分析資料以探索地方毒株的型別變遷和基因變異規(guī)律及時抓住有意義變異株指導今后流感的監(jiān)測、診斷及試劑和疫苗研制甲亞型流感病毒株的新變種多首發(fā)于北方故河北省流行毒株在目前流感病毒HN亞型的變異和流行中可能具有重要作用結論1、199798流感流行期分離到6株甲亞型流感病毒抗原性接近于A京防186與A北京26295有大變異2、基因分析表明1997年中國出現(xiàn)了甲亞型新變異株在制備診斷試劑和疫苗時需要用此類毒株3、核苷酸序列測定結合抗原性分析可更準確地闡明病毒變異情況

簡介：輪狀病毒屬于呼腸病毒科，是世界范圍內引起嬰幼兒嚴重腹瀉的主要病原體，每年全世界死于輪狀病毒感染的兒童約達611000。輪狀病毒具有三層衣殼，其基因組由11個分節(jié)段的雙鏈RNA組成，編碼6個結構蛋白和6個非結構蛋白。根據(jù)交叉反應性抗原的不同，輪狀病毒分為AG7個組，其中只有A、B、C三個組可以感染人類，而引起嬰幼兒腹瀉的主要為A組，該組是最常見也是最為重要的。A組輪狀病毒非結構蛋白NSP3為分子量36KDA的同二聚體，其N端可以結合輪狀病毒MRNA3’末端的組特異性四核苷酸共有序列，C端與POLYA結合蛋白競爭結合真核翻譯起始因子ELF4G。NSP3能夠關閉宿主細胞MRNA的翻譯，并且可能在輪狀病毒基因組復制和病毒形態(tài)發(fā)生中起重要作用。本研究克隆了A組人輪狀病毒TBCHEN株NSP3編碼基因，應用質粒PETI_，作為表達載體構建了重組表達質粒PETNSP3，并在大腸桿菌BL21DE3中高效表達了重組蛋白NSP3，目的蛋白表達量占菌體總蛋白量的286％。采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離回收的方法有效地純化了目的蛋白，并制備了該重組蛋白的免疫豚鼠血清抗體，WESTERNBLOT分析顯示該血清抗體能與重組蛋白NSP3發(fā)生特異性免疫反應。免疫熒光實驗顯示在輪狀病毒感染的MA104細胞中NSP3分布在整個細胞質中。NSP3在細胞質中分布形式不一致有的分布彌散、均勻；有的既有彌散分布，又呈現(xiàn)顆粒狀，并且這些顆粒更多地出現(xiàn)在細胞核周圍。這些結果為進一步研究TBCHEN株輪狀病毒NSP3的結構、功能和免疫學性質奠定了基礎。

簡介：本文為了進一步了解我國PUUV病毒在宿主動物中的流行情況，加強我國腎綜合征出血熱的防治，進行了以下的研究1對我國吉林省和內蒙古地區(qū)的岸鼠平進行了PUUV病毒感染情況調查。1應用RTPCR技術首次在我國內蒙古地區(qū)捕捉的紅背中發(fā)現(xiàn)PUUV。2于2005年和2006年在吉林省撫松市共采集了277份標本，使用IFA和RTPCR分別檢測了標本中病毒抗原和核酸。發(fā)現(xiàn)此次標本中的PUUV病毒序列與在該地區(qū)2002年所發(fā)現(xiàn)的存在著較大差異。發(fā)現(xiàn)不同年份宿主動物的PUUV感染率存在著較大的差異。2普馬拉病毒新亞型S片段和M片段基因的獲得及遺傳學研究。1成功地獲得了S片段和M片段基因全序列。2對獲得的基因序列進行了遺傳學分析。發(fā)現(xiàn)與其它普馬拉病毒株S片段序列的核苷酸同源性為682％756％，推導的氨基酸序列的同源性為929％977％。全長M片段與其它普馬拉病毒M片段序列的核苷酸同源性為687％730％，推導的氨基酸序列的同源性為900％928％。證實我國存在著普馬拉病毒的新亞型。3對病毒分離進行了嘗試。本課題進行了中國普馬拉病毒株的病毒學、遺傳學研究，在我國發(fā)現(xiàn)了PUUV新亞型，發(fā)現(xiàn)我國東北地區(qū)不同年份棕背的PUUV感染率不同。此外，在我國內蒙古地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)存在PUUV病毒感染。對我國腎綜合征出血熱的防治提供了有益的幫助和依據(jù)。

簡介：目的構建人生存素SURVIVIN、轉化生長因子Β3TGFΒ3、基質金屬蛋白酶抑制劑1TIMP1三基因過表達慢病毒載體，通過一次轉染，實現(xiàn)SURVIVIN、TGFΒ3、TIMP1三基因在人退變椎間盤髓核細胞的穩(wěn)定轉染，通過抑制細胞凋亡、增加細胞外基質的合成及抑制其降解，實現(xiàn)逆轉或延緩椎間盤退變的目的。方法構建SURVIVIN、TGFΒ3、TIMP1慢病毒載體，聯(lián)合轉染人退變髓核細胞，應用REALTIMEPCR技術檢測轉染后三基因的過表達情況，并檢測蛋白多糖和Ⅱ型膠原的MRNA表達量，應用WESTERNBLOT檢測蛋白多糖和Ⅱ型膠原的蛋白含量，應用CASPASE3活性檢測試劑盒檢測CASPASE3蛋白活性，應用ANNEXINⅤPI雙染色法檢測髓核細胞凋亡率。結果人退變髓核細胞穩(wěn)定轉染后，REALTIMEPCR結果顯示SURVIVIN、TGFΒ3、TIMP1三基因在基因水平均獲得穩(wěn)定過表達，且其表達能維持細胞傳至P3代或更長時間。目的病毒轉染組（A組）較空病毒轉染組（B組）、空白對照組（C組），蛋白多糖和Ⅱ型膠原MRNA表達量均無明顯差異，WESTERNBLOT示蛋白多糖和Ⅱ型膠原蛋白含量三組無明顯差異，CASPASE3蛋白吸光度及髓核細胞凋亡率三組亦無明顯差異。結論SURVIVIN、TGFΒ3、TIMP1慢病毒載體能夠穩(wěn)定轉染人退變椎間盤髓核細胞，并且能長時間維持其表達，發(fā)揮生物學效應，三基因對在體外培養(yǎng)的髓核細胞的細胞外基質的合成并無明顯的作用，對細胞凋亡亦無明顯抑制作用。在體外，通過SURVIVIN、TGFΒ3、TIMP1慢病毒載體轉染人退變髓核細胞并不能有效增加蛋白多糖和Ⅱ型膠原的含量，亦不能有效抑制髓核細胞凋亡。而在體內環(huán)境中，三基因聯(lián)合轉染的作用，仍需進一步研究。

簡介：分類號密級UDC編號學位論文MICRNA100抑制劑慢病毒表達載體的構建及其對BEAS2B細胞行為學的影響CONSTRUCTIONOFLENTIVIRALEXPRESSIONVECTWITHMICRNA100INHIBITITSEFFECTONTHECELLULARBEHAVIOFBEAS2B董偉指導教師姓名汪思應教授安徽醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院申請學位級別碩士專業(yè)名稱病理學與病理生理學提交論文日期201503論文答辯日期201505學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學答辯委員會主席評閱人2015年5月學位論文獨創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學位論文作者簽名日期學位論文使用授權聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定學校有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版和紙質版，有權允許論文進入學校圖書館被查閱，有權將學位論文的內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，有權將學位論文的標題和摘要匯編出版。愿意將本人的學位論文提交中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKI中國知識資源總庫，在中國博碩士學位論文評價數(shù)據(jù)庫中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。學位論文作者簽名導師簽名日期日期

簡介：點擊查看更多人肝細胞膜與乙型肝炎病毒相互作用蛋白篩選及其在HBV感染中的生物學意義研究.pdf精彩內容。

簡介：甲型流感病毒嚴重危害人類健康，由于其變異引發(fā)的大流行對人類造成嚴重威脅，近年來人感染禽流感病毒H5N1和甲型H1N1流感的流行，進一步提示加強甲型流感病毒的研究和控制的重要性。血凝素HA和神經氨酸酶NA是甲型流感病毒編碼的糖蛋白，變異性強，根據(jù)抗原性不同可進一步分為16個HA亞型H1～H16和9個NA亞型N1～N9。盡管HA和NA是流感病毒主要的免疫原，但由于HA和NA的變異性強，亞型眾多，而目前甲型流感病毒16個HA和9個NA不同亞型之間的免疫交叉關系尚未系統(tǒng)研究，對流感病毒亞型特異性免疫檢測技術的建立和疫苗的研發(fā)提出了嚴峻的考驗。為此，本研究對甲型流感病毒16個亞型的HA1和9個亞型NA的交叉反應性進行了研究，以期闡明其免疫反應特征，為甲型流感病毒免疫檢測技術和通用疫苗的研制提供可行性的理論依據(jù)。另一方面，近年來反向遺傳系統(tǒng)的發(fā)明為人工改造甲型流感病毒和研發(fā)疫苗提供了關鍵技術平臺，但現(xiàn)有系統(tǒng)的拯救效率有待提高，本研究擬通過對甲型流流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的轉錄表達載體的改建提高其拯救效率。一、甲型流感病毒HA和NA血清學交叉反應特征研究對本實驗選取的甲型流感病毒16個亞型的HA基因和9個亞型的NA基因的序列進行了分析，結果表明，16個HA和9個NA的核苷酸與氨基酸序列的進化樹都主要向兩個趨勢進化，16個HA核苷酸序列之間的同源率在28％～767之間，其氨基酸序列之間的同源率在362～785之間，9個NA亞型核苷酸序列之間的同源率在431～704之間，其氨基酸序列之間的同源率在379～666之間。盡管16個HA和9個NA基因的預測B細胞線性表位分布區(qū)域一致，但其具體表位組成卻存在差異，這些信息為進行各亞型之間的血清學交叉反應以及確定亞型特異性表位序列提供研究方向，進而為研究HA和NA的結構與功能、免疫識別、構建HA和NA的突變體以及選擇表達新型HA和NA分子、研發(fā)診斷和基因工程疫苗奠定了基礎。隨后將PCR擴增的經密碼子優(yōu)化的16個HA1和9個NA基因克隆到改建的GP67PFASTBAC1載體中，獲得了25個重組桿狀病毒。將重組桿狀病毒分別感染SF9細胞，分別收取上清和細胞用抗6HIS抗體進行WESTERNBLOT分析。結果表明，16個HA1和9個NA基因的表達產物分子質量分別約為525KD與716KD，與預期相符，并且16個HA1和9個NA基因還呈分泌性表達。其中H5HA1和H9HA1經NI柱純化后的純度達90左右，回收率分別為05和09。同時，將16個亞型的HA和9個亞型的NA基因克隆到5型重組腺病毒載體中，得到了25個重組腺病毒。分別將25個重組腺病毒通過滴鼻途徑免疫BALBC小鼠，制備了相應亞型的抗體，三次免疫后ELISA檢測陽轉率為100，ELISA檢測的抗體效價約為1∶6400左右。利用桿狀病毒系統(tǒng)表達的各個亞型的目的蛋白作為抗原，利用重組腺病毒免疫BALBC小鼠制備的血清作為抗體，通過ELISA方法確定16個HA亞型及9個NA亞型之間的血清學交叉反應關系。結果表明，HA1和NA各亞型之間的交叉反應關系錯綜復雜，H2、H5、H7亞型與其他亞型之間的交叉反應弱，而H6、H12、H16與其他亞型之間的交叉反應強。N1、N2亞型與其他亞型之間的交叉反應強，HA1和NA各亞型之間的交叉反應結果與其序列分析的結果存在一定的差異。二、甲型流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的優(yōu)化利用RTPCR的方法擴增了甲型流感病毒APR834H1N1毒株8個基因片斷，克隆入PⅣⅦ載體中，其中在PB1片段中引入了3個沉默突變標簽。將8個功能質粒共轉染293T和MDCK混合培養(yǎng)細胞，利用細胞病變、RTPCR、電鏡技術等證明該系統(tǒng)可成功拯救甲型流感病毒。為提高甲型流感病毒的拯救效率，用人工合成的SCPI啟動子1插入PⅣⅦ載體，構建出PⅣVS質粒，再將APR834H1N1的8個基因片斷克隆入PⅣVS載體中，把優(yōu)化后的8個功能質粒共轉染293T和MDCK混合細胞，在共轉染后的24H、48H、72H及96H分別收獲轉染細胞的上清和細胞，通過EGFP表達量、NP表達的時相變化以及血凝試驗鑒定兩個包裝系統(tǒng)的拯救效率。結果表明，優(yōu)化后系統(tǒng)不同時間點的EGFP表達量、NP表達量及血凝效價均高于未優(yōu)化系統(tǒng)，說明利用高強度的SCPI啟動子可有效提高甲型流感病毒的包裝效率，為改進甲型流感病毒疫苗的研發(fā)系統(tǒng)奠定了基礎。