慢病毒載體介導(dǎo)的OPG基因體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：
　　 用含有骨保護(hù)素(OPG)的慢病毒載體(PGC-FU-OPG-RFP)轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，觀察其對(duì)細(xì)胞活性的影響及表達(dá)情況。
　　 方法：
　　 選取清潔級(jí)4周齡SD大鼠，雌雄不限，無(wú)菌條件下取脛骨和股骨，進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。培養(yǎng)到第三代時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，設(shè)立未轉(zhuǎn)染對(duì)照組、空慢病毒載體組、含OPG慢病毒載體組。未轉(zhuǎn)染對(duì)照組未經(jīng)特殊處理，空慢病毒載體組轉(zhuǎn)染PGC-FU-RFP

2、，含OPG慢病毒載體組轉(zhuǎn)染PGC-FU-OPG-RFP。轉(zhuǎn)染后48h，免疫熒光顯微鏡觀察熒光表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)慢病毒的轉(zhuǎn)染效率；用MTT法評(píng)價(jià)慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)BMSCs增殖的影響；用Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．成功培養(yǎng)出第三代SD大鼠BMSCs，貼壁的BMSCs散在分布于瓶底，呈長(zhǎng)梭形、多角形，生長(zhǎng)良好。
　　 2．按10、50、100的感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染第3代骨

3、髓間充質(zhì)干細(xì)胞,48小時(shí)后免疫熒光顯微鏡觀察可見(jiàn)紅色熒光蛋白表達(dá)，未轉(zhuǎn)染組未見(jiàn)表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)慢病毒的轉(zhuǎn)染效率分別為12.0％、41.8％、70.0％。
　　 3．MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖狀態(tài)良好，細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯改變,3組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　 4．Western Blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染PGC-FU-OPG-RFP組72kDa處有條特征帶，其大小等于OPG-RFP融合蛋白(～44kDa+28