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1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒載體介導(dǎo)紅色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞的研究姓名:宋濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):泌尿外科學(xué)指導(dǎo)教師:楊曉峰20090501山西醫(yī)科大學(xué)七年制臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文Thestudyoftransfectionexperimentofhumanbladdercarcinomacel1mediatedbyLentiviralvectortagged‘t1RFPCaralnomacemecllateclDyent
2、lVlravectortaggedW111tgeneABSTRACTObjective:tostudythepossibilityoftheRedFluorescentProtein(RFP)geneactsasReporterGeneinlivecells,wespeciallyconstructtherecombinationthree—plasmidlentiviralvectorstaggedwithRFP,andtransfe
3、ctthehumanbladdercarcinommercell(BCC),T一24cell1ineObservetheresultafterthetransfectionaccomplishedundertheConfocalLaserFluoresecenceMicroscopyMethod:Totransfectthe293Tcel1withtheviralpackagingcel1byusingtheRFP—Lentivirus
4、recombination(LVCMV—RFP)andbothpHelper10andpHelper20vectorsaccordingtotheLipofectamine2000methodAfterincubatingthemfor34days,harvestandrefinethevirussolutionFetchthesolution,ingatherandconcentratethevirussolutionPackages
5、omeofthematthetemperatureof一80℃forlong—termsavingTheleftsolutionwasleftforthetitertestbytheReal—TimewayorholedilutionwayCulturetheT24cell1inein96WellPlatesandvirusofspecifiCconcentrationintheairincubatorindifferentMOIpro
6、portionfor72—’96hourstogropethebestconditionfortransfectingTransfectthetargetcellrepeatlyaccordingtheresultofthepre—testaboveObservethecel1SundertheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopywiththe558nmexcitingwavelengthand583
7、nmemitingwavelengthIdentifyingtheexpressionofRFPgeneandtransfectionefficiencybyFlowCytometryAfterthatCO—culturetheT一24cellandtransfectedT一24cel1toobservetheirgrowingpropertyResult:Successfullyconstructingtherecombination
8、ofthree——plasmidlentiviralvectorstaggedwithRFPAftertransfectingthecarcinomacell1ine,thecell1inestronglyemittheredfluorescenceundertheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopyConclusion:Ds—RedgenecansuccessfullyexpressinT一24ce
9、llinformofthree—plasmidlentiviralvectors,SOthelivecarcinomacellScanbediredtlyvisualizedbytheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopyviatheredfluoresecentoftransfectedcellSthemselvesItiSsuggestedthatDs—Redgenebeafavourablerep
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