Rab28在高血壓血管重建中的作用及其相關(guān)分子機制.pdf

1、周期性張應變在血管重建調(diào)控中發(fā)揮重要作用,異常增高的張應變是高血壓等相關(guān)血管疾病的重要誘因。在組成血管的成分細胞中,血管平滑肌細胞(VSMCs)主要承載周向張應變的作用。因此研究不同張應變狀態(tài)下VSMCs功能的變化,對于深入了解心血管疾病血管重建發(fā)病機制具有重要的理論和臨床意義。
　　實驗室前期系列研究結(jié)果表明,Rab28是一種力學敏感分子,其在血管組織和細胞中的表達受到切應力及張應變的調(diào)控;同時發(fā)現(xiàn)Rab28與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB

2、、FOXO4在ECs中具有共定位現(xiàn)象,提示Rab28可能協(xié)助這些分子的核漿運輸過程。然而,Rab28在高張應變誘導血管重建過程中的作用目前仍不清楚。
　　本研究首先應用高血壓模型大鼠,檢測在體條件下血管組織Rab28、FOXO4、FOXO1以及phospho-FOXO1的表達與分布情況,并檢測反應VSMCs表型的分化指標蛋白a-actin、S M22 a、calponin的表達。為了探討異常增高的張應變在高血壓血管重建中的作用,我

3、們應用FX-4000T體外周期性張應變加載系統(tǒng),分別對VSMCs施加5％的生理性張應變和15%的高血壓病理性張應變,以0%張應變作為靜止對照,頻率均為1.25 Hz,檢測Rab28、FOXO4、FOXO1、phospho-FOXO1以及VSMCs的分化與增殖。應用RNAi技術(shù)特異性抑制VSMCs的FOXO1表達,探討FOXO1及其磷酸化在VSMCs的增殖、分化中的功能及分子調(diào)控機制。
　　結(jié)果顯示:(1)腹主動脈縮窄術(shù)后2w和4w

4、,高血壓模型大鼠頸總動脈收縮壓較假手術(shù)對照組明顯升高,模型構(gòu)建成功;(2)與假手術(shù)組比較,高血壓模型大鼠胸主動脈組織中Rab28、F O X O4、F O X O1及phospho-FOXO1表達明顯上升,同時分化指標分子的表達升高;(3)體外細胞實驗表明,與0%靜止組和5%張應變組相比,牽拉24 h后15%高張應變促進Rab28、F O X O1及phospho-FOXOl表達,但對FOXO4表達無顯著性影響,同時高張應變促進VSMC

5、s增殖,抑制分化;(4) RNAi抑制FOXOl后,phospho-FOXOl表達水平明顯降低,VSMCs增殖和分化均降低;(5)細胞免疫熒光染色顯示,當靜止、饑餓狀態(tài)下,VSMCs內(nèi)Rab28主要分布在細胞漿中,血清刺激后,Rab28則大部分都分布在細胞核中,表明刺激誘導的Rab28在V S M C s中的核漿轉(zhuǎn)位可能與其功能相關(guān)。
　　本實驗結(jié)果表明,高血壓病理狀態(tài)下,異常增高的周向張應變可能通過誘導Rab28、FOXO1及p