天然藥化黃酮

1、黃酮類化合物,,是一類重要的天然色素，也是中藥中一類重要的有效成分。分布廣泛，多分布于高等植物中，集中在被子植物。以唇形科、玄參科、爵麻科、菊科等存在較多。常以游離態(tài)或與糖結(jié)合成苷的形式存在。在花、葉、果中多為苷；在木質(zhì)部多為苷元，生理活性多種多樣，作用強(qiáng)，毒性不大。,黃酮類化合物生物合成的基本途徑: 以前，黃酮類化合物(flavonoids)主要是指基本母核為2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)類化合物，現(xiàn)在

2、則是泛指兩個苯環(huán)（A-與B-環(huán)）通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。,生物合成研究表明A環(huán)來自于三個丙二酰輔酶A，B環(huán)來自于桂皮酰輔酶A。,主要的生理活性,1.對心血管的作用，如葛根總黃酮及葛根素(puerarin)、銀杏葉總黃酮等具有擴(kuò)張冠狀血管作用 。蘆丁（rutin）、橙皮苷（hesperidin）、d-兒茶素（d-catechin）等具有降低毛細(xì)血管脆性和異常通透性作用，可用作毛細(xì)血管性出血的止血藥及治療高血壓、動脈硬化的

3、輔助藥 。2.抗菌、抗病毒作用，如黃芩苷，木犀草素苷等。3.止咳祛痰作用，如杜鵑素、甘草素和甘草苷等。,主要的生理活性,4. 肝保護(hù)作用，如從水飛薊種子中得到的水飛薊素，臨床上用以治療急、慢性肝炎，肝硬化及多種中毒性肝損傷等疾病。5. 雌性激素樣作用，如大豆素等異黃酮有雌性激素樣作用，可能是由于其結(jié)構(gòu)與己烯雌酚結(jié)構(gòu)相似的緣故。6. 瀉下作用，如營實中的營實苷A有致瀉作用。,根據(jù)中央三碳鏈的氧化程度、B-環(huán)連接位置（ 2-或3-位

4、）以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀等特點，可將重要的天然黃酮類化合物分類如下：,第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與分類,（一）黃酮類(flavones) 黃酮類是以2-苯基色原酮為基本母核，3位無含氧取代的一類化合物。 天然黃酮A環(huán)的5，7位幾乎同時帶有羥基，而B環(huán)常在4’位有羥基或甲氧基，3’位有時也有羥基或甲氧基。,黃酮類,常見的黃酮及其苷類有芹菜素、木犀草素、黃芩苷等。,芹菜素,木犀草素,黃芩苷,（二）黃酮醇類(flavonol)

5、 黃酮醇類在黃酮基本母核的3位上連有羥基或其他含氧基團(tuán)。,黃酮醇,常見的黃酮醇及其苷類有山柰酚、槲皮素、楊梅素、蘆丁等。,山柰酚,楊梅素,槲皮素 R=H蘆丁 R=蕓香糖,（三）二氫黃酮類（Flavanones） 二氫黃酮類結(jié)構(gòu)可看作是黃酮基本母核的2、3位雙鍵被氫化而成。,二氫黃酮類,如橙皮中的橙皮素和橙皮苷；甘草中的甘草素和甘草苷。,橙皮素 R=H橙皮苷 R=蕓香糖,甘草素 R=

6、H甘草苷 R=glc,（四） 二氫黃酮醇類（Flavanonols） 二氫黃酮醇是黃酮醇類的2、3位被氫化的黃酮類化合物，而且常與相應(yīng)的黃酮醇共存于同一植物中。,二氫黃酮醇類,如滿山紅葉中的二氫槲皮素和槲皮素共存，桑枝中的二氫桑色素和桑色素共存。,二氫槲皮素,二氫桑色素,黃柏葉中具有抗癌活性的黃柏素-7-O-葡萄糖苷也屬于二氫黃酮醇類。,黃柏素-7-O-葡萄糖苷,（五）異黃酮類（Isoflavanone）

7、 異黃酮類母核為3-苯基色原酮的結(jié)構(gòu)，即B環(huán)連接在C環(huán)的3位上。,異黃酮類,豆科植物葛根中所含有的大豆素、大豆苷、大豆素-7，4’-二葡萄糖苷、葛根素和葛根素木糖苷均屬于異黃酮類化合物。,大豆素 R1=R2=R3=H大豆苷 R1=R3=H R2=glc葛根素

8、 R2=R3=H R1=glc大豆素-7，4’-二葡萄糖苷 R1=H R2=R3=glc葛根素木糖苷 R1=glc R2=xyl R3=H,（六）二氫異黃酮類（Isoflavanones） 二氫異黃酮具有異黃酮的2、3位被氫化的基本母核。,二氫異黃酮類,（七）查耳酮（Chalcones） 結(jié)構(gòu)特點為二氫黃酮C環(huán)的1、2位鍵斷裂生成

9、的開環(huán)衍生物，即三碳鏈不構(gòu)成環(huán)。,查耳酮類,在酸的作用下，查耳酮可轉(zhuǎn)化為無色的二氫黃酮，堿化后又轉(zhuǎn)為深黃色的2’-羥基查耳酮。,2’-羥基查耳酮,二氫黃酮,如紅花的花中含有的紅花苷,紅花苷,（八）二氫查耳酮類（Dihydrochalcones）二氫查耳酮為查耳酮α,β雙鍵氫化而成。,二氫查耳酮類,二氫查耳酮在植物界分布極少，如薔薇科梨屬植物根皮和蘋果種仁中含有的梨根苷。,梨根苷,（九）橙酮類 結(jié)構(gòu)特點為C環(huán)為含氧五元環(huán)。母

10、核碳原子的編號也與其他黃酮類不同。,橙酮類,此類化合物較少見，主要存在于玄參科、菊科、苦苣苔科以及單子葉植物沙草科中，如在黃花波斯菊花中含有的硫磺菊素屬于此類。,硫磺菊素,（十）花色素類（Anthocyanidins） 結(jié)構(gòu)特點是基本母核的C環(huán)無羰基，1位氧原子以烊鹽形式存在。,花色素類,花色素在中藥中多以苷的形式存在。花色素是使植物的花、果、葉、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅等顏色的色素，如矢車菊苷元、飛燕草苷元和天竺葵苷元以及它們

11、所組成的苷最為常見。,矢車菊苷元 R1=OH R2=H飛燕草苷元 R1=R2=OH天竺葵苷元 R1=R2=H,（十一）黃烷醇類 根據(jù)C環(huán)上的3，4位存在羥基的情況分為黃烷-3-醇和黃烷-3，4-二醇。1. 黃烷-3-醇類，又稱兒茶素類,黃烷三醇類,主要存在于含鞣質(zhì)的木本植物中。如兒茶素為中藥兒茶中的主要成分，有四個光學(xué)異構(gòu)體，但在植物中主要有異構(gòu)體兩個，兒茶素和表兒茶素。,兒茶素,表兒茶素,2. 黃烷-3，4-二

12、醇類 又稱為無色花色素類,黃烷－3，4－二醇類,這類化合物在植物界中分布很廣，在含鞣質(zhì)的木本植物和蕨類植物中更為多見，如：無色矢車菊素。,無色矢車菊素,（十二）雙黃酮類 是由二分子黃酮衍生物聚合而成的二聚物.常見的是由兩個分子的芹菜素或其甲醚衍生物構(gòu)成,根據(jù)其結(jié)合方式分為三類:1. 3’,8”-雙芹菜素型2. 8”-雙芹菜素型3. 雙苯醚型,（十三）其他黃酮類 雙苯吡酮類又稱為苯駢色原

13、酮，母核由苯環(huán)和色原酮的2，3位駢合而成，是一種特殊類型的黃酮類化合物。 常分布在龍膽科、藤黃科、百合科植物當(dāng)中，如：存在于石葦、芒果葉和知母葉中,具有止咳去痰作用的異芒果素。,異芒果素,榕堿,水飛薊素,另外少數(shù)黃酮類化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜,如:,天然黃酮類化合物多和糖形成苷而存在，并且由于糖的種類、數(shù)量、連接位置及連接方式不同，組成了各種各樣的黃酮苷類。,組成黃酮苷的糖類主要有單糖、雙糖類、三糖類和?；穷悺?ⅰ.單糖類：

14、 D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸等。,ⅱ.雙糖類： 槐糖（glc ?1→2 glc）、龍膽二糖(glc ?1→6 glc)、蕓香糖(rh ?1→6 glc)、新橙皮糖（rh ?1→2 glc）、刺槐二糖（rh ?1→6 gal）等。,ⅲ.三糖類： 龍膽三糖(glc ?1→6 glc ?1→2 fru)、槐三糖(glc ?1→2 glc ?1→2 glc)等。ⅳ.?；穷?/p>

15、： 2-乙酰葡萄糖、咖啡酰基葡萄糖(caffeoylglucose)等。,,,,第二節(jié) 理 化 性 質(zhì),一、性狀 1、性狀：苷元為結(jié)晶性固體，苷為無定形粉末。 2、顏色： 與交叉共軛體系及助色團(tuán)（羥基、甲氧基）等的數(shù)目、類型以及位置有關(guān)。在4’-或7-位引入供電子基，因形成P-π共軛，具有推電子作用，促進(jìn)電子轉(zhuǎn)移，使化合物顏色加深。 黃酮、黃酮醇及其苷：灰黃～黃色； 查爾酮：黃～橙黃色； 二氫黃酮、

16、二氫黃酮醇、黃烷醇：不顯色； 異黃酮：微黃色； 花色苷及苷元：為紫色、藍(lán)色，蘭紫色。,黃酮（灰黃～黃色） 二氫黃酮黃酮醇（灰黃～黃色） 二氫黃酮醇查耳酮（黃～橙黃色）

17、 二氫查耳酮 二氫異黃酮 黃烷醇類

18、 異黃酮（無或微黃色）,花色素類（顏色隨pH而改變 紅色（pH 8.5）,,,,,,交叉共軛體系,旋光性 取決于

19、 不對稱碳原子的有無 有 無 所有黃酮苷（糖） 游離黃酮 游離黃酮

20、 黃酮 二氫黃酮 黃酮醇 二氫黃酮醇 異黃酮 二氫異黃酮

21、 查耳酮（二氫 ） 黃烷醇類 橙酮

22、 花色素類等,,,,,,,,,,,,,,3．旋光性：,二．溶解性 1、游離苷元易溶于甲、乙醇，乙酸乙酯，乙醚及稀堿液中，不溶或難溶于水。其中在水中的溶解度，花色苷>二氫黃酮（醇）>黃酮（醇）>查耳酮. 原因：平面型分子，分子中存在著交叉共軛體系?；ㄉ諡殡x子型化合物，易溶于水。,（1）分子的立體結(jié)構(gòu) 平面型分子

23、 非平面型分子 黃酮 二氫類（C-環(huán)半椅式結(jié)構(gòu)） 黃酮醇 異黃酮（羰基與B-環(huán)立體障礙） 查耳酮

24、 交叉共軛 分子間排列不緊密，水分子易于進(jìn)入 水溶度小 水溶度大,,,,,黃酮類化合物的理化性質(zhì),R=OH 二氫黃酮醇,R=H 二氫黃酮,,,游離苷元的母核上引入羥基，水溶性增加，且與羥基數(shù)目成正比。引入甲氧基或異戊烯基后，脂溶性增加，水溶性降低。,2、黃酮苷類易溶于熱水，甲醇，乙醇。難溶或不

25、溶親脂性有機(jī)溶劑中。,（1）三糖苷 > 雙糖苷 > 單糖苷 > 苷元（2）3 - O - 糖苷 > 7 - O - 糖苷（平面性分子）（3）花色素(平面性分子,離子型) > 非平面性分子 > 平面性分子,三．酸堿性（一）酸性： 黃酮類化合物分子中具有酚羥基，故顯酸性。 酸性強(qiáng)弱順序：7，4’-二羥基>7或4’-羥基>一般 酚羥基>5-羥基，可分別用5%碳酸氫鈉、

26、5%碳酸鈉、0.2%NaOH、4%NaOH。 a、7，4‘-OH酸性強(qiáng)于其他位置羥基的酸性（處于羰基對位，羰基的共軛誘導(dǎo)）。 b、5-OH酸性最弱（處于羰基鄰位，形成分子內(nèi)氫鍵）。 c、酚羥基數(shù)目越多，酸性越強(qiáng)。,,（二）堿性： 黃酮類化合物因為分子中的γ-吡喃酮環(huán)上的 1-氧原子，有未共用電子對，可接受質(zhì)子而顯弱堿性，與強(qiáng)酸結(jié)合生成烊鹽，極不穩(wěn)定，加水分解。不同的黃酮溶于濃硫酸時，常表現(xiàn)出特殊的顏色。,2.堿性：

27、,γ-吡喃酮環(huán)1-氧原子,微弱堿性（孤對電子，接受質(zhì)子）,僅溶于強(qiáng)的、濃酸+水 （濃硫酸）,烊 鹽（呈色） 應(yīng)用 初步鑒別黃酮母核類型：黃酮、黃酮醇 —— 黃~橙色，并有熒光 二氫黃酮 —— 橙紅（冷）、紫紅（熱）

28、 查耳酮 —— 橙紅~洋紅 異黃酮（二氫）—— 黃色 橙酮 —— 紅~洋紅,,,,,四．顯色反應(yīng) 與分子中的酚羥

29、基及γ-吡喃酮環(huán)有關(guān)。 1、還原反應(yīng) （1）HCl-Mg： 方法：將樣品的甲醇或乙醇液，加入少許鎂粉振搖，再滴加幾滴濃鹽酸，泡沫處呈紅色。黃酮、黃酮醇、二氫黃酮（醇）顯橙紅或紫紅色。 B環(huán)上有-OH或取代。顏色加深?；ㄇ嗨丶安糠殖韧槎仍跐恹}酸下會發(fā)生色變，故預(yù)先需對照排除。,（2）四氫硼鈉反應(yīng)： 樣品的甲醇液，加等量2%NaBH4的甲醇液，加濃鹽酸或硫酸，生成紫色或紫紅色，為二氫黃酮類專屬反應(yīng)。,2、與

30、金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)分子中具有3-羥基，4-羰基或5-羥基，4-羰基或鄰二酚羥基的黃酮類化合物 （1）三氯化鋁顯色：定性及定量分析顯鮮黃色熒光（4’-OH或7，4’-OH顯天藍(lán)色熒光）。 （2）鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng)：區(qū)分3-OH或5-OH黃酮，加2%ZrOCl2/MeOH樣品的甲醇液，形成黃色鋯絡(luò)合物，仍呈鮮黃色（3-OH），加2%枸櫞酸黃色溶液顯著褪去（5-OH）。,（3）醋酸鎂顯色：區(qū)別二氫黃酮（醇）類化合物。在紙片上滴加樣品

31、液，噴醋酸鎂甲醇液，加熱干燥，UV觀察，二氫黃酮（醇）顯天藍(lán)色熒光，黃酮、黃酮醇異黃酮，顯黃至橙黃乃至褐色。 （4）氨性氯化鍶：檢識具有鄰二酚羥基的黃酮。氯化鍶的甲醇溶液和氨氣飽和的甲醇液。產(chǎn)生綠色至棕色乃至黑色沉淀。,3、硼酸顯色：具有5-羥基黃酮和6‘-羥基查耳酮結(jié)構(gòu)。在草酸條件下，與硼酸反應(yīng)，呈黃色并有綠色熒光。枸櫞酸-丙酮黃色無熒光。 4、與堿的反應(yīng)：黃酮類化合物溶于堿水中顯黃色、橙色或紅色，化合物類型不同，顯色情況不同。,

32、顯色反應(yīng)總結(jié) 1．還原顯色反應(yīng),反應(yīng)類型 鑒別特征 鑒別意義 備注,鹽酸-鎂粉 黃酮、二氫黃酮、 紅~紫紅 黃酮類特征性 假陽性 反應(yīng) 黃酮醇、二氫黃酮醇 紅~紫紅 鑒別反應(yīng)

33、 （花色素） （最常用） 查耳酮、橙酮、 （-） 兒茶素類、異黃酮 （-）,四氫硼鈉

34、 二氫黃酮、二氫黃酮醇 紅~紫紅 二氫黃酮類特有 還原反應(yīng) 其它黃酮類 （-）,,,,,,2.與金屬鹽類試劑絡(luò)合反應(yīng),,反應(yīng)類型 鑒別特征及鑒別意義 備 注,,,鋯鹽 枸櫞酸 鋯鹽-枸櫞酸 3-OH或

35、3，5 -二OH 黃色 黃色不褪 PPC,(ZrOCl2) 5-OH 黃色褪去 示,氨性氯化鍶(SrCl2) 鄰二酚羥基

36、 綠、棕乃至黑色沉淀 三氯化鐵(FeCl3) 酚羥基 紫、藍(lán)、綠,,,,,,,,,,三氯化鋁 3-OH，4-C=O 黃色 （AlCl3） 5-OH，4-C=O 鮮黃色熒光 PPC\TLC

37、鄰二酚羥基 （4‘或7，4’黃酮醇，天藍(lán)色熒光）,,,3. 硼酸顯色反應(yīng),,硼酸 5 - 羥基，4 - 羰基黃酮 黃色，綠色熒光（草酸液）,（H3BO3） 6′-羥基，4 - 羰基查耳酮 黃色，無熒光（枸櫞酸）,,2´-羥基查耳酮在酸的作用下可轉(zhuǎn)化為： c A 黃酮 B

38、 黃酮醇 C 二氫黃酮 D 黃烷-3-醇 E 異黃酮,,下列哪類物質(zhì)無旋光性？a A 異黃酮 B 二氫異黃酮 C 二氫黃酮醇 D 二氫黃酮 E 黃烷醇,,下列那種物質(zhì)的酸性最強(qiáng)？aA 7，4´-二羥基黃酮 B 5，4´-二羥基黃酮 C 3，5-二羥基黃酮D

39、 3，7-二羥基黃酮 E 3，4´-二羥基黃酮,,某中藥提取液不加鎂粉，只加鹽酸即產(chǎn)生紅色，則其可能含有：c A 黃酮 B 黃酮醇 C 花色素 D 二氫黃酮 E 異黃酮,比較下列四種黃酮類化合物酸性大小,A、R1＝R2＝HB、R1＝H, R2＝RhamC、R1＝Glc, R2＝HD、R1＝Glc

40、, R2＝Rham,一．提取方法 —— 溶劑法,第三節(jié) 黃酮類化合物的提取、分離,溶劑法關(guān)鍵: 溶劑的選擇 溶劑選擇依據(jù): 黃酮類成分的存在狀態(tài) （游離、苷）及溶解性,提取方法選擇依據(jù): 溶劑的溶解性能 （煎煮法、滲漉法、回流法等）,溶劑 提取原理

41、 游離黃酮 黃酮苷 備 注,乙醇 溶解范圍廣 + + （甲醇） 苷、苷元均可溶 （90~95%） ( 60%） 甲醇毒性大,沸水 多糖苷易于水

42、 + 成本低、安全,水溶性雜質(zhì)多,堿性水或 稀氫氧化鈉溶出能力強(qiáng),堿性乙醇 酚羥基的酸性 + + 石灰水除雜質(zhì)效果好,,,,,黃酮類化合物的提取,,,二.

43、分離方法,（一）溶劑萃取法 黃酮與雜質(zhì) 分離依據(jù)：成分之間 苷與苷元 之間的極性（分配系數(shù)K）差異 苷元與苷元 分離工藝： 原料的提取濃縮液（水溶液）,依次以石油醚、乙醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取,石油醚液

44、 乙醚液 乙酸乙酯 水飽和正丁醇 母液,（脂溶性雜質(zhì)） 回收 回收 減壓回收 （水溶性雜質(zhì)) 苷元 單糖苷 多糖苷,,,,,,,,,,（二）pH梯度萃取法 分離依據(jù)：游離黃酮類化合物的酸性差異 分離

45、工藝：總游離黃酮的乙醚液,依次以5%NaHCO3 、5%Na2CO3、0.2 % NaOH、 4% NaOH萃取,5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 0.2 % NaOH液 4% NaOH液 母液,酸化

46、 （脂溶性雜質(zhì)）,7，4′-OH黃酮 7或4′-OH黃酮 一般-OH黃酮 5-OH黃酮,,,,,,,,,,,,（三）柱色譜法,吸附原理 異黃酮、二氫黃酮（醇）、 氯仿-甲醇不同比例（105℃，活化） 高度甲基化或乙酰化黃酮（

47、醇） 混合溶劑洗脫 （極性?。?分配原理 多羥基黃酮醇或黃酮苷類 氯仿-甲醇-水,（加水失活或不活化） （極性大） （80 ：20 ：1）等比例,,,1．硅膠柱色譜,,2．氧化鋁柱色譜（少） 具有3-OH或5-OH 、4-羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物與鋁離子絡(luò)和而被牢固吸附，難

48、于洗脫。,2．聚酰胺色譜,,吸附規(guī)律：與黃酮類化合物酚羥基的數(shù)目、位置及介質(zhì)有關(guān)。（1）酚羥基數(shù)目越多，吸附能力越強(qiáng)。（2）酚羥基數(shù)目相同的情況下，酚羥基所處的位置有利于形成分子內(nèi)氫鍵，吸附能力減弱。 3-OH或5-OH黃酮的吸附力小于其他位置-OH黃酮； 鄰二酚羥基黃酮的吸附力弱于間位或?qū)ξ环恿u基黃酮（3）分子內(nèi)芳香化程度越高，吸附力越強(qiáng)。 查耳酮 > 二氫黃酮

49、 黃酮醇 > 黃酮 > 二氫黃酮醇 > 異黃酮（4）與介質(zhì)的關(guān)系：吸附力 水（中）> 甲醇、乙醇（濃度 由低到高）> 堿性溶劑,（氫鍵吸附）,洗脫規(guī)律：與吸附規(guī)律正好相反，即吸附能力越強(qiáng)，越難洗脫,聚酰胺“雙重色譜”原理,正相色譜 反相色譜,聚酰胺：極性固定相（極性酰胺基團(tuán)） 非極性固定相（非極性

50、脂肪鏈）洗脫劑：有機(jī)溶劑（氯仿-甲醇，極性小） 含水溶劑（甲醇-水，極性大） 先洗脫：游離黃酮（苷元，極性?。?苷（極性大）（柱色譜分離） Rf值： 苷元 > 苷 苷元 < 苷（TLC色譜鑒別）,,,,,,,***上述規(guī)律也適用于黃酮類化合物在聚酰胺薄層上的行為。,苷與苷元聚酰胺色譜,Sephadex G型：

51、親水性凝膠 Sephadex LH-20型 ：羥丙基葡聚糖凝膠，水及極性有機(jī)溶劑,分子篩作用 吸附原理 （按分子大小分離） （按極性大小分離）,,黃酮苷及苷元的分離 苷元的分離 洗脫順序：分子由大到小被洗脫 極性由小到大被洗脫

52、 叁糖苷 > 雙糖苷 > 單糖苷 > 苷元 1-OH > 2-OH > 3-OH > 4-OH > 5- OH黃酮,,,,,,,,,4 . 葡聚糖凝膠柱色譜,“雙重色譜”原理,常用洗脫劑： 堿水（0.1mol / L NH3.H2O） 鹽水（0.5mol / L NaCl）

53、 醇或醇水不同比例。,應(yīng)用：適用于各種黃酮類化合物的分離 原理：反相柱色譜（黃酮類化合物極性大） 固定相：ODS 流動相：水-乙晴，水與甲醇不同比例,6．高效液相色譜法（HPLC）,第四節(jié)．黃酮類化合物的檢識,一．理化檢識 1.顏色：多呈黃色 2.母核檢識：鹽酸-鎂粉反應(yīng)-黃酮、黃酮醇、二氫黃酮

54、 二氫黃酮醇（+） 四氫硼鈉反應(yīng)-二氫黃酮（醇）類（+） 五氯化銻-查耳酮類（+） 3.取代基團(tuán)檢識：鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng)-3-OH（+） 5-OH（-） 黃酮鑒別 氨

55、性氯化鍶反應(yīng)-鄰二酚羥基（+）二.色譜檢識 （一）紙色譜（PPC） 原理：分配原理 適用范圍：游離黃酮（苷元）及黃酮苷的分離鑒別,,雙相色譜,第I向 醇性展開劑 第II向 水性展開劑（BAW、TBA、水飽和正丁醇） （2~8%HAc、3%NaCl、1%

56、HCl）,正相色譜 反相色譜固定相（水）極性 > 流動相 （ **有認(rèn)為是吸附原理）？？,Rf規(guī)律：極性小的化合物Rf大 極性大的化合物Rf大,苷元（0.7以上） > 單糖苷 >

57、; 雙糖苷（0.7以下） 苷元中，平面型分子 > 非平面型分子 Rf規(guī)律與左邊相反 母核相同，2-OH > 3-OH > 4-OH > 5- OH黃酮,苷元的分離鑒別 黃酮苷及花色素類,,,,,,,,,,PPC色譜,1．硅膠薄層色

58、譜 — 極性較小的黃酮類化合物（黃酮苷元）2．聚酰胺薄層色譜 — 可用于黃酮苷及游離黃酮的分離 鑒別，其色譜行為可參考聚酰胺柱色譜。3．纖維素薄層色譜—分配原理，其色譜行為可參考紙色譜。,（二）薄層色譜（TLC）,各種色譜的檢識： 日光下觀察—多數(shù)黃酮有黃色斑點 紫外光下觀察—多數(shù)黃酮呈黃綠色熒光斑點 氨蒸氣熏—多數(shù)黃酮有顏色變化 噴顯色劑

59、（2%AlCl3甲醇液）—多數(shù)黃酮黃色變深，熒光加強(qiáng),第五節(jié)． 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究,一. 紫外可見光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用 一般鑒定程序： 1、先測定在甲醇中的光譜。 2、再測定在加入各種診斷試劑后的紫外光譜。 3、如為苷類，則可水解或甲基化后再水解，并測定苷元或其衍生物的紫外光譜。 4、將以上各種光譜數(shù)據(jù)（或光譜圖）進(jìn)行對比分析，即可獲得有關(guān)

60、結(jié)構(gòu)信息。,,,,,,,,黃酮（醇）： 帶 II、帶I均強(qiáng)母核光譜特征 二氫黃酮類、異黃酮類：帶 II強(qiáng)、 帶I弱 母核的推斷 （甲醇） 查耳酮、橙酮：帶 II弱、帶I強(qiáng),取代基：OH等，為助色團(tuán) 依紅移規(guī)律推斷取代基團(tuán),,甲醇鈉：強(qiáng)堿，所有酚羥基解離 醋酸鈉：堿性弱，酸性強(qiáng)的酚羥基解離 加入診斷試劑 醋酸鈉

61、/硼酸：鄰二酚羥基絡(luò)和 相應(yīng)吸收峰紅移,三氯化鋁：3-OH，4-羰基 5-OH，4-羰基 絡(luò)和 鄰二酚羥基,,,,,,,,黃酮類化合物在甲醇中紫外光譜特征,,,苯甲酰系統(tǒng)

62、 桂皮酰系統(tǒng)（帶II 220~280nm） （帶1 300~400nm） 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中的交叉共軛體系,,二氫黃酮（醇） 異黃酮（二氫） （由B環(huán)產(chǎn)生的桂皮酰系統(tǒng)不存在，帶I弱，帶

63、II強(qiáng)）,,″,,,黃酮類化合物在甲醇中紫外光譜特征,,黃酮類化合物母核UV吸收特征,,母核類型 帶II （nm） 帶I （nm） 備注黃酮 250~280（強(qiáng)） 304~350（強(qiáng)） 典型的交叉共軛系統(tǒng)黃酮醇（3-OH取代）

64、 ″ 328~357（強(qiáng)） 3-OH供電減弱，使黃酮黃酮醇（3-OH游離） ″ 358~385（強(qiáng)） 3-OH供電共軛↑，帶1紅移,,,,異黃酮 245~278（強(qiáng)） ( sh )

65、 桂皮酰系統(tǒng)破壞 二氫黃酮（醇） 270~295（強(qiáng)） ( sh )查耳酮 220~270（弱） 340~390（強(qiáng)）橙酮 230~270（弱） 370~430（強(qiáng)） 花青素（苷）

66、 270~280 465~560（可見區(qū)）,,,,（2）取代基團(tuán)對共軛吸收的影響,黃酮類核中引入-OH（酚羥基）等供電基團(tuán)，使共軛程度增強(qiáng)，相應(yīng)的吸收峰紅移。 一般，A環(huán)引入 – OH，帶II紅移，B環(huán)引入 – OH帶I紅移。羥基甲基化或苷化后，原酚羥基的供電能力下降，引起相應(yīng)的吸收峰紫移。 3-OH甲基化或苷化，帶I紫移， 5-O

67、H（與羰基形成分子內(nèi)氫鍵）甲基化，帶I、帶II均紫移5~15nm， 4′-OH甲基化，帶I紫移3~10nm。羥基乙酰化后，乙?；奈娮饔?，使原來酚羥基對共軛系統(tǒng)的供電能力消失，對光譜的影響亦將完全消失。,黃酮 、黃酮醇加入診斷試劑后吸收峰（帶I、帶II）的位移規(guī)律診斷試劑 位移規(guī)律

68、歸 屬,NaOMe 帶I紅移40~60nm，強(qiáng)度不降 示有4′-OH 帶I紅移50~60 nm，強(qiáng)度下降 示有3-OH、但無4′-OH,NaOAc 帶II紅移5~20nm 示有7-OH,2.

69、加入診斷試劑后引起的位移及其在結(jié)構(gòu)測定中的意義,NaOAc / H3BO3 帶I紅移12~30nm 示B環(huán)有鄰二酚羥基 帶II紅移5~10nm 示A環(huán)有鄰二酚羥基