14760.紅色熒光蛋白mcherry中插入外源短肽位點(diǎn)的研究

1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonSitesoftheToleratePeptideInsertionintheFluorescentProteinofmCherryByJuntingLiangSupervisor：ProfZhenJiaoBiophysics●PhysicalEngineeringCollegeMa

2、y2013摘要摘要自熒光蛋白問世以來，研究人員已從生物體內(nèi)分離出多種熒光蛋白及在此基礎(chǔ)上利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)化出幾乎覆蓋整個(gè)熒光光譜的突變體，并廣泛應(yīng)用到分子生物學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)，生物醫(yī)學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域。同時(shí)，熒光蛋白的研究與熒光顯微技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生諸如FRET(熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù))，BiFC(雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù))，光漂白技術(shù)，熒光蛋白標(biāo)簽，熒光蛋白傳感器，熒光計(jì)時(shí)器等新技術(shù)，使熒光蛋白成為生物學(xué)研究領(lǐng)域中不可或缺的工具之一

3、。本研究采用噬菌體Mu轉(zhuǎn)座子突變系統(tǒng)將外源基因隨機(jī)插入到熒光蛋白mCherry中，然后利用流式細(xì)胞分選技術(shù)，成功篩選出13個(gè)mCherry突變體。流式篩選得到的13個(gè)突變體其外源短肽插入位置不同，分別位于mCherry氨基酸序列的第K9，E10，F(xiàn)11，F(xiàn)65，G90，G116，K121，E148，M150，L157，G171，V187，T223氨基酸殘基位置處，分別命名為m9，m10，m11，m65，m90，m116，m121，m14

4、8，m150，m157，m171，m187，m223。這些mCherry突變體經(jīng)波長為587hi／1激發(fā)光照射，仍然發(fā)出較弱的紅色熒光，但熒光強(qiáng)度各異。mCherry突變體中短肽插入位點(diǎn)分布不同，導(dǎo)致其熒光強(qiáng)度相差甚大。其中插入位點(diǎn)在蛋白C／N端附近的突變體如m9，m10，ml1，m223熒光強(qiáng)度最亮；插入位點(diǎn)分布在熒光蛋白Loop結(jié)構(gòu)內(nèi)的突變體如m90，ml16，m171，m187熒光較亮；分布在6折疊柱上的突變體m121，m148，