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文檔簡介
1、[背景]:目前，COX-2基因沉默在干細胞中的研究還處在初級階段。
[目的]:構建攜帶COX-2基因沉默的慢病毒載體，觀察其在人骨髓間充質干細胞中的表達，以及其定向分化潛能變化情況。
[方法]:應用重組慢病毒技術構建攜帶沉默COX-2基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體，并用其轉染體外培養(yǎng)第3代的人骨髓間充質干細胞，以無目的基因的慢病毒轉染人骨髓間充質干細胞和未做處理的人骨髓間充質干細胞分別作為陰性對照組和空白組進行對比。
2、轉染后7天分別提取各組細胞的總RNA和蛋白檢測COX-2表達量。對COX-2基因沉默的人骨髓間充質干細胞和正常人骨髓間充質干細胞定向誘導，觀察COX-2基因沉默對人骨髓間充質干細胞成脂、成骨、成軟骨能力的影響。
[結果與結論]:慢病毒轉染3d后，熒光顯微鏡下可見人骨髓間充質干細胞發(fā)出綠色熒光，陰性對照組轉染效率可達90％以上，實驗組轉染效率達85％以上。RT-PCR和Western blot檢測結果顯示，COX-2基因在人骨髓
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