褐飛虱CYP4、6家族P450基因的克隆及表達(dá)研究.pdf

1、褐飛虱(Nilaparvata lugens Stal.)是水稻的主要害蟲之一，其發(fā)生與危害嚴(yán)重影響稻谷的產(chǎn)量。褐飛虱能很快適應(yīng)水稻新品種，往往導(dǎo)致抗性水稻品種的推廣和應(yīng)用受到制約；此外，由于褐飛虱防治長(zhǎng)期以化學(xué)防治為主，使褐飛虱對(duì)許多農(nóng)藥產(chǎn)生了抗性。昆蟲的CYP4、CYP6家族的P450常被報(bào)道受植物次生物質(zhì)和殺蟲劑的誘導(dǎo)，并參與相應(yīng)底物的代謝。為深入研究褐飛虱細(xì)胞色素P450的解毒機(jī)制，我們開展了有關(guān)褐飛虱細(xì)胞色素P450的研究工作

2、，現(xiàn)總結(jié)如下：
　　 1.褐飛虱P450基因的克隆和序列分析
　　 采用簡(jiǎn)并RT-PCR技術(shù)與RACE技術(shù)相結(jié)合，克隆了褐飛虱的三個(gè)P450cDNA全長(zhǎng)：CYP4C62、CYP4CE1、CYP6CS1。其中CYP4C62全長(zhǎng)為2146bp，有48bp的5’端非翻譯區(qū)，535bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼520個(gè)氨基酸的多肽。CYP4CE1全長(zhǎng)為2160bp，有372bp的5’端非翻譯區(qū)，160bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼541

3、個(gè)氨基酸的多肽。CYP6CS1全長(zhǎng)為2700bp，有89bp的5’端非翻譯區(qū)，1063bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼515個(gè)氨基酸的多肽。三個(gè)新的P450基因的氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，它們都含有昆蟲P450基因的保守特征序列如螺旋K的保守序列W---R，血紅素結(jié)合區(qū)F--G-R-C-G/A等。氨基酸序列相似性分析表明，CYP4C62與CYP4CE1有38％的同源性。CYP6CS1與黑鳳蝶的CYP681具有較高的同源性。
　　 2.取食抗

4、性水稻褐飛虱的mRNA表達(dá)量的比較
　　 以B-actin為參照基因，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)比較褐飛虱CYP4C62、CYP4CE1、CYP6CS1三個(gè)基因在取食感蟲水稻與抗性水稻后的表達(dá)量差異。結(jié)果表明，取食抗性水稻后，CYP4CE1有1.8倍的過(guò)量表達(dá)，而CYP6CS1有接近70倍的過(guò)量表達(dá)，CYP4C62則沒有過(guò)量表達(dá)。由此推斷CYP4CE1、CYP6CS1可能參與了水稻次生物質(zhì)的代謝。
　　 3.褐飛虱P45