柞蠶細胞色素P450基因CYP4G25序列的克隆與表達分析.pdf

1、細胞色素P450單加氧酶系(cytochrome P450 monooxygenases，P450s)為廣泛分布于生物有機體內的重要酶系。細胞色素P450基因起源于35億年前的一個共同祖先，是最古老和最龐大的超基因家族之一。細胞色素P450參與許多重要的生命過程，對動物、植物、真菌和細菌等的研究表明許多不同催化反應都有細胞色素P450的參與。對于昆蟲而言，細胞色素P450在昆蟲的生命活動中起著十分重要的作用：主要涉及生長、發(fā)育、取食等過

2、程，其對異生物質的代謝特性導致了昆蟲對殺蟲劑的抗藥性和對植物有毒物質的耐受性，它還參與了昆蟲體內保幼激素、蛻皮激素和脂肪酸等內源化合物的合成與代謝，具有重要的生物學和遺傳學意義。
　　 柞蠶是一種正在開發(fā)的野生絹絲昆蟲，屬于鱗翅目、大蠶蛾科、柞蠶屬的泌絲昆蟲。除了作為紡織工業(yè)原料利用外，還有很高的藥用和食用等經濟價值。利用分子生物學和生物信息學方法對柞蠶P450基因進行研究，獲得的主要結果如下：
　　 1．CYP4G25

3、基因的克隆及序列分析：
　　 采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆獲得了1個P450新基因CYP4G25的全長序列。CYP4G25全長2112bp，GenBank登錄號為GU205081，包括由111個核苷酸組成的5’端非編碼區(qū)(5’UTR)、由1674個核苷酸組成的ORF(開放閱讀框)編碼557個氨基酸，分子量大小為63.6KD和等電點為8.6，以及由326個核苷酸組成的3’端非編碼區(qū)(3’UTR)。通過生物在線網站Ex

4、pasy分析氨基酸序列：含有血紅素結合位點，螺旋I、螺旋K、螺旋C以及N 端含有由22個疏水氨基酸組成的跨膜錨定區(qū)域。構建系統(tǒng)進化樹分析得到柞蠶和天蠶親緣關系最近。
　　 2.CYP4G25基因的表達分析：
　　 提取柞蠶不同時期和不同組織的總RNA，以M-MLV反轉錄第一鏈cDNA，以柞蠶Actin基因做內參，進行了半定量RT-PCR。實驗結果顯示，選取的組織基本都有表達，在脂肪體、表皮。中腸、血液、絲腺、觸角、精巢和