血小板內皮聚集受體1調控血小板及血管功能的機制研究.pdf

1、血小板內皮聚集受體1（Platelet Endothelial Aggregation Receptor1，PEAR1，亦稱為MEGF12或JEDI）屬于多表皮生長因子樣結構域家族的跨膜蛋白，主要表達于血小板及內皮細胞。研究認為，PEAR1是血小板與血小板間相互接觸的受體蛋白，在血小板的活化聚集過程中起著重要作用。
　　血管內皮細胞在維持血管健康穩(wěn)態(tài)及損失修復中起重要作用。血小板作為血管內皮損傷的直接效應細胞，在內皮相關的生理病理

2、功能中發(fā)揮重要作用。臨床研究認為，PEAR1的多個SNP位點與血小板功能及血管功能密切相關。本研究對PEAR1在血小板及內皮細胞中的功能及作用機制進行研究。
　　對PEAR1在血小板中的定位檢測顯示，當血小板被活化后，PEAR1在膜上的表達明顯上升。PEAR1的抗胞外結構域抗體可作為活化配體對血小板進行活化。進一步檢測發(fā)現(xiàn)，PEAR1可能通過ITAM信號途徑引起血小板活化。為探尋PEAR1在血小板上的配體，以純化的PEAR1-EM

3、I結構域蛋白對血小板裂解液進行免疫沉淀，質譜分析結果顯示，PEAR1與血小板的GPIb、ɑIIbβ3、p-selectin均有結合。另外，為了研究PEAR1在血小板中的功能，我們通過CRISPR/Cas9 gene targeting技術構建了PEAR1基因敲除小鼠，對PEAR1基因敲除小鼠的血小板進行血小板功能分析發(fā)現(xiàn)該小鼠的血小板對低濃度膠原及凝血酶刺激的血小板聚集反應降低，而對血小板的血塊收縮及纖維蛋白原上的鋪展影響較弱。提示PE

4、AR1可能影響血小板上GPVI受體及TP受體功能，而對ɑIIbβ3介導的外向內信號無影響。
　　PEAR1不僅表達于血小板，在內皮細胞亦有表達。我們發(fā)現(xiàn)在一般貼壁培養(yǎng)條件下，PEAR1在人臍靜脈內皮細胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）的細胞膜和核內都有定位，而當HUVEC在基質膠上培養(yǎng)形成血管樣結構時，PEAR1主要定位于細胞膜上。進一步檢測發(fā)現(xiàn)，PEAR1抗體可完全抑制

5、HUVEC細胞的成管性，但對HUVEC細胞的增殖能力并沒有影響。而當血小板與 HUVEC共孵育并將HUVEC在基質膠上培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，血小板同樣能抑制 HUVEC細胞的成管能力。而純化的PEAR1 EMI結構域多肽能逆轉血小板抑制HUVEC細胞成管的能力。提示PEAR1的EMI結構域是PEAR1與血小板上PEAR1配體相互作用的主要結構。以PEAR1抗體處理HUVEC細胞進行劃痕試驗，結果顯示 PEAR1并不影響細胞的遷移能力。因此我們認為