天然藥化答辯

1、,,海洋微藻的活性篩選及藏藥 植物活性成分的研究,,各位老師同學(xué)大家好！,,,前 言,第一章 海洋微藻抗腫瘤活性篩選,第二章 藏藥肉果草活性成分研究,結(jié) 語(yǔ),匯報(bào)內(nèi)容,前 言,癌 癥,全球發(fā)病及死亡人數(shù),我國(guó)發(fā)病及死亡人數(shù),癌癥治療方法,,,,,化 療,手 術(shù),放 射,,,,天然產(chǎn)物,合成化學(xué),組合化學(xué),J. Nat. Prod., 2007, 70: 461-77,尋找天然抗腫瘤活性物質(zhì),論文研究思路,藏藥肉果草,海洋微藻

2、次級(jí)代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性篩選,,單體化合物抗腫瘤活性研究,第一章 海洋微藻抗腫瘤活性篩選,海 洋 微 藻,,微 藻,超過4萬種,（約1萬種，占海洋生物物種40.86％）,抗腫瘤,抗菌,抗病毒,抗炎,毒素作用,浸 膏,藻 體,微藻培養(yǎng),活性測(cè)試,離心分離藻體藻液,甲醇提取,配制甲醇溶液,活性篩選技術(shù)路線,海蝦生物致死法,細(xì)胞測(cè)試法,90株海洋微藻中，活性藻株共10株，其中硅藻4株，金藻5株，綠藻1株。（樣品終濃度為100 μg/

3、mL）,海蝦生物致死法測(cè)試結(jié)果,海洋微藻抗腫瘤活性篩選結(jié)果,90株海洋微藻中，活性藻株5株，其藻體提取物對(duì)小鼠白血病P388細(xì)胞具有不同程度的細(xì)胞增殖抑制活性。,,小鼠白血病P388細(xì)胞SRB法測(cè)試結(jié)果,Control Cylindrotheca sp Prymnesium patellifera Nannochloris oculata

4、Pavlova gyrans Coccolithus pelagicus,活性藻株P(guān)388細(xì)胞鏡檢結(jié)果,20h時(shí)樣品對(duì)細(xì)胞的作用,10株微藻具有海蝦生物致死活性。,本章通過海蝦生物致死法和細(xì)胞測(cè)試法從90株海洋微藻中篩選得到：,5株微藻具有細(xì)胞增殖抑制活性，其中4株顯 示細(xì)胞調(diào)亡活性，1株顯示細(xì)胞壞死活性。,第二章 藏藥肉果草活性成分研究,,藏 藥,肉果草（Lancea tibetica Hook. f. et

5、 Thoms ）為透骨草科（Phrymaceae ）植物，藏名巴丫巴。產(chǎn)于西藏、青海、四川、甘肅、云南，生于海拔1700－4500米的山坡草地、疏林中或河灘及溝谷旁。 肉果草微甘、苦、寒；全草有養(yǎng)肺排膿、清熱止咳作用；治肺炎、肺膿腫、哮喘、咯血、咳嗽失音?；ā⒐苤涡呐K病、血性腫瘤（血癌）、腸絞痛、腸粘連。,二十五味肺病丸,含有肉果草成分的上市藥,,回生甘露丸,,Extraction & Isolatio

6、n,肉果草干草,95%乙醇提取,,粗提物,,大孔樹脂,蒸餾水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇,30%組份,50%組份,70%組份,90%組份,Extraction & Isolation,,Compounds from Lancea tibetica Hook. f. et Thoms,New,New,New,New,,白色無定形粉末 [α]–5.15°(c 0.13, MeOH)。UV

7、(MeOH) λmax (logε) 204 (4.483), 231 (3.815), 282 (3.565) nm,新化合物結(jié)構(gòu)研究,Compound 1 (Lantibeside B),HRESI-MS of compound 1,,,651.2311 [M+H]+ C31H38O15,,IR Spectrum of Compound 1,,,-OH,,,1H NMR of compound 1 in DMSO-d6,,Φ

8、H×6,,,,,,,,,糖OH×6,,,,,,,2H,2H,2H,2H,糖H×11,13C NMR (DEPT) of compound 1 in DMSO-d6,,,,,,C × 6CH × 19CH2 × 5CH3 × 1,,,糖 C1100.2 ppm,,糖 C1103.7 ppm,,,,芳香季碳×6,芳香sp2 C×6,O-CH&

9、#215;9,O-CH2×4,,,,,,,-OCH3 55.7 ppm,,100.9 ppm,,,,,HMQC of compound 1 in DMSO-d6,H-A,C-4,8,C-A,H-4e,8e,H-2,6,H-G1,H-4a,8a,H-X1,,,,,,,,,,,ΦH×6,,,,,,,,,,,,,,,,C-1,5,C-2,6,,,,,,,,,H-1,5,,,,C-B,,,A,B,C,,,,H-6”,H-5

10、”,H-2”,H-5’,H-2’,H-6’,,,,,A,B,,,A和B片斷,1H-1H COSY of compound 1 in DMSO-d6,苷 元,,HMBC of compound 1 in DMSO-d6,H-2”,H-2’,,,,,C-6”,C-6’,H-5”,,,C-1”,C-1’,H-5’,,,C-3”,C-3’,,,,,,,A,B,A和B片斷,,,苷 元,,,,,C-3’,C-4’,,H-A,,C-3”,-OCH3,

11、HMBC of compound 1 in DMSO-d6,,,A,B,A和B片斷,,,苷 元,,,1H-1H COSY of compound 1 in DMSO-d6,C片斷,H-1,5,H-4e,8e,H-4a,8a,H-2,6,,,,,,C,,,苷 元,,HMBC of compound 1 in DMSO-d6,,,H-2,6,C-1,5,,,C-4,8,,,,H-4e,8e,H-4a,8a,C-2,6,,C,C片斷,,,苷

12、元,,HMBC of compound 1 in DMSO-d6,,,,H-2”,H-2’,,C-2,6,,,苷元連接,,,H1”’,,H2”’,,,,H-3”’,,,,H-4”’,,H-5”’,,,,,,H-2””,H-1””,,,H-3””,,,,H-4””,,,,,,,H-5””,,1H-1H COSY of compound 1 in DMSO-d6,,糖 基,,C-4”,,,H-1”’,,HMBC of compound 1

13、in DMSO-d6,,糖基的連接位置,,,HMBC of compound 1 in DMSO-d6,,,H-6”’,C-1””,,糖 基,,,H+ 水解,,D-葡萄糖 L-葡萄糖 D-木糖L-木糖,,,GC-MS比較,化合物,標(biāo)準(zhǔn)品,,HDMS-TMS,糖基D或L構(gòu)型確定,Compound 1,Compound 2,Compound 3,Compound 4,,H-2=H-6: 4.86-4.9ppm,H-2=H-6: 4.6

14、7-4.75ppm,H-6: 4.36-4.45ppm,H-2: 4.76-4.85ppm,相對(duì)構(gòu)型NMR特征,1,2,3,4,H-NMR,1,相對(duì)構(gòu)型確定,化合物1的NOE差譜,H-6,H-2,H- 4a,H- 8a,ΦH,1,2 -反- 5,6-反-1,5-順,化合物2的NOE差譜,H-4e,H-5,H-2,H-2’,H-6’,H-6,H-8a,H-2’’,H-6’’,1,2-順- 5,6 -反-1,5-順,新化合物1,新化合物2,

15、[α]+13.1°,[α]–10.7°,[α]–5.15°,[α]+9.5°,1R,2S,5R,6S,1R,2R,5R,6S,絕對(duì)構(gòu)型確定,,單體化合物抗腫瘤活性初步研究,麗絲胺羅丹明B（SRB）法 四氮唑鹽（MTT）法,細(xì)胞增殖抑制活性測(cè)試方法,細(xì)胞增殖抑制活性應(yīng)用細(xì)胞系,MOLT-4 （人白血病） A549 （人肺腺癌） HL60 （人白血病細(xì)胞） BEL-740

16、2 （人肝癌細(xì)胞） P388 （小鼠白血病）,細(xì)胞增殖抑制活性測(cè)試結(jié)果,結(jié)果表明： 新化合物1-3對(duì)人白血病細(xì)胞HL-60表現(xiàn)微弱的抗腫瘤活性。 對(duì)人白血病MOLT-4 ，人肺腺癌A-549 ， 人肝癌細(xì)胞BEL-7402以及小鼠白血病P388細(xì)胞均不表現(xiàn)抗腫瘤活性(IC50＞100 μM)。,肉果草中分離并解析13個(gè)單體化合物。,木脂素類化合物11個(gè)，其中4個(gè)（1-4）為新化合物。,黃酮類化合