水稻條紋病毒NS2基因的分子變異及其原核表達.pdf

1、水稻條紋病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻條紋葉枯病是水稻上的一種重要病毒病,該病在中國的分布極為廣泛.為了豐富水稻條紋病毒的分子群體遺傳學,該研究對采自江蘇、河南、云南、山東、福建等病害發(fā)生區(qū)的24個分離物RSV RNA2片段上的NS2基因的分子變異情況進行了分析.24個分離物的病葉總RNA經(jīng)特異引物RT-PCR擴增后均獲得600bp左右的條帶.將PCR產(chǎn)物進行單鏈構象多態(tài)性(single-strand co

2、nformationpolymorphism,SSCP)電泳分析,結果表明,不同分離物的NS2基因條帶基本都呈現(xiàn)出差異.為了準確分析各分離物NS2基因間的變異情況,對這24個分離物進行了序列測定.對采自同一地區(qū)、不同年份的分離物的序列進行分析,發(fā)現(xiàn)云南省的分離物在年度間表現(xiàn)出相對較大的差異.相應地,對采自同一年份、不同地區(qū)的分離物也進行了序列分析,結果發(fā)現(xiàn),2002年的14個分離物NS2基因分子變異較大,其核苷酸序列的同源性為93.5％

3、-99.7％,氨基酸序列的同源性為93.5％-100％,而2003年的10個分離物的分子變異較小,其核苷酸與氨基酸序列同源性均大于97.0％.這可能與分離物不同地理來源有關.該研究構建了含RSVNS2基因的融合蛋白原核表達載體,并在大腸桿菌(E.coli DH5α)中成功地進行了表達,為今后研究RSV NS2蛋白在病毒生命周期中的作用奠定基礎.SDS-PAGE分析表明表達的融合蛋白GST-NS2相對分子量約為49,000.Western