水稻條紋病毒土傳媒介的研究.pdf

1、水稻條紋葉枯病(rice sripe)由水稻條紋病毒(rice stripe virus，RSV)引起，是當(dāng)前在我國水稻生產(chǎn)中分布廣，發(fā)生重，為害大的重要病毒病。近年來對我國水稻生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅和巨大的經(jīng)濟(jì)損失，被稱為水稻的“癌癥”。1963年我國在蘇南地區(qū)發(fā)生過，20世紀(jì)90年代在江蘇再次發(fā)生并爆發(fā)成災(zāi)，現(xiàn)已相繼蔓延至整個(gè)長江中下游稻區(qū)，據(jù)江蘇省植保站統(tǒng)計(jì)，僅2004年全省有42個(gè)縣發(fā)生水稻條紋葉枯病，波及面積達(dá)157萬hm2，占水稻

2、總栽培面積的79％，絕收面積達(dá)5200 hm2，目前已上升為水稻生產(chǎn)上最主要的病害之一。
　　 自水稻條紋葉枯病在中國有研究報(bào)道以來，學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)同水稻條紋葉枯病是由灰飛虱(Laodelphaxstriatellu)傳播的一種蟲媒病害，有關(guān)該病傳播途徑的研究也全部集中在灰飛虱上。然而，高效農(nóng)藥和連年高強(qiáng)度的殺蟲措施似乎并沒能遏制該病近年來加重的趨勢。
　　 我們在對稻麥多年輪作的試驗(yàn)田的中注意到，水稻條紋葉枯病不僅有逐年

3、加重的趨勢而且也具備一些與土傳病害類似的特征。為了確定水稻感條紋葉枯病毒病除了灰飛虱刺吸傳毒外，是否存在著土傳途徑，我們從南京農(nóng)業(yè)大學(xué)水稻所網(wǎng)室連年高發(fā)條紋葉枯病的稻池土壤中，分離出不同形態(tài)特征的菌株對所有這些菌株均以RSV的CP基因引物進(jìn)行了PCR檢查，發(fā)現(xiàn)有一個(gè)細(xì)菌菌株能擴(kuò)增出與發(fā)病水稻葉片RNA的RT-PCR產(chǎn)物類似的單一和清晰的990bp±的特異性條帶，而其余各種菌株都沒有相應(yīng)的PCR產(chǎn)物。將該菌株送兩家不同商業(yè)測序公司進(jìn)行細(xì)菌

4、16S-rRNA測序定名，兩家公司結(jié)果均為與Claryseobacterium aquaticum sp.nov.100％同源，確定該菌株為金黃桿菌屬的水生金黃桿菌。
　　 采用盆栽根系接種鑒定的方法，進(jìn)行了6次稻苗根系接種水生金黃桿菌試驗(yàn)，其中感條紋葉枯病品種(日本晴、R109、武育粳3號)共五次、抗條紋葉枯病品種(IR36)一次。接菌后逐日觀察記錄發(fā)病情況，結(jié)果顯示感病品種的5次接菌試驗(yàn)的4周發(fā)病株率為12.5-35.90％

5、發(fā)病時(shí)間持續(xù)12天左右；而5次不接菌對照的4周發(fā)病株率僅為1.4～9.3％。不同感病品種在不同時(shí)期的接種發(fā)病率沒有太大的波動。抗條紋葉枯病品種IR36無論接菌與否均不發(fā)病。這表明用水生金黃桿菌根部接種確能誘發(fā)水稻條紋葉枯病毒病，而抗病品種的抗條紋葉枯病基因?qū)τ诟拷泳脖憩F(xiàn)出了充分的抗病性。
　　 為了確定接種水生金黃桿菌后發(fā)病株是否有條紋葉枯病毒，我們對參試的所有植株都進(jìn)行了RT-PCR檢查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有接種試驗(yàn)的發(fā)病植株不僅

6、病狀與田間自然發(fā)病株相同，而且其病葉用RSV病毒的外殼蛋白基因引物都可以擴(kuò)出一條單一清晰的990 bp的條帶，用RSV病毒的毒蛋白基因引物都能擴(kuò)出500bp的條帶，這些條帶經(jīng)外送商業(yè)公司測序表明是對應(yīng)的條紋葉枯病毒序列。而不接菌對照和無典型心葉卷曲病狀的接菌后植株除有個(gè)別的能擴(kuò)出這兩條帶之外其余植株均沒有PCR產(chǎn)物。而從田中取得的發(fā)病植株不同部位的葉片，檢測其帶毒情況發(fā)現(xiàn)并非所有葉片都能檢測到，并且不同分蘗帶毒情況也不同。由此，猜測這也