低切應(yīng)力誘導(dǎo)血管細(xì)胞活化激酶C受體1的表達(dá)及其意義.pdf

1、血管重建（remodeling）是心血管疾病共有的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過(guò)程。血流切應(yīng)力變化是影響血管重建的重要因素，與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells, ECs)直接承載血流切應(yīng)力刺激，并通過(guò)細(xì)胞間相互作用影響血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）。研究ECs與VSMCs間的相互交流，以及切應(yīng)力下的細(xì)胞功能變化，有助于闡明血管重建的力學(xué)生物

2、學(xué)機(jī)制。
　　我們通過(guò)前期蛋白質(zhì)組學(xué)的工作，得到了正常切應(yīng)力（normal shear stress, NSS,15 dyn/cm2）和低切應(yīng)力（low shear stress，LowSS，5 dyn/cm2）條件下體外培養(yǎng)24 h的血管組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)譜。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，活化激酶 C受體1（receptor for activated C kinase1, RACK1）在低切應(yīng)力作用下的血管組織中呈高表達(dá)，提示 RACK1可能參

3、與了LowSS誘導(dǎo)的血管重建。
　　本文應(yīng)用ECs/VSMCs聯(lián)合培養(yǎng)流動(dòng)腔系統(tǒng)，獲得靜態(tài)（static）、NSS和LowSS條件下聯(lián)合培養(yǎng)大鼠ECs和VSMCs表達(dá)RACK1及Akt磷酸化水平。同時(shí)，為探討應(yīng)力調(diào)控的上述變化是通過(guò)ECs與VSMCs的直接接觸或是通過(guò)旁分泌作用，本文設(shè)計(jì)了ECs//VSMCs隔開(kāi)培養(yǎng)的體系，同樣檢測(cè)靜態(tài)、NSS和LowSS條件下ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)狀況及Akt磷酸化水平。此外，本文還

4、在靜態(tài)條件下，應(yīng)用RNA干擾（RNA interference, RNAi）技術(shù)特異性抑制VSMCs內(nèi)RACK1表達(dá)，探討RACK1對(duì)細(xì)胞凋亡和Akt磷酸化水平的作用。
　　結(jié)果顯示：①切應(yīng)力與VSMCs對(duì)ECs的RACK1表達(dá)均無(wú)顯著影響；② LowSS與細(xì)胞直接接觸共同誘導(dǎo)VSMCs表達(dá)RACK1，NSS、LowSS與旁分泌共同阻遏VSMCs表達(dá)RACK1；③ NSS和LowSS都可能抑制ECs的Akt磷酸化；④旁分泌參與NS

5、S對(duì)VSMCs的Akt磷酸化的促進(jìn)作用；⑤抑制VSMCs的RACK1表達(dá)下調(diào)細(xì)胞凋亡和caspase-3表達(dá)，上調(diào)Akt磷酸化。
　　上述結(jié)果表明, LowSS條件下, ECs通過(guò)直接接觸作用誘導(dǎo)VSMCs的RACK1表達(dá)；切應(yīng)力對(duì)ECs與VSMCs的Akt磷酸化水平的誘導(dǎo)作用不同，NSS和LowSS均抑制 ECs的Akt磷酸化，但NSS的抑制作用更強(qiáng)，而NSS則促進(jìn)VSMCs的Akt磷酸化；RACK1可能通過(guò) PI3K/Akt信