利用AEI對P450家族及ITGA2的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、由于等位基因表達(dá)差異(allele expression imbalance，AEI)能夠比較靈敏的反映順式調(diào)控因素對于表達(dá)的作用，因此可以作為檢測及確認(rèn)順式功能元件的技術(shù)手段。在本項(xiàng)研究中，我們利用AEI對P450基因家族及ITGA2的順式元件進(jìn)行了研究，并衡量了其他調(diào)控因素對于表達(dá)的作用。
　　 第一部分：P450酶的個體活性差異是藥物毒副作用發(fā)生的一個重要原因。其中在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)差異是造成酶活性個體差異的一個重要原因。

2、在本研究中，我們利用96例正常中國人肝臟樣本，對7個主要的P450基因(CYP1A1、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP3A5)的表達(dá)量進(jìn)行了檢測，并研究了各種因素對于表達(dá)產(chǎn)生的影響。發(fā)現(xiàn)總體調(diào)控因素、P450特異調(diào)控因子及環(huán)境因素是造成P450基因表達(dá)個體差異的主要原因。順式調(diào)控的因素在CYP2D6、CYP1A1、CYP1A2和CYP2C19基因的表達(dá)中被觀察到。其中rs2267477與拷貝

3、數(shù)的變異是CYP2D6基因表達(dá)的主要調(diào)控因素。
　　 第二部分：等位基因表達(dá)差異是檢測順式功能元件的有力手段，在CYP1A1和CYP1A2中，我們利用AEI來檢測順式調(diào)控位點(diǎn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了4個候選功能位點(diǎn)：rS4646418，rs4646422，rs096521和rs762551。對rs4646418我們以瞬時轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了功能驗(yàn)證，通過體外實(shí)驗(yàn)證明了該位點(diǎn)所具有的調(diào)控功能。
　　 第三部分：冠心病是心力衰竭的最主要原因，

4、是全球致死率及致殘率最高的疾病。ITGA2基因的表達(dá)水平可以影響到血小板與I型膠原蛋白的結(jié)合，因此被認(rèn)為與CAD的發(fā)生具有相關(guān)關(guān)系。在本項(xiàng)研究中，我們對ITGA2基因區(qū)域內(nèi)的48個SNP(己報道位點(diǎn)及利用LD選擇的位點(diǎn))進(jìn)行了分型，檢測了這些位點(diǎn)與ITGA2基因的表達(dá)水平和AEI的相關(guān)性。最終確定了rs246409為候選功能位點(diǎn)。但后續(xù)480/480病例/對照中進(jìn)行的關(guān)聯(lián)分析提示該位點(diǎn)與CAD的易感性沒有顯著相關(guān)，提示ITGA2可能并不