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文檔簡介
1、水稻條紋病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻條紋葉枯病是最重要的水稻病毒病之一,給我國水稻生產(chǎn)安全造成了巨大威脅。為了創(chuàng)制高抗RSV的水稻新種質(zhì),本研究首先根據(jù)天然microRNA(miRNA)的結(jié)構(gòu)特點和作用原理,針對水稻條紋葉枯病毒基因組設(shè)計了人工miRNA(artificial microRNA,amiRNA),同時克隆了miRNA528基因的前體(pre-miRNA)。應(yīng)用重疊PCR(over-lappi
2、ng)技術(shù)并以這個水稻天然miRNA前體作為骨架,構(gòu)建2個水稻轉(zhuǎn)化載體(pAmiR-1和pAmiR-2),其中載體pAmiR-1是針對RSV p3基因；載體pAmiR-2是針對RSV pc3基因。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將2個人工miRNA表達載體導(dǎo)入水稻品種武育粳3號,分子鑒定表明共獲得219株轉(zhuǎn)基因水稻植株。利用攜帶RSV的介體灰飛虱(Laodelphax striatellus,Fallen)對部分轉(zhuǎn)基因株系進行抗病毒鑒定,結(jié)果表明共有2
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