高滲鹽水點(diǎn)眼制作的小鼠干眼模型與評(píng)估

1、高滲鹽水點(diǎn)眼制作的小鼠干眼模型與評(píng)估高滲鹽水點(diǎn)眼制作的小鼠干眼模型與評(píng)估李晶，付川，謝漢平（400038重慶，第三軍醫(yī)大學(xué)西南眼科醫(yī)院）[摘要]目的目的通過(guò)高滲鹽水點(diǎn)眼提高淚液滲透壓制作小鼠干眼模型并對(duì)該模型進(jìn)行評(píng)估。方法方法60只雌性6～8周齡BALBc小鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組20只。對(duì)照組采用308mOsmolL氯化鈉溶液點(diǎn)眼，每天5次，實(shí)驗(yàn)組采用500mOsmolL氯化鈉溶液點(diǎn)眼，每天5次，空白組不點(diǎn)

2、眼。分別在第0，7，14，28，42天行SchirmerⅠ實(shí)驗(yàn)、角膜熒光素鈉染色和評(píng)分、眼表虎紅染色觀察、淚液蕨類實(shí)驗(yàn)、角膜上皮HE染色觀察、角膜上皮厚度測(cè)量、結(jié)膜上皮PAS染色觀察和杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)。第42天行角膜上皮掃描電子顯微鏡觀察。結(jié)果結(jié)果第0天各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。第7天起，與空白組[（3.00.5）mm]和對(duì)照組[（3.10.5）mm]相比，實(shí)驗(yàn)組[（2.30.4）mm]BALBc小鼠出現(xiàn)淚液生成明顯減少（

3、P＜0.05)，角膜熒光素鈉染色和虎紅染色出現(xiàn)點(diǎn)、片狀著色，角膜熒光素鈉染色評(píng)分升高（3組分別為0.91.2、0.50.7、1.41.6，P＜0.01），淚液蕨類圖形減少。第14天起，與空白組和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組BALBc小鼠結(jié)膜杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)減少（3組分別為10.62.0、11.81.3、5.41.8，P＜0.01）。角膜上皮基底部細(xì)胞排列紊亂缺失，角膜上皮分層減少，出現(xiàn)空泡，角膜上皮層厚度減少[3組分別為（21.693.41）、（21

4、.232.64）、（15.821.38）μm，P＜0.05]，角膜上皮細(xì)胞微絨毛丟失。結(jié)論高滲鹽水可以在小鼠眼表引起類似干眼的病理?yè)p害，淚液高滲透壓在干眼的發(fā)病中起重要作用。[關(guān)鍵詞]干眼；淚液；高滲透壓[中圖法分類號(hào)][文獻(xiàn)標(biāo)志碼]AMousemodelofdryeyeinducedbyhyperosmolarsalineitsevaluationLiJingFuChuanXieHanping(SouthwestHospitalofO

5、phthalmologyThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing400038China)[Abstract]ObjectiveToevaluatethemousemodelofdryeyeinducedbyhyperosmolarsaline.MethodsSixtyfemaleBALBcmiceattheageof68weekswereromlydividedintoblankgroupcontr

6、olgroupexperimentalgroup20ineachgroup.Miceincontrolexperimentalgroupsweretreatedwith308mOsmolL500mOsmolLsodiumchlidesolutionrespectively5timesaday.Miceinblankgroupwerenottreatedwithsodiumchlidesolution.Schirmertestfluesc

7、einstainingcnealscingrosebengalstainingtearfernsexperimentcnealepithelialHEstainingthicknessmeasurementconjunctivalepithelialPASstainingGobletcellcountingwereconductedondays07142842respectively.Cnealsurfacewasobservedbys

8、canningelectronmicroscopyonday42.ResultsNosignificantdifferencewasfoundintheaboveparametersonday0betweenthetwogroups.Onday7thevolumeoftearswassignificantlysmallerinexperimentalgroup(2.30.4mm)thaninblankgroup(3.00.5mm)con

9、trolgroup(3.10.5mm)(P＜0.05).Spottypatchystainingwasobservedoncnea.Thesceofcnealfluesceinstainingrosebengalstainingwashigherinexperimentalgroup（1.41.6）thaninblankcontrolgroups(0.91.20.50.7)(P＜0.01).Onday14thenumberofGoble

10、tcellswas10.62.011.81.35.41.8respectivelyin3groups(P＜0.01).Thebasalcnealepithelialcellswereabnmallyarrangedwithvacuoles.Thethicknessofcnealepithelium21.693.41μm21.232.64μm15.821.38μmrespectivelyin3groupswithlossofmicrovi

11、llioncnea(P＜0.05).ConclusionHyperosmolarsalinecancausepathologicallesionssimilartodryeyeonocularsurfaceofmicethusplayinganimptantroleinpathogenesisofdryeye.[Keywds]dryeyetearshighosmoticpressureCrespondingauth：XieHanping

12、，862368765377，Email:xiehanping@.cn干眼(dryeyesyndrome)又稱角結(jié)膜干燥癥(keratoconjunctivitissicca)或者淚液功能不全綜合征(dysfunctionaltearsyndrome)[1]，是指任何原因引起的淚液質(zhì)和量異常或動(dòng)力學(xué)異常導(dǎo)致的淚膜穩(wěn)定性下降，并伴有眼部不適，導(dǎo)致眼表組織病變?yōu)樘卣鞯募膊】偡Q，是最常見(jiàn)的眼表疾病。美國(guó)的調(diào)查顯示：不同的年齡組，干眼的發(fā)病率從5

13、%到30%不等。亞洲干眼的發(fā)病率為20％[1]。人口老齡化可能會(huì)進(jìn)一步提高干眼的發(fā)病率。[通信作者]謝漢平，電話：(023)68765377，Email:xiehanping@.cn為研究干眼，研究者使用鼠、兔和狗制作了多種的干眼動(dòng)物模型。基本可以分為淚液生成不足型，淚液蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型或者兩者混合型[2]。但是由于干眼病因繁多，病理過(guò)程復(fù)雜，各因素之間的聯(lián)系或因果關(guān)系尚未完全明了，至今尚無(wú)一種動(dòng)物模型可以準(zhǔn)確模仿出該病頻繁發(fā)生、逐漸惡化、進(jìn)

14、展緩慢、機(jī)制復(fù)雜的特點(diǎn)[3]。干眼的發(fā)生存在共同的最終通路是淚膜不穩(wěn)，淚液中電解質(zhì)濃度的升高導(dǎo)致淚液滲透壓升高[1]。淚液滲透壓升高可以導(dǎo)致眼表上皮細(xì)胞產(chǎn)生前炎性細(xì)胞因子，誘導(dǎo)CD4T細(xì)胞向輔助性Th17a：P＜0.05，b：P＜0.01，與實(shí)驗(yàn)組比較圖1點(diǎn)眼后不同時(shí)間點(diǎn)各組淚液分泌量的比較點(diǎn)眼后不同時(shí)間點(diǎn)各組淚液分泌量的比較2.2角膜熒光素染色和評(píng)分第0天，空白組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組均有BALBc小鼠角膜出現(xiàn)少許點(diǎn)狀著色，角膜評(píng)分各組差異

15、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)組BALBc小鼠隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，角膜中央點(diǎn)狀著色增加，逐漸出現(xiàn)片狀著色，病變累及角膜各個(gè)象限，以角膜中央為重(圖2)。從第7天起，實(shí)驗(yàn)組角膜熒光素染色評(píng)分和第0天比較明顯上升(P＜0.01)，并且逐漸上升。實(shí)驗(yàn)組第7天角膜熒光素染色評(píng)分較第0天上升了75％(表1)。A：空白組角膜熒光素染色；B：實(shí)驗(yàn)組第14天角膜熒光素染色示中央角膜點(diǎn)片狀著色；C：實(shí)驗(yàn)組第28天角膜熒光素染色示3個(gè)象限點(diǎn)片狀著色；D：實(shí)

16、驗(yàn)組第42天角膜熒光素染色示全角膜點(diǎn)片狀著色圖2點(diǎn)眼后不同時(shí)間空白組和實(shí)驗(yàn)組點(diǎn)眼后不同時(shí)間空白組和實(shí)驗(yàn)組BALBcBALBc小鼠角膜熒光素染色觀察小鼠角膜熒光素染色觀察表1點(diǎn)眼后不同時(shí)間各組點(diǎn)眼后不同時(shí)間各組BALBcBALBc小鼠角膜熒光素染色評(píng)分比較小鼠角膜熒光素染色評(píng)分比較（n=10）組別0d7d14d28d42d空白組0.70.70.91.2a1.01.3a0.60.8a0.60.8a對(duì)照組0.40.70.50.7a0.60.8

17、a0.50.7a0.40.7a實(shí)驗(yàn)組0.81.01.41.62.02.47.73.86.24.5a：P＜0.01，與實(shí)驗(yàn)組比較2.3眼表虎紅染色空白組和對(duì)照組部分BALBc小鼠眼表虎紅染色可見(jiàn)少量點(diǎn)狀著色，實(shí)驗(yàn)組BALBc小鼠從第7天開(kāi)始點(diǎn)狀著色逐漸增加，并且出現(xiàn)片狀著色，累計(jì)4個(gè)象限，以中央和鼻側(cè)角膜為重(圖3)。A：空白組角膜虎紅染色；B：實(shí)驗(yàn)組第14天角膜虎紅染色示1個(gè)象限點(diǎn)片狀著色；C：實(shí)驗(yàn)組第28天角膜虎紅染色示2個(gè)象限點(diǎn)片狀

18、著色；D：實(shí)驗(yàn)組第42天角膜虎紅染色示3個(gè)象限點(diǎn)片狀著色圖3點(diǎn)眼后不同時(shí)間空白組和實(shí)驗(yàn)組點(diǎn)眼后不同時(shí)間空白組和實(shí)驗(yàn)組BALBcBALBc小鼠角膜虎紅染色觀察小鼠角膜虎紅染色觀察2.4淚液蕨類實(shí)驗(yàn)空白組和對(duì)照組BALBc小鼠淚液在顯微鏡下進(jìn)行淚液蕨類結(jié)晶圖像分析可以觀察到形態(tài)良好的蕨類物形成。實(shí)驗(yàn)組BALBc小鼠淚液結(jié)晶中的蕨類物從第7天開(kāi)始逐漸減少，蕨類物之間的連接中斷。第28天以后顯微鏡下僅能觀察到稀少的小蕨類物，甚至完全消失(圖4)