單純環(huán)境因素誘導(dǎo)的小鼠干眼模型眼表免疫機制的初步研究.pdf

1、目的： 研究單純環(huán)境因素建立的小鼠干眼模型T細胞表面標志物CD4+在結(jié)膜、瞼板腺的表達及炎癥激活標志物MHC-Ⅱ分子在角膜上皮的表達。 方法： 將64只4-6周齡的雌性balb/c小鼠隨機分為兩組，32只小鼠飼養(yǎng)于環(huán)境智能控制干燥系統(tǒng)(ICES)中(RH15±3％，AF=2.1±0.2 m/s，T：21-23℃)作為實驗組。32只balb/c小鼠飼養(yǎng)于正常環(huán)境(RH：70％-80％，no AF，T：21-23℃)

2、作為對照組。于第0、14、28天和42天分期觀察角膜熒光素染色，結(jié)膜杯狀細胞密度變化，結(jié)膜、瞼板腺中T細胞表面標記CD4+的表達及免疫炎癥標記物MHC-Ⅱ分子在角膜上皮的表達。 結(jié)果： 1.實驗組小鼠置于ICES后角膜熒光素染色程度逐漸加重，0天、14天、28天和42天角膜熒光素染色評分分別為0.9±0.8，6.0±1.1，10.3±1.0，13.1±0.8，驗后多重比較，各時間點之間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.008(

3、0天vs.14天)，P=0.046(28天vs.42天，14天vs.28天)，P<0.001(0天vs.28天，0天vs.42天，14天vs.42天)；對照組小鼠在正常環(huán)境中角膜熒光素染色在0天、14天、28天和42天無明顯差異； 2.實驗組小鼠在ICES中飼養(yǎng)0、14、28、42天后，結(jié)膜中CD4+的表達逐漸增多，光密度值(IOD)分別為3.6±1.0，13.4±3.9，22.6±2.9及34.7±5.8，驗后多重比較，各時間

4、點間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.043(0天vs.14天)，P=0.009(28天vs.42天)，P=0.035(14天vs.28天)，P<0.001(0天vs.28天，0天vs.42天，14天vs.42天)；對照組小鼠在正常環(huán)境下結(jié)膜中CD41細胞的表達在0天、14天、28天和42天無明顯差異； 3.實驗組小鼠置于ICES14天、28天、42天(38±4，24±4，10±3)后結(jié)膜杯狀細胞和0天(57±5)相比數(shù)量逐漸減少，驗

5、后多重比較各時間點之間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.012(0天vs.14天)，P=0.048(28天vs.42天，14天vs.28天)，P<0.001(0天vs.28天，0天vs.42天，14天vs.42天)，且隨著CD4+T細胞浸潤結(jié)膜程度的不斷加重，杯狀細胞數(shù)量逐漸減少，決定系數(shù)為r2=0.809，相關(guān)系數(shù)為-0.908，P<0.01，兩者之間呈負相關(guān)；對照組小鼠在正常環(huán)境中結(jié)膜杯狀細胞的數(shù)量在0天、14天、28天和42天無明顯差異

6、； 4.實驗組小鼠瞼板腺中CD4+的表達于第14天開始逐漸增多，14天(18.4±1.4)、28天(23.9±1.1)和42天(30.1±2.9)與0天(12.1±0.8)相比光密度值均有明顯差異，驗后多重比較，各時間點之間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.033(0天vs.14天)，P=0.008(28天vs.42天)，P=0.046(14天vs.28天)，P<0.001(0天vs.28天，0天vs.42天，14天vs.42天)；對

7、照組小鼠在正常環(huán)境下瞼板腺中CD4+T的表達在0天、14天、28天和42天無明顯差異； 5.實驗組小鼠角膜上皮周邊MHC-Ⅱ分子的表達于14天時開始增多，14天(118.8±3.4)、28天(158.7±5.7)和42天(190.0±5.8)與0天(94.0±5.1)比MHC-Ⅱ分子的表達逐漸增多，驗后多重比較，各時間點之間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.048(0天vs.14天，14天vs.28天，28天vs.42天)，P<0.0

8、05(0天vs.28天，0天vs.42天，14天vs.42天)；角膜上皮旁中央MHC-Ⅱ分子的表達于14天時開始增多，14天(39.7±6.7)、28天(79.3±6.3)和42天(118.3±5.7)與0天(0.2±0.4)比MHC-Ⅱ分子的表達逐漸增多，各時間點間差異均有統(tǒng)計學意義，P=0.046(0天vs.14天，14天vs.28天)，P=0.048(28天vs.42天)，P<0.001(0天vs.28天，0天vs.42天，14天

9、vs.42天)；角膜上皮中央MHC-Ⅱ分子的表達在0天(0.0±0.0)和14天(1.8±0.8)無明顯差異，P>0.1，此后數(shù)量明顯增多，28天(24.7±4.0)與42天(40.0±3.8)表達逐漸上調(diào)，與0天和14天比差異有統(tǒng)計學意義，P=0.043(28天vs.42天)，P=0.002(0天vs.28天)，P=0.003(14天vs.28天)，P<0.001(0天vs.42天，14天vs.42天)；對照組小鼠在正常環(huán)境中MHC-