應(yīng)用紅色熒光蛋白建立外源基因水稻胚乳特異刪除系統(tǒng)的初步研究.pdf

1、為建立高效實(shí)用的水稻胚乳外源基因特異刪除系統(tǒng)，本研究首先通過含有載體p1300ActRedTnos和p1300Gt1RedTnos的轉(zhuǎn)基因水稻，驗(yàn)證外源紅色熒光蛋白(DsRed2)在水稻各組織特別是胚乳中的表達(dá)情況，證明了應(yīng)用DsRed2檢測水稻胚乳外源基因刪除與否的可行性。
　　 根據(jù)水稻遺傳密碼子的偏好性改造并重新合成了重組酶基因Crein、CreM和Flp，由水稻胚乳特異啟動(dòng)子Gt1調(diào)控，以融合的LoxP/Frt序列為識(shí)別

2、位點(diǎn)，DsRed2為報(bào)告基因分別構(gòu)建了用于自刪除途徑的表達(dá)載體6個(gè)和雜交刪除途徑的表達(dá)載體5個(gè)，并獲得相應(yīng)的轉(zhuǎn)化植株。轉(zhuǎn)p1300LF-ART-GFT植株(刪除后胚乳不表達(dá)DsRed2，其他器官表達(dá)DsRed2)和轉(zhuǎn)p1300ART-LF-GFT植株(刪除后胚乳表達(dá)DsRed2，其他器官不表達(dá)DsRed2)的T0代種子的RFP檢測結(jié)果都表明，胚乳中有刪除作用發(fā)生，初步判斷重組酶Flp可以介導(dǎo)胚乳中外源基因的剔除。但外源基因刪除是否完全以