與氰戊菊酯抗性相關(guān)的棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因的克隆及異源表達(dá).pdf

1、　　一、氧化解毒代謝增強(qiáng)在棉鈴蟲對(duì)氰戊菊酯抗性中的作用　　該結(jié)果表明，氧化酶解毒代謝增強(qiáng)在YGF和YGYP兩個(gè)抗性品系對(duì)擬除蟲菊酯的抗性中均起主要作用，酯酶解毒代謝也參與其中。并證實(shí)了細(xì)胞色素P450氧化酶在棉鈴蟲對(duì)氰戊菊酯代謝抗性中的關(guān)鍵作用。 二、棉鈴蟲細(xì)胞色素P450O-脫甲基活性與對(duì)氰戊菊酯抗性的關(guān)系　　評(píng)價(jià)了六種增溶劑Chaps、Polyoxyethyleneetherw-1、膽酸鈉、Emulgen911、Emul

2、gen913、Triton-X100對(duì)YGF抗性品系棉鈴蟲細(xì)胞色素P450氧化酶O-脫甲基活性(PNOD)的影響，確定Polyoxyethyleneetherw-1可以作為棉鈴蟲細(xì)胞色素P450氧化酶PNOD活性檢測(cè)的有效增溶劑，從而改進(jìn)了棉鈴蟲細(xì)胞色素P450氧化酶PNOD活性測(cè)定方法。　　采用改進(jìn)的棉鈴蟲細(xì)胞色素P450氧化酶PNOD測(cè)定方法，檢測(cè)了對(duì)氰戊菊酯具有不同抗性水平的5個(gè)棉鈴蟲品系的單頭4齡末期幼蟲細(xì)胞色素P450氧化酶

3、PNOD活性，分析了棉鈴蟲細(xì)胞色素P450氧化酶PNOD與對(duì)氰戊菊酯抗性的關(guān)系。 三、棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因克隆及mRNA差異表達(dá)　　采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)，從棉鈴蟲氰戊菊酯高抗品系YGF脂肪體中克隆了三個(gè)新的細(xì)胞色素P450全長(zhǎng)基因。結(jié)果表明，CYP9A12+CYP17v2(由于CYP9A12和CYP17v2的同源性為94﹪，半定量RT-PCR引物不能將兩基因分開)和CYP9A14在抗性品系YGF中均過(guò)量表

4、達(dá)，表達(dá)量分別是德國(guó)敏感品系SCD的10.2和7.9倍。特定的一個(gè)或幾個(gè)細(xì)胞色素P450基因的組成型過(guò)量表達(dá)可能導(dǎo)致棉鈴蟲對(duì)氰戊菊酯氧化解毒代謝的增強(qiáng)。 四、棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因異源表達(dá)　　本文選用酵母(Saccharomycescerevusiae)系統(tǒng)異源表達(dá)了CYP9A12、CYP9A14和CYP9A17v2基因，分析了這三個(gè)基因的異源表達(dá)產(chǎn)物對(duì)模式底物的氧化代謝作用(PNOD，ECOD和MROD)及對(duì)溴氰菊酯的離