水稻條紋病毒浙江分離物的研究.pdf

1、近年來，水稻條紋葉枯病在我國水稻種植區(qū)大范圍發(fā)生，尤以東部的江蘇、浙江兩省損失最為嚴(yán)重。本研究采集了浙江省7個市/縣的水稻條紋病毒顯癥病樣，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(enzyme linked immnosorbent assay，ELISA)、SDS-PAGE電泳、電子顯微鏡技術(shù)和RT-PCR技術(shù)鑒定，結(jié)果證明這7個分離物都與RSV江蘇分離物在血清學(xué)上有近源關(guān)系(RSV-Js)。在電子顯微鏡下，病毒粒子的形狀為3-10 nm寬、500-20

2、00 nm長且極度卷曲的柔絲體，在低濃度和合適緩沖液環(huán)境下可展開。經(jīng)SDS-PAGE電泳可見大小為35.5±0.5 kDa的蛋白帶，系RSV核衣殼蛋白(核蛋白質(zhì)或外殼蛋白)。同時，用純化的RSV病毒免疫小鼠和家兔，制備了高特異性的抗血清，利用這些抗血清設(shè)計了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測RSV的試驗方法。根據(jù)已知的RSV堿基序列，在大腸桿菌中表達(dá)了RSV浙江分離物的核衣殼蛋白；并利用RT-PCR技術(shù)成功克隆了RSV浙江分離物RNA1基因組，

3、測定了整個RNA1全序列。RSV浙江分離物RNA1全序列包含8968個核苷(nt)，且基因組結(jié)構(gòu)與其他RSV分離物相似。RSV-Zj的RNA1也只包含了一個大的開放閱讀體框(ORF)，能編碼一個含2919個氨基的酸pcl蛋白質(zhì)，分子量大小預(yù)計為337kDa。序列分析表明它與其它4個分離物RNA1的結(jié)構(gòu)相似，核苷酸同源性為92-97％：氨基酸同源性為97-99％；與同屬的其它成員的對應(yīng)蛋白相比，則同源性則較低，約在30-46％之間。結(jié)構(gòu)域