海藻糖與環(huán)孢霉素A對環(huán)境型小鼠干眼的預(yù)防作用評估.pdf

1、目的： 評價海藻糖(Trehalose，Th)和環(huán)孢霉素A(Cyclosporin A，CsA)對智能環(huán)境控制系統(tǒng)(Intelligent Controlled Environmental System，ICES)下小鼠干眼的預(yù)防作用，并對其預(yù)防機(jī)制進(jìn)行初步探討；比較二者的預(yù)防效果。 方法： 選用4-6周齡雌性Balb/c小鼠40只，隨機(jī)均分為正常對照組(NC)、干眼對照組(NT)、海藻糖干預(yù)組(TT)和環(huán)孢霉素

2、A干預(yù)組(CT)。其中，正常對照組小鼠飼養(yǎng)于正常環(huán)境下(相對濕度：60％-80％；風(fēng)速：0m/s；溫度：21-23℃)，無任何干預(yù)。干眼對照組、海藻糖干預(yù)組和環(huán)孢霉素A干預(yù)組小鼠均飼養(yǎng)于正常環(huán)境下一周后放入智能環(huán)境控制系統(tǒng)(相對濕度：15±3％；風(fēng)速：2.1±0.2 m/s；溫度：21-23℃)內(nèi)3周。海藻糖干預(yù)組和環(huán)孢霉素A干預(yù)組小鼠放入智能環(huán)境控制系統(tǒng)前，正常環(huán)境下預(yù)防性用藥1周，滴雙眼，10μl/次，4次/天。放入智能環(huán)境控制系統(tǒng)

3、后按原方法持續(xù)給藥3周。海藻糖干預(yù)組和孢霉素A干預(yù)組小鼠所滴加的滴眼液分別為30mg/ml海藻糖滴眼液(Trehalose eyedrops，T2255)和0.05％環(huán)孢霉素A滴眼液(CyclosporinA eyedrops，CsA)。實驗進(jìn)行4周后，應(yīng)用角膜熒光素染色(Corneal fluorescein staining，CF)、免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemistry staining，IH)、掃描電子顯微鏡

4、(Scanning electron microscopy，SEM)和免疫熒光染色(Immunofluorescence staining，IF)等方法，觀測角膜屏障功能、眼表組織形態(tài)、凋亡標(biāo)志物表達(dá)以及結(jié)膜CD4陽性T細(xì)胞表達(dá)的改變。 結(jié)果： 與正常對照組相比，干眼對照組小鼠的角膜熒光素染色明顯增加(NCvs.NT=P<0.01)，角膜上皮細(xì)胞失去正常的形態(tài)與排列順序，厚度明顯變薄(28.23±1.67μm vs.20

5、.30±1.19μm；NC vs.NT；P<0.01)，表層脫落細(xì)胞增多，結(jié)膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，鱗狀化生增加，杯狀細(xì)胞密度顯著下降(superior：30±4 vs.19±3；inferior：32±4 vs.20±2；NC vs.NT；P<0.01)，caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)(corneal epithelium：5±1 vs.15±3；conjunctival epithelium：7±3 vs.30±4；NC vs.NT；P<

6、0.01)及結(jié)膜CD4陽性T細(xì)胞(CD4-positive T cells)表達(dá)顯著增加；海藻糖干預(yù)組和環(huán)孢霉素A干預(yù)組與干眼對照組比較，熒光素染色評分降低(TT or CT vs.NT；P<0.01 each group)，角膜上皮細(xì)胞接近正常的形態(tài)與排列順序，表層脫落細(xì)胞減少，角膜上皮厚度(27.01±0.97μm or26.2±1.14μm vs.20.30±1.19μm；TT or CTvs.NT；P<0.01 each gro

7、up)和結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著增加(superior：28±2 Of24±3 vs.30±4；inferior.30±4 or25±4 vs.32±4；TT or CT vs.NT；P<0.01 eachgroup)，眼表上皮caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)降低(corneal epithelium：7±2 or11±2 vs.5±1 TT or CT vs.NT；P<0.01 or P<0.05；conjunetival epitheliu

8、m：14±3 or22±4vs.7±3；TT or CT vs.NT；P<0.01 each group)。同時觀察到，在對結(jié)膜上皮鱗狀化生、杯狀細(xì)胞數(shù)量減少(superior or inferior；TT vs CT；P<0.05 each region)和眼表上皮凋亡(corneal or conjunctival epithelium；TT vs CT；P<0.05 or P<0.01 each region)的抑制程度上，海藻糖