簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下I由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。一吼七翩虢耀二孑了篡擎I；|；河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負?！??？ㄐ逻ㄗ曖礏、1耳L；H白口中文摘要1英文摘要O00OO00OO0OOOOOOOOOOOOO00OOO0OOIOOOO000000OOO003研究論文河北省嬰幼兒病毒性腹瀉的病原學研究前言6日IJ吾””””””””一一一“”一””“““一一一““一”一“””一一。O材料與方法OOIO07結(jié)果OOOOOOOOOOOOOOO14附圖000000000OOOOODOOOO18附表OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO20討論0O0OOAGMOOO0OOOO24結(jié)論OOOOOOOOOOOOOOOOO27參考文獻OOOOOOOO000027綜述嬰幼兒病毒性腹瀉研究進展OOOO30致謝OOOOOOOOOOOO0000000OOOOOOOO37個人簡歷OOOOOOOO38

簡介：乙型肝炎病毒具有傳染性強、傳播途徑復雜、流行面廣泛、治療困難等特點人體感染后?？蓪е录薄⒙砸倚筒《拘愿窝撞⑶以S多人成為無癥狀的乙肝病毒攜帶者長期的慢性感染甚至可導致肝硬化和肝細胞癌中國是乙型病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)乙肝病毒攜帶者高達10％以上二十年來的防治工作仍然未能得到很好控制我們在多年的婚前醫(yī)學檢查中篩查出許多乙肝表面抗原陽性的欲婚青年傳染性很強的乙肝大三陽HBSAG、HBEAG、抗HBC陽性、和雙陽HBSAG、HBEAG陽性也很常見如何采取措施以阻斷他們結(jié)婚后的相互傳染及減少對后代的影響且不影響他們的結(jié)構(gòu)和生育這一問題成為婚前醫(yī)學檢查工作者爭論的焦點國內(nèi)外許多研究均證實了進行乙肝疫苗接種或和注射乙肝高效價免疫球蛋白HBIG對于阻斷乙肝病毒的母嬰垂直傳播是有效的但采用乙肝疫苗或和聯(lián)合注射HBIG對于阻斷乙型肝炎病毒的配偶間傳播是否有效國內(nèi)尚未見報道該次研究采用實驗流行病學方法對進行乙肝疫苗接種或和聯(lián)合注射HBIG阻斷乙型肝炎病毒在配偶間傳播的效果進行評價并對單獨乙肝疫苗接種和聯(lián)合注射HBIG的不同方案間的效果進行比較

簡介：目的合成適合畢赤酵母表達的乙型肝炎病毒HBVE抗原基因，在畢赤酵母中表達出高特異性和高免疫反應性的重組乙型肝炎病毒E抗原HBEAG。方法采用聚合酶鏈反應從含HBV全基因序列ADW的質(zhì)粒PHBV1中擴增出野生型E基因，在兩個不同的位點定向插入酵母表達載體PPICZΑA，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZΑAEAG；采取基因搭橋法及TAQ酶聚合反應，選用酵母偏愛的同義密碼子替換野生型E基因的部分密碼子，制備合成E基因SYNEAG基因，在兩個不同的位點定向插入PPICZΑA酵母表達載體，構(gòu)建兩種重組質(zhì)粒CZΑASYNEAG；SACI消化重組質(zhì)粒，用電轉(zhuǎn)法將線性化的攜帶有野生型和合成E基因的四種重組PPICZΑA分別轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115，，篩選HISMUTS表型轉(zhuǎn)化子，經(jīng)甲醇誘導表達HBEAG。結(jié)果酶切電泳及DNA測序證實野生型及合成E基因已正確克隆到表達載體中；聚丙烯酰胺凝膠電泳及ELISA顯示HBEAG在畢赤酵母中分泌表達，含CZΑASYNEAG的酵母重組子表達量最高，約為63MGL，培養(yǎng)上清ELISA測定效價1∶81920，最大吸光度值達28；重組HBEAG與乙型肝炎病毒核心抗體間無結(jié)合反應。結(jié)論成功合成了適合畢赤酵母表達系統(tǒng)表達的HBVE基因及構(gòu)建了PPICZΑASYNEAG重組質(zhì)粒，畢赤酵母表達系統(tǒng)高效分泌表達出與乙型肝炎病毒核心抗原間無交叉抗原性、具有良好免疫反應性的HBEAG。

簡介：遵義醫(yī)學院碩士學位論文兒童病毒性腦炎常見病原學及臨床研究遵義醫(yī)學院碩士研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。學位論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻均已在學位論文中作了明確的說明并表示了謝古巴恩。學位論文作者簽名簽字日期年月日遵義醫(yī)學院學位論文版權使用授權書本人完全了解遵義醫(yī)學院有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即遵義醫(yī)學院有權保留并向有關部門或機構(gòu)送交學位論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權遵義醫(yī)學院可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存學位論文，即遵義醫(yī)學院具有學位論文的數(shù)字化制品復制權，信息網(wǎng)絡傳播權和匯編權。保密的學位論文在解密后適用本授權書。學位論文作者簽名導師簽名簽字日期年月日簽字日期年月日遵義醫(yī)T?％碩十學位論文兒童病毒性腦炎常見病原學及臨床研究縮略語英文全稱BPBASEPAIRCOXVCOXSACKIVIRUS中英文縮略詞表CSFCEREBROSPINALFLUIDECHOVECHOVIRUSELISAENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYEVVIRALENCEPHALITISEVSJEVHRPHSVODPCRRPMENTEROVIRUSJAPANESEBENCEPHALITISVIRUSHORSERADISHPEROXIDASEHERPESSIMPLEXVIRUSOPTICALDENSITYPOLYMERASECHAINREACTIONROUNDSPERMINUTERTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR中文全稱堿基對柯薩奇病毒腦脊液艾柯病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗病毒性腦炎腸道病毒流行性乙型腦炎病毒辣根過氧化物酶單純皰疹病毒光密度聚合酶鏈反應每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應

簡介：隨著以拉米夫定為代表的新一代核苷類似物在中國慢性乙型肝炎患者中的廣泛應用核苷類似物耐藥成為目前臨床關注的焦點問題我們采用本室先前建立的RFLP方法篩檢YMDD變異并將其應用于臨床監(jiān)測拉米夫定治療過程中耐藥性的產(chǎn)生取得了較好的效果由于RFLP的局限性我們對篩檢YMDD變異陽性的標本進行了P基因測序以進一步了解拉米夫定耐藥株的P基因AE區(qū)序列特點該研究中還有2例患者中分別因為P基因RTD83N和RTM204I變異導致HBSAG的表達提前出現(xiàn)終止但患者仍表現(xiàn)為HBSAG陽性說明在患者中這種提前終止的變異株均與野毒株同時存在為進一步研究變異毒株的生物學意義我們通過定向點突變成功的在模板P38Ⅱ的基礎上構(gòu)建了五種P基因變異株并在此基礎上將包含不同突變點的全基因質(zhì)粒通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染HEPG2細胞通過轉(zhuǎn)染細胞上清的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)五種不同的P基因變異株均可表達并分泌HBSAG和HBEAG證明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在細胞內(nèi)可正常表達和分泌但五種變異株與野株相比SN值相差不多說明這五種P基因變異對S基因表達的抗原并無明顯影響

簡介：點擊查看更多力竭性運動對病毒性心肌炎小鼠的影響及蛋白質(zhì)組學研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：華東師范大學碩士學位論文亞甲藍光化學法滅活血漿中丙型肝炎病毒的分子生物學機理姓名倪小菊申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師錢開誠20070501華東師范大學2007屆碩士論文亞甲藍光化學法滅活血漿中丙型肝炎病毒的分子生物學機理院系生金型堂堂睦專業(yè)生塑絲堂皇坌王生絲堂方向岔王魚瘞堂研究生埕塵蘊指導老師毯玨遮班究屋摘要輸血是現(xiàn)代醫(yī)學不可或缺的重要支撐手段，但輸血也存在一定的風險，特別是經(jīng)輸血傳播HIV、HBV、HCV等病毒感染的風險。輸血相關病毒感染因其涉及面廣且預后不良，具有較大的社會負面影響?？朔《拘暂斞L險，保障輸血安全已成為醫(yī)學界乃至全社會關注的焦點。由于血液制品病毒標記物檢測在方法學上的局限性以及病毒窗口期的存在，目前還不能萬無一失地剔除攜帶病毒的血液或血液成分制品，因此僅依賴血液篩查的手段不能完全杜絕通過輸血傳播病毒的風險。以阻斷病毒通過輸血途徑傳播為目的的血液成分病毒滅活技術被認為是提高輸血安全性的一道重要的屏障。對血液成分病毒滅活方法及其機理的研究是輸血醫(yī)學研究的熱點之一。亞甲藍光化學方法METHYLENEBLUEPHOTOCHEMISTRYMBP目前己成功應用于臨床用單袋血漿的病毒滅活，其有效性和安全性已被充分驗證，但該方法滅活病毒的分子生物學機理尚不十分明了，與此有關的研究還在繼續(xù)深入之中。闡明亞甲藍光化學法病毒滅活的機理將有助方法學的改進，并為其它病原體滅活方法的研究提供理論參照。本研究選擇丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRL腮，HCV作為MBP病毒滅活機理研究的實驗對象，主要是因為HCV是我國輸血后感染的最主要病原體之一，在影響輸血安全的諸因素中占有較大的權重，且該病毒的感染活性目前尚無法用體

簡介：目的人偏肺病毒是一種廣泛流行于世界各地的重要呼吸道感染病原體。了解本地區(qū)人偏肺病毒的感染現(xiàn)狀、流行特征和分型將有助于相關呼吸道感染的防控并為臨床治療、檢測試劑開發(fā)和疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。本研究的目的是對武漢地區(qū)的門診流感樣病例患者進行人偏肺病毒的檢測和分子流行病學調(diào)查了解本地各年齡階段人群的感染現(xiàn)狀及病毒流行規(guī)律。方法2008年7月至2011年12月武漢市兒童醫(yī)院和武漢市一醫(yī)院門診共收集到4009例符合納入標準的流感樣病例患者。使用實時熒光RTPCR方法檢測患者咽拭標本中的人偏肺病毒RNA使用RTPCR方法對人偏肺病毒陽性樣本的部分N基因和F基因片段進行擴增和測序測序結(jié)果用于基因分型和系統(tǒng)發(fā)生分析。此外結(jié)合患者信息對武漢地區(qū)的人偏肺病毒感染人群時間分布進行統(tǒng)計分析。結(jié)果在4009份流感樣病例標本中共發(fā)現(xiàn)117例人偏肺病毒RNA陽性標本檢出率為292％其中15例還存在其它呼吸道病毒感染混合感染率為128。各年齡組患者中以5歲及以下兒童的人偏肺病毒感染率最高534615歲兒童和1664歲成人的感染率分別為082和031?例65歲以上老年流感樣病例患者中未檢出人偏肺病毒陽性。研究期間武漢地區(qū)的人偏肺病毒感染表現(xiàn)出以兩年為周期的季節(jié)分布模式在08年10月至09年3月以及2010年3至6月兩次達到流行高峰高峰期人偏肺病毒檢出率分別為1944和2476。117份陽性樣本中的102份分型成功其中36份為A2亞型308、41份為B1亞型350、25份為B2亞型214。本研究未發(fā)現(xiàn)A1亞型且所有A2亞型陽性樣本均屬于A2B群。A型和B型人偏肺病毒同時流行于研究過程中的各個年度但每個流行季節(jié)只有一型占據(jù)優(yōu)勢0809年度的優(yōu)勢型是A型而0910、1011以及11年下半年的優(yōu)勢型為B型其間發(fā)生了一次優(yōu)勢轉(zhuǎn)換。系統(tǒng)發(fā)生分析證明武漢地區(qū)流行的人偏肺病毒毒株與參考毒株在進化上十分接近但武漢流行株也表現(xiàn)出了基因變異和遺傳分化的跡象。結(jié)論本研究是國內(nèi)首次對一個地區(qū)的全年齡段人群進行為期1年以上的大型人偏肺病毒流行病學調(diào)查。研究證明人偏肺病毒是引起武漢地區(qū)兒童急性呼吸道感染的一個重要病因且在成人中也有傳播本地人偏肺病毒感染的高發(fā)人群是5歲以下兒童A型和B型人偏肺病毒在武漢地區(qū)同時流行優(yōu)勢相互交替。我們的研究結(jié)果對本地區(qū)人偏肺病毒感染的預防和治療具有積極的指導意義。

簡介：點擊查看更多加味宣肺透解劑抗小鼠流感病毒肺炎的藥效及免疫學機制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙肝病毒（HBV）感染造成的終末期肝病或暴發(fā)性肝炎預后極差肝移植通常是唯一有效的治療方法但術后乙肝病毒再感染嚴重影響了患者的長期生存率目的探討病毒學因素對原位肝移植（OLT）后乙肝病毒再感染的影響（包括術前病毒含量、HBVS基因變異）方法以熒光定量方法檢測11例因乙肝相關性終末期肝病行肝移植治療的患者術前血清的乙肝病毒含量并比較三組病毒水平以套式PCR方法檢測11例肝移植患者術前、術后血清及15例慢性乙肝患者血清的HBVDNA并測序選擇肝移植患者存在A決定簇變異的陽性片段進行克隆后測序比較再感染組術前、術后乙肝病毒序列及各組病毒基因間的差異并以GOLDKEY軟件分析各變異點對抗原決定簇分布的影響結(jié)論術前HBV復制與否及復制水平是影響術后乙肝病毒再感染的因素之一該研究中絕大多數(shù)患者來自中國北方地區(qū)序列測定結(jié)果符合ADR亞型的地區(qū)分布特征部分變異病毒株可以明顯改變A決定簇構(gòu)象在抗HBS存在不仍能造成術后HBV再感染即出現(xiàn)“抗體逃逸現(xiàn)象”HBIG造成的免疫壓力對病毒變異具有篩選和促進作用HBVS基因區(qū)變異可干擾聚合酶序列但未累及其高保守區(qū)（YMDD基序）也許對抗病毒藥物（如拉料呋啶）的敏感性無影響但P區(qū)終止密碼子突變可能會影響病毒復制能力MHR區(qū)外散在分布的變異尤其LEU213ILE變異可能在乙肝慢性感染過程中具有一定意義

簡介：點擊查看更多衣殼蛋白基因突變對登革病毒生物學性質(zhì)的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南方醫(yī)科大學博士學位論文腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對結(jié)腸癌細胞LOVO的生物學特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索姓名馬強申請學位級別博士專業(yè)免疫學指導教師李明20090410中文摘要安全性沒有很好解決，如對導入基因的控制、外緣基因及基因載體本身整合到宿主染色體帶來的一系列問題等；②用于大腸癌理想載體的選擇應具有安全性、高效性、靶向性、大容量性和可控性等特點，目前還難以找到可運用到理想的臨床要求載體③缺乏足夠的基因治療靶序列，大腸癌的發(fā)生是一種多基因水平調(diào)控的失控所致單獨基因治療效果差。由此進一步深入研究大腸癌的發(fā)病機制，尋找確定更多更有效的治療靶基因，制備安全高效的基因治療載體是大腸癌基因治療中迫切需要解決的問題。本文第一部分著重研究腫瘤翻譯調(diào)控蛋白TCTP對高轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細胞株的細胞生物學影響以及相關信號傳導通路的研究。第二部分著重研究新型基因治療用慢病毒載體生產(chǎn)體系的改進和優(yōu)化。第一部分通過構(gòu)建靶向TCTP基因的SHRNA質(zhì)粒表達載體，下調(diào)TCTP在LOVO細胞中的表達。通過CCK一8實驗檢測LOVO細胞的增殖速度，粘附實驗檢測LOVO細胞對ECM的粘附能力，趨化實驗和劃痕實驗檢測LOVO細胞的運動能力，侵襲實驗檢澳LJLOVO細胞對于ECM的分解穿透能力，EMSA以及熒光素酶實驗檢I貝OTCTP下調(diào)后對于NFRB活性的影響。通過成瘤實驗檢測TCTP下調(diào)對于LOVO細胞成瘤能力的影響，轉(zhuǎn)移模型實驗檢測LOVO細胞體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移能力的影響，通過2D電泳和質(zhì)譜分析鑒定與TCTP相關蛋白，并初步評價TCTP在正常人以及病人血清中的含量。構(gòu)建SHRNA質(zhì)粒表達載體，質(zhì)粒酶切以及測序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。下調(diào)TCTP在LOVO細胞中的表達，經(jīng)熒光顯微鏡觀察各組LOVO細胞均出現(xiàn)綠色報告熒光，RT。PCR，WESTERNBLOTTING，QRTPCR分析鑒定TCTP的表達下調(diào)分別達至T82％、89％、73％。TCTP下調(diào)能夠體外減慢LOVO細胞的增殖速度，SHRNATCTP，SHRNATCTPLOVOPARENTAL組分別鋪96孔板，每孔細胞數(shù)2000個。每株細胞5個復孔，鋪7塊板，連續(xù)測量7天。從第4天開始，SHRNATCTP組生長速度明顯慢于SHNCRNATCTP組和NC組，經(jīng)過統(tǒng)計學分析后，SL刪ATCTP組在測量第1F1773P005、2F0048，P005、3F7865P005天時，11

簡介：2002年西藏地區(qū)乙型肝炎病毒HBVHEPATITISB基因型分布的研究首次報道了S區(qū)同源性分析屬于D基因型而C區(qū)同源性分析為C基因型的毒株。隨后他們對這種毒株進行了HBV全基因序列擴增和測序在對全基因序列的家系進化和重組分析中發(fā)現(xiàn)這種S區(qū)與C區(qū)分型不一致的毒株是C型HBV在NT511450區(qū)段重組了D基因型而出現(xiàn)的結(jié)果并推測這種特殊的HBVCD重組體是西藏地區(qū)流行的HBV優(yōu)勢毒株。隨后我室在對全國進行HBVC基因亞型調(diào)查時發(fā)現(xiàn)在甘肅臨夏地區(qū)回族人群中亦有HBVCD的存在。與前述報道不同的是我們首次發(fā)現(xiàn)了在S區(qū)NT10799重組了D基因型的HBVCD重組體其中D基因型占整個HBV基因組的25％只有少數(shù)是與前述西藏地區(qū)相同的HBVCD重組體這種重組體的D基因型占整個HBV基因組的46％。在對兩種重組體進行全基因組擴增測序并進行進化樹分析以后我們發(fā)現(xiàn)以全基因組構(gòu)建的進化樹中這兩種重組體屬于HBVC基因型的大分支但構(gòu)成了與C1C5亞型不同的兩個分支因此也可以將其命名為C6和C7亞型。由此我們將重組區(qū)段較短的HBVCD重組體稱為HBVCD1C6亞型而將重組區(qū)段較長的HBVCD重組體稱為HBVCD2C7亞型。為了解HBVCD1和HBVCD2這兩種重組體的特征我們首先調(diào)查了HBVCD重組體在西北五省不同地區(qū)和不同民族中的分布。采用聚合酶鏈反應一限制性片斷長度多態(tài)性PCRRFLP法對來自西北五省份的1000例慢性HBV感染者血清進行了HBV基因分型同時對部分CD重組體標本進行了全基因序列擴增和測序。在西北五省中西藏地區(qū)和青海省的HBV主要流行株為CD重組體HBVCD的感染占到整個HBV感染的64％和55％；甘肅和寧夏兩省的少數(shù)民族地區(qū)則以C型為主要流行株CD重組體是流行率位于第二位的毒株在兩省的流行率分別為27％和15％；新疆地區(qū)維族人群以D基因型和C基因型為主要流行株HBVCD重組體僅占4％。HBVCD重組體的分布在不同省份差異有顯著性X22966P0000。在調(diào)查的漢、藏、回、維吾爾四個民族中HBVCD重組體是藏族人群中的優(yōu)勢基因型占HBV總感染人群的65％；在回族人群中占30％；在西北地區(qū)藏族和回族聚居地及聚居地附近的漢族人群中占21％；在新疆維吾爾族人群的HBV感染中僅占4％。各民族之間的基因型分布差異有顯著性X21188P0000。HBVCD在西藏青海甘肅各地區(qū)不同民族間的分布差異有顯著性西藏地區(qū)漢族為10％藏族為79％X283156P0000；青海漢族33％、藏族67％、回族50％X242043P0000甘肅漢族13％、藏族31％、回族61％X254409P0000；在寧夏回族15％和甘肅回族61％人群中的流行率差異有顯著性X236555P0000。HBVCD1和HBVCD2的分布在西藏和青海不同地區(qū)差異有顯著性X291921P0000。因此認為HBVCD重組體在西北五省不同地區(qū)和不同民族中的分布有特殊的規(guī)律。為進一步了解HBVCD重組體與我國西北地區(qū)流行的其他基因型在臨床和病毒學特征上是否有差別。我們設計了臨床對照實驗比較了HBVCD重組體與西北地區(qū)其它常見基因型B、C、和D在臨床特征方面的差異。同時我們還調(diào)查了C和CD重組體兩種基因型毒株在前C和C區(qū)常見變異位點發(fā)生變異模式的差別。我們對來自西北五個臨床中心的507份慢性HBV感染者標本的臨床資料和HBV基因分型結(jié)果進行了統(tǒng)計學對比分析同時隨機選取以上臨床中心的標本中CD重組體和C基因型共356份慢性HBV感染者血清標本進行了前C及C基因區(qū)的序列擴增和分析。結(jié)果顯示四組基因型病例在年齡和性別構(gòu)成比無差異的情況下各基因型間ALT水平無統(tǒng)計學差異；TBIL水平在各組之間差異有顯著性F3555P0014其中CD重組體的TBIL水平最低平均值為193±287而B基因型的TBIL水平最高平均值為463±719。HBEAG陽性率在各組之間差別也有顯著性X230422P0000其中只有CD重組體的HBEAG陽性數(shù)大于陰性數(shù)而其它基因型均為HBEAG陰性數(shù)大于陽性數(shù)。HBVC和CD重組體兩種基因型在前C及C區(qū)常見變異位點發(fā)生變異的模式上前C區(qū)A1896位點的變異PC變異在兩種基因型之間的差異存在顯著性X29525P0002其中CD重組體PC變異的頻率低于基因型C；同時核心啟動子BCP雙變異在兩種基因型間差異也存在顯著性X25466P0019其中C基因型BCP變異的頻率低于CD重組體。提示HBVCD重組體有不同于西北地區(qū)流行的其它基因型毒株的臨床和病毒學特征。為進一步探討HBVCD重組體是否由HBVC基因型和HBVD基因型的共同感染和隨后的重組產(chǎn)生并探明HBVCD重組體的變異速率。我們收集了三個存在不同HBV基因型混合感染的家庭和一個單純感染了HBVCD重組體的家庭。對四個家庭各成員的HBV全基因或部分序列進行了克隆和分析并對測序結(jié)果進行了異質(zhì)性分析和構(gòu)建進化樹。結(jié)果我們應用三代成員均有HBVCD重組體感染的序列計算出HBVCD重組體的變異率為35105每位點每年。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)有不同基因型混合感染者的個體中分離的準種序列在不同基因型間的序列異質(zhì)性較小而在同種基因型間的序列異質(zhì)性較大。在采用準種異質(zhì)性最大的個體NT641200所構(gòu)建的進化樹中我們看到基因型C2和CD重組體之間沒有明顯的界限而且可看到從基因型C到CD重組體的漸變演化過程。這可能提示HBVCD重組體并非基因型C和基因型D之間重組產(chǎn)生的產(chǎn)物而只是與基因型C異質(zhì)性較大的準種株在某些個體中這種準種因為更適合于宿主而被選擇成為優(yōu)勢株。為了解HBVCD重組體和基因型C、基因型D在體外的復制特性差別我們構(gòu)建了HBVCD重組體和基因型C、基因型D的13拷貝HBV并通過瞬時轉(zhuǎn)染肝癌細胞系HEPG2來研究HBV的復制及蛋白表達情況。我們構(gòu)建了2株HBVC基因型、2株HBVD基因型和3株HBVCD重組體毒株的13拷貝HBV序列將13拷貝HBV全基因序列與PUC19質(zhì)粒相連。經(jīng)測序證實插入序列的正確性后提取質(zhì)粒用脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染HEPG2細胞并對轉(zhuǎn)染后72小時的細胞培養(yǎng)上清和細胞中的HBSAG和HBEAG分別進行了定量檢測。結(jié)果證明轉(zhuǎn)染的13拷貝HBV能夠在HEPG2細胞中進行轉(zhuǎn)錄和翻譯在細胞培養(yǎng)上清和細胞內(nèi)均可測到HBSAG和HBEAG為研究CD重組體與基因型C和基因型D在體外的復制差別搭建了平臺。

簡介：第二軍醫(yī)大學碩士學位論文乙型肝炎病毒相關肝癌的比較蛋白質(zhì)組學研究姓名范薇薇申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師王紅陽20050401第二軍醫(yī)大學縮略詞表碩士學位論文縮略詞表HBVHEPATITISBVJRUS乙型肝炎病毒HCCH印ATOCELLLLLARCARCMOMA肝細胞癌2DETWODIMENSIONGELELECTROPHORESIS一維凝膠電泳}毋XHEPATITI8BVIRUSXPROTEIN乙型肝炎X蛋白AFPⅡ一FETOPROTEIL3甲胎蛋白GFPGREENF1UOROSCENTPROTEIN綠色熒光蛋白CPECYTOPATHICEFFECT細胞病變效應MOIMULTIPLICITY0FINFECTION感染復數(shù)ICAT1SOTOPECODEDAFFINITYTAG同位素標記親和定量技術IAAIODOACETAMIDE碘乙酰胺HNRNPKHETEROGENEOUSNUCLEARRIBONUCLEOPROTEINK異種核糖核蛋白體KFBSFETABOYIFIESERUM胎牛血清PAGEPOLYACYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PCRPOLYMERASECHAINREACTIOIL聚合酶聯(lián)反應PMSFPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORDE苯甲基磺酰氟

簡介：研究生導師及課題組成員簡介導師S王郡甫男，1965年11月出生，醫(yī)學免疫學博士，研究員，碩士生導師。主要從事基因工程，腫瘤免疫學等方向研究。課題指導小組其他成員；許曉群男，1975年6月出生，碩士，副研究員，主要從事分子免疫學方面的研究。張建華女，1953年8月出生，副主任技師，主要從事細胞生物學方面的研究。目錄摘要IIABSTRACTⅣ符號說明VII前言1正文3第一部分人IL24的EDNA獲取及克隆載體的構(gòu)建31實驗材料和儀器311主要實驗材料312主要儀器設備一713主要實驗方法82實驗結(jié)果133第一部分附錄圖表15第二部分PADMDA7／IL24腺病毒表達載體的構(gòu)建L81實驗材料與方法1811主要實驗材料L812主要儀器設備2113主要實驗方法222實驗結(jié)果303第二部分附錄圖表3L第三部分ADMDA一7／IL24腺病毒感染喉癌細胞HEP2及對HEP2的生物學影響351實驗材料與方法3511主要實驗材料3512主要儀器設備3713主要實驗方法382實驗結(jié)果4L3第三部分附錄圖表42討論“44，J、結(jié)48參考文獻49文獻綜述52攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文6L虱【謝62