活化激酶C1受體在切應力調(diào)控血管重建中的作用機制研究.pdf

1、研究表明，血流切應力變化是影響血管重建的重要因素，與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展密切相關。血管內(nèi)皮細胞(endothelial cells，ECs)直接承載血流切應力刺激，并通過細胞間相互作用影響血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）。研究ECs與VSMCs間的相互交流，以及切應力下的細胞功能變化，有助于闡明血管重建的力學生物學機制。
　　我們通過前期蛋白質(zhì)組學的工作，得到了15 dyn

2、/cm2正常切應力（normal shear stress，NSS）和5 dyn/cm2低切應力（low shear stress，LowSS）條件下體外培養(yǎng)的血管組織差異表達的蛋白質(zhì)譜。對比發(fā)現(xiàn)，活化激酶C1受體（receptor for activated C kinase1，RACK1）在LowSS作用下的血管組織中呈高表達，提示 RACK1可能參與了LowSS誘導的血管重建。
　　本文應用ECs/VSMCs聯(lián)合的培養(yǎng)流動腔

3、系統(tǒng)，檢測靜態(tài)（static）、NSS和LowSS條件下聯(lián)合培養(yǎng)大鼠ECs和VSMCs表達RACK1及Akt磷酸化水平。同時，為探討應力調(diào)控的上述變化是通過 ECs與VSMCs的直接接觸或是通過旁分泌作用，本文設計了ECs//VSMCs隔開培養(yǎng)的體系，同樣檢測靜態(tài)、NSS和LowSS條件下ECs和VSMCs的RACK1表達狀況及Akt磷酸化水平。此外，本文還在靜態(tài)條件下，應用RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術特

4、異性抑制VSMCs內(nèi)RACK1表達，探討RACK1對細胞凋亡和Akt磷酸化水平的作用。
　　結果顯示：①切應力與VSMCs對ECs的RACK1表達均無顯著影響；② LowSS與細胞直接接觸共同誘導VSMCs表達RACK1，NSS、LowSS與旁分泌共同阻遏VSMCs表達RACK1；③ NSS和LowSS都可能抑制ECs的Akt磷酸化；④旁分泌參與NSS對VSMCs的Akt磷酸化的促進作用；⑤抑制VSMCs的RACK1表達下調(diào)細胞凋

5、亡和caspase-3表達，上調(diào)Akt磷酸化。
　　上述結果表明，LowSS條件下，ECs通過直接接觸作用誘導VSMCs的RACK1表達；切應力對ECs與VSMCs的Akt磷酸化水平的誘導作用不同，NSS和LowSS均抑制ECs的Akt磷酸化，但NSS的抑制作用更強，而NSS則促進VSMCs的Akt磷酸化；RACK1可能通過PI3K/Akt信號通路參與切應力對細胞凋亡的調(diào)控。結果提示，ECs與VSMCs之間的相互接觸和聯(lián)系，對維持